一种外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法
【专利摘要】本发明公开了一种外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法：将有机溶剂A、有机溶剂B与含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液按照体积比1～9:1～9:10组成溶剂体系，混合均匀，静置分层，分液得到有机相和水相；将外消旋α-环戊基扁桃酸用所得有机相溶解，制成样品；采用高速逆流色谱法拆分外消旋α-环戊基扁桃酸，从收集的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收，分别得到右旋α-环戊基扁桃酸单体和左旋α-环戊基扁桃酸单体；本发明首次采用逆流色谱拆分外消旋α-环戊基扁桃酸，并且该方法适用于各种型号的制备型逆流色谱仪，分离得到的左旋和右旋α-环戊基扁桃酸单体，纯度均大于98%，回收率大于90%。
【专利说明】一种外消旋ct -环戊基扁桃酸的手性拆分方法
(-)【技术领域】[0001]本发明涉及一种外消旋体的拆分方法，具体涉及一种从外消旋α -环戊基扁桃酸中拆分出左旋α-环戊基扁桃酸和右旋α-环戊基扁桃酸的方法。
(二)【背景技术】
[0002]α -环戊基扁桃酸是一类重要的药物中间体，可用于合成多种Μ受体拮抗剂如盐酸苯环壬酯等，这些药物的疗效与叔羟基手性碳的立体构型有重要的关系。获得光学纯的α-环戊基扁桃酸是也是药物合成的必然要求。因此，对外消旋α-环戊基扁桃酸进行手性拆分研究，建立快速、有效的拆分方法是一个具有理论及实际意义的课题。
[0003]对于手性药物，其对映异构体具有相同的理化性质，但是通常会表现出不同的生物活性，可能只有一个异构体是有效的，而另一个异构体是无效甚至是有害的，这使得获得纯的对映体显得尤为重要。
[0004]用色谱方法进行手性化合物的分离是分离科学领域中的重要手段之一，而高速逆流色谱技术(high speed countercurrent chromatography, HSCCC)作为 20 世纪 80 年代发展起来的一种新型液-液分配色谱技术，除了可避免气、液相色谱中因不可逆吸附引起的样品损失、失活和变性等问题外，还具有一次性分离制备量大、仪器简单易维修、运行成本低等优点，在手性化合物的分离制备中有着独特的优势。
(三)
【发明内容】
[0005]本发明目的是提供一种采用高速逆流色谱技术拆分外消旋α -环戊基扁桃酸的方法。
[0006]为实现上述发明目的，本发明以外消旋α -环戊基扁桃酸为拆分对象，以羟丙基_β -环糊精作为手性试剂，将其添加到水相中，采用液-液分配手性萃取拆分的方法筛选溶剂体系，并用高速逆流色谱法得到左旋α-环戊基扁桃酸和右旋α-环戊基扁桃酸。
[0007]本发明采用的技术方案是:
[0008]一种外消旋α -环戊基扁桃酸的手性拆分方法，所述方法按如下步骤进行:
[0009]( 1)将有机溶剂Α、有机溶剂Β与含有羟丙基-β -环糊精的磷酸盐缓冲液按照体积比1~9:1~9:10组成溶剂体系，混合均匀，静置分层，分液得到有机相和水相；所述羟丙基- β -环糊精的取代度为4.5~8.0 ;所述含有羟丙基- β -环糊精的磷酸盐缓冲液的pH值为2.0~8.0 ;所述含有羟丙基- β -环糊精的磷酸盐缓冲液中羟丙基- β -环糊精的浓度为0.02~0.40mol/L ;所述有机溶剂A为C1~C8的烷烃；所述有机溶剂B为C2~C8的醚或C3~C8的酯类；
[0010](2)将外消旋α-环戊基扁桃酸用步骤(1)所得的有机相溶解，制成样品；
[0011](3)采用高速逆流色谱法拆分外消旋α -环戊基扁桃酸:以步骤(1)得到的有机相为固定相，水相为流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为2~35°C，开启速度控制器，转速为200~2000rpm，以0.1~3.0mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，即当流动相从色谱柱出口处流出时，将步骤(2)制得的样品由进样阀进样，紫外检测器在波长190~400nm下检测流出液，按照时间梯度，用自动部份收集器分别收集30min到200min之间梯度时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液；所述前峰是指对映体双峰中先出来的主峰，所述后峰是指对映体双峰中后出来的主峰；
[0012](4)从步骤(3)中收集得到的前峰洗脱液中回收，得到右旋α-环戊基扁桃酸单体；从步骤(3)中收集得到的后峰洗脱液中回收，得到左旋α-环戊基扁桃酸单体。
[0013]本发明外消旋α -环戊基扁桃酸的手性拆分方法步骤(1)中，优选所述有机溶剂A为正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷或石油醚；优选所述有机溶剂B为乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯或甲酸乙酯；优选所述的含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液的pH值为2.0~4.0 ;优选所述的含有羟丙基-β -环糊精的磷酸盐缓冲液中羟丙基-环糊精的浓度为0.05~0.40mol/L ;优选所述羟丙基-β -环糊精的取代度为5.5~8.0。[0014]本发明步骤(1)中，优选所述溶剂体系为正己烷、甲基叔丁基醚与pH值为2.7的含羟丙基-β -环糊精的磷酸盐缓冲液以体积比9:1:10混合制成，其中所述含羟丙基-β -环糊精的磷酸盐缓冲液中羟丙基-β-环糊精的浓度为0.lmol/L。
[0015]本发明步骤(2)中，优选所述样品中外消旋α -环戊基扁桃酸的浓度为I~20mg/mL。
[0016]本发明步骤(3)中，所述梯度时间间隔为每0.5~5min收集一次，优选为每2min时间间隔收集一次洗脱液。
[0017]本发明步骤(3)中，优选所述柱温为5~25°C ;所述转速为800~1800rpm ;所述流动相泵入柱内的流速为0.5~2.5mL/min。
[0018]本发明步骤(4)中，所述的回收按如下步骤进行:将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节PH值至I~2，再用甲基叔丁基醚萃取2~3次，合并甲基叔丁基醚层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得右旋α-环戊基扁桃酸单体和左旋α-环戍基扁桃酸单体。
[0019]具体的，推荐本发明所述拆分方法按照如下步骤进行:
[0020]( I)将正己烷、甲基叔丁基醚与pH值为2.7的含有羟丙基-β -环糊精的磷酸盐缓冲液按照体积比9:1:10组成溶剂体系，混合均匀，静置分层，分液得到有机相和水相；所述羟丙基-β -环糊精的取代度为5.5~8.0 ;所述含有羟丙基-β -环糊精的磷酸盐缓冲液中羟丙基-β -环糊精的浓度为0.lmol/L ；
[0021](2)将外消旋α-环戊基扁桃酸用步骤(1)所得的有机相溶解，制成外消旋α-环戊基扁桃酸浓度为I~20mg/mL的样品；
[0022](3)采用高速逆流色谱法拆分外消旋α -环戊基扁桃酸:以步骤(1)得到的有机相为固定相，水相为流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5~25°C，开启速度控制器，转速为800~1800rpm，以0.5~2.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，即当流动相从色谱柱出口处流出时，将步骤(2)制得的样品由进样阀进样，紫外检测器在波长190~400nm下检测流出液，按照时间梯度，用自动部份收集器分别收集30min到200min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液；
[0023](4)从步骤(3)中收集得到的前峰洗脱液中回收，得到右旋α -环戊基扁桃酸单体；从步骤(3)中收集得到的后峰洗脱液中回收，得到左旋α-环戊基扁桃酸单体；所述回收的方法为:将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH值至1~2，再用甲基叔丁基醚萃取2~3次，合并甲基叔丁基醚层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得右旋α-环戊基扁桃酸单体和左旋α-环戊基扁桃酸单体。
[0024]本发明可采用分析型、半制备和制备型逆流色谱仪(分析型分离柱柱体积为20ml，半制备型分离柱柱体积为300ml，制备型分离柱柱体积为1000ml)，逆流色谱仪由恒流泵、主机(分离柱)、紫外检测器、记录仪等组成。
[0025]与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在:本发明首次采用逆流色谱拆分外消旋α -环戊基扁桃酸，本方法可以基本达到分离目的，并且该方法适用于各种型号的制备型逆流色谱仪，可以分离得到左旋α-环戊基扁桃酸和右旋α-环戊基扁桃酸的单体，其纯度均大于98%、回收率大于90%。
(四)【专利附图】
【附图说明】
[0026]图1:实施例1实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
[0027]图2:实施例2实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
[0028]图3:实施例3实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
[0029]图4:实施例4实验条件下的分析型高`速逆流色谱图；
[0030]图5:实