专利名称：手性分离色谱柱的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种手性分离色谱柱，特别涉及一种分离对映异构体的色谱柱，属于 手性化合物分离技术领域。
背景技术：
立体异构体是指分子中的原子在空间定向彼此不同的分子，其中的一类为对映异 构体，所谓对映异构体即一对彼此互为镜像的分子。表征特定立体异构体的原子的特定排 列称作其光学构象，特定地由已知的次序规则来表示，例如+、一(也用D、L)或(R或S)。
尽管只是原子在空间定向彼此不同，但立体异构现象的实际作用是很重要的。例 如许多化合物的生理和药物活性受到了其所包括的特定构象的强烈影响。因此，许多化合 物仅在以给定的立体异构体形式使用时才有广泛的应用。
物体与其镜像不能叠合的现象叫做手性。碳原子在形成有机分子的时候，4个原子 或基团可以通过4根共价键形成三维的空间结构，由于相连的原子或基团不同，它会形成 两种分子结构，它们之间象是镜子里和镜子外的物体那样，看上去互为对应，但是它们的三 维空间结构不管怎样旋转都不会重合，就像左手和右手那样，所以称这两种分子叫手性分 子。
手性是人类赖以生存的自然界的本质属性之一。生命现象中的化学过程都是在高 度不对称的环境中进行的。生物大分子如蛋白质、多糖、核酸等，都有手性，它们在生物体内 造成手性环境。除细菌等意外的蛋白质都是由左旋的L-氨基酸组成；多糖和核酸中的糖则 是右旋的D-构型；在机体的代谢和调控过程中所涉及的物质，如酶和细胞表面的受体，一 般也都具有手性，它们在生物体内造成手性环境。正是因为这种立体化学的手性特征，使生 命体系通常对药物，杀虫剂或味觉和嗅觉化合物中的一对对映异构体(光学异构体)，表现 出不同的生物反应。
手性药物进入生物体内后，其药理作用多与它和体内靶分子之间的手性匹配和分 子识别能力相关。因此含手性的药物，不同的对映异构体显示出不同的药理作用和毒副作 用。已发现很多手性化合物的对映异构体具有不同的生理活性，例如D-苯异丙胺是一种 十分有效的中枢神经兴奋剂，而它的异构体几乎没有药效，普萘诺尔的L-异构体比D-异构 体的生物活性高100倍。有些手性药物的两种对映体有完全不同的药理作用，如曲托喹酚 的S异构体是支气管扩张剂，R异构体则有抑制血小板凝聚的药理作用。有些对映体还会 引起毒副作用，一个灾难性的例子是反应停(thalidomide，沙利度胺)的使用，其早在1960 年用作镇静和安眠药，用于治疗妊娠期的不良反应，但是后来发现，怀孕早期的妇女服用此 药会引起胎儿严重畸形，使该药停止使用。1979年发现，仅R- ( + )对映体沙利度胺具有镇 静和安眠作用。而S- (_)对映体对胎儿有致畸作用，而且这种对映体对镇静或安眠并不重 要。因此，如果单独服用(R)- ( + )对映异构体，就不会产生致畸作用，这种药或许还可能继 续使用。
目前，大约有60%以上的处方药分子中含有一个或多个不对称中心，而这类手性药物中的绝大多数是以外消旋的形式在市场销售。由于要得到两种光学纯的对映体十分困 难，所以对映体药物药理活性差别没有经过充分的研究。这些药物中，对映体的一种可能对 病人可能无用或者甚至有害，为了准确了解药效和安全用药，美国食品药品管理局(FDA)提 出新的法规，要求申报手性药物时必须要对不同异构体的生理作用阐述清楚。
目前，通常由以下三种方法获得单一对映体的手性化合物1、手性源合成法；2、 不对称合成法；3、外消旋体拆分法。外消旋体拆分法又可具体分为(1)、化学拆分法；(2)、 酶或微生物法、(3)、色谱拆分法。色谱拆分法包括高效液相色谱法、气象色谱法、薄层色谱 法、超临界色谱法、毛细管电泳法以及逆流色谱-离心分配色谱法。在这些色谱法中，高效 液相色谱法不会因为高温而使溶质构型发生变化和失去生物活性，贮容量高，具有发展成 实验和工业规模对映体制备分离的巨大潜力。液相色谱法手性拆分依据其原理可分为以下 三种类型1、手性衍生化法；2、手性流动相法；3、手性固定相法。发明内容
本发明提供一种手性分离色谱柱。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是一种手性分离色谱柱，所述色谱柱的 固定相为符合下列通式的化合物载体一(CH2)m- NHCO 一手性氨基酸基团一 NH - (CH2)n- NH 一手性氨基酸基团一 CONH - (CH2)。一载体；其中，m = 2 12 ;n = 2 12 ;0 = 2 12 ；所述载体为硅胶；所述手性氨基酸基团是 手性氨基酸中的氨基失去H、羧基失去OH后剩下的基团。
上述技术方案中的有关内容解释如下1、上述方案中，所述手性氨基酸是α-氨基酸，且α碳原子为手性碳原子。
2、上述方案中，所述氨基酸为L-异亮氨酸。
本发明工作原理是本发明就是利用手性固定相法的手性色谱柱，基于样品与固 定相表面的手性选择剂形成暂时的非对映体配合物的能量差异或稳定性不同而达到手性 分离。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点和效果1、本发明得到的固定相在有机溶剂中性质稳定，因此可以较宽范围地选择流动相条 件。对于一些待拆分外消旋化合物，本发明试图当作流动相来拆分时，也可以实现有效地分1 O
2、本发明的手性选择器与分析物形成了有吸引力的氢键、或者是它们与分析物之 间具有有吸引力的极性相互作用。此外，在分析物和手性选择器之间的空间相互作用也是 重要的。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述
实施例一一种手性分离色谱柱一、手性分离色谱柱的制备第一步冰水浴下，在盛有1. OL去离子水的2. OL的三颈瓶中加入60g的NaOH，搅拌溶解，再加入196. 5g的L-IleCOOH (L-异亮氨酸)，搅拌全溶后，同时滴加255. Sg的苄氧酰氯 (苄氧甲酰氯)和60gNa0H的IOOml去离子水溶液(将60gNa0H溶解于IOOml的去离子水)， 滴加完毕后，室温搅拌12小时。用500ml的乙醚分两次洗涤水相，在冰水浴下往洗涤后的 水相中，快速搅拌下缓慢加入浓盐酸，调节PH值为酸性，在冰水浴中静止分层，分出油层， 水相用500ml的乙酸乙酯分次萃取，合并有机相后用无水Na2SO4干燥，滤去硫酸钠，旋转蒸 发除去乙酸乙酯，然后趁热加入500ml的CCl4，溶解，等冷却后，加入到冰水浴冷却的1.0L 的石油醚中，静置分层后，除去上面澄清液体，下面的固体用真空干燥。
第二步称取沈.Og第一步得到的产物置放于三颈瓶中，加入250ml的乙酸乙酯加 热搅拌溶解。冰浴下加入23. Og的DCC(Dicyclohexylcarbodiimide，二环己基碳二亚胺)， 搅拌1小时，后加入2. Oml的三乙胺，称取10. Og的十二二胺溶解于200ml氯仿，然后缓慢 加入到混合液中，冰浴搅拌2小时。然后室温下搅拌1. 5小时，45°C下搅拌48小时，60°C下 搅拌3小时。加入2. Oml醋酸，搅拌1小时。热过滤，冷却结晶，抽滤。滤液在水浴锅中蒸 去部分溶剂浓缩，冷却结晶。抽滤。滤液重新再在水浴锅中蒸去溶剂，冷却结晶。抽滤。把 所有得到的晶体用正丙醇溶解，冷却重结晶，抽滤。
第三步250ml的三颈瓶中加入10. Og第二步制得的晶体，加热溶解，冷却后析出， 加入少量用乙醇稀释的Pd/c (催化剂)，往瓶中通N2气赶走瓶中的空气，改成通入H2气反 应，如有析出，加热溶解，当冷却后没有析出时，停止反应，抽滤两次除去Pd/C，滤液浓缩干 后，加入THF (四氢呋喃)溶解，然后倒入冰水冷却的石油醚中，析出白色沉淀，抽滤。
第四步在通氮气的条件向反应瓶中加入2. Og第三步制得的产物，然后加入 IOOml除过水的四氢呋喃，加热溶解，冷却到室温后没有析出。从滴液漏斗中慢慢滴加用四 氢呋喃稀释的2. 6g3-异氰基丙基三乙氧基硅烷。反应在室温下过夜，在氮气保护滤去溶 液。
第五步(1 )、取2. 5g硅胶球，加入圆底烧瓶，再加入适量的浓盐酸，加热回流2小 时。加氢氧化钠溶液适量以中和酸，然后降温。
(2)、过滤，水洗固体至pH=7。
(3)、用适量丙酮冲洗固体3次，然后用乙醚冲洗固体2 3次，之后抽干。
(4)、取200mg单体样品(第四步得到的样品)于单颈瓶中，加入已经处理的硅胶球， 再加入适量甲苯，在单颈瓶上连接分水器，分水器上连接球形冷凝管，加热回流分水12小 时左右。
(5)、过滤，之后用丙酮，乙醚依次冲洗固体。
(6)、抽干固体。用标准勻浆填充法将所得到的手性固定相装入3mmX250mmHPLC柱中。
二、得到的固定相的结构式如下式所示— O “
三、手性分离色谱柱的应用使用制得的3mmX 250mmHPLC柱，用高效液相方法分离外消旋化合物苯异丙胺，分离效 率达到99%。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人 士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明 精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种手性分离色谱柱，其特征在于所述色谱柱的固定相为符合下列通式的化合物载体一(CH2)m — NHCO 一手性氨基酸基团一 NH - (CH2)n- NH 一手性氨基酸基团一 CONH - (CH2)。一载体；其中，m = 2 12 ;n = 2 12 ;0 = 2 12 ；所述载体为硅胶；所述手性氨基酸基团是 手性氨基酸中的氨基失去H、羧基失去OH后剩下的基团。
2.根据权利要求1所述的手性分离色谱柱，其特征在于所述手性氨基酸是α-氨基 酸，且α碳原子为手性碳原子。
3.根据权利要求2所述的手性分离色谱柱，其特征在于所述手性氨基酸为L-异亮氨酸。
全文摘要
一种手性分离色谱柱，所述色谱柱的固定相为符合下列通式的化合物载体－(CH2)m－NHCO－手性氨基酸基团－NH－(CH2)n－NH－手性氨基酸基团－CONH－(CH2)o－载体。其中，m＝2～12；n＝2～12；o＝2～12；所述载体为硅胶；所述手性氨基酸基团是手性氨基酸中的氨基失去H、羧基失去OH后剩下的基团。本发明得到的固定相在有机溶剂中性质稳定。用之分离手性化合物效率高。
文档编号B01D15/22GK102039060SQ20101053522
公开日2011年5月4日 申请日期2010年11月9日 优先权日2010年11月9日
发明者李艺, 薛珍 申请人:苏州清安生物科技有限公司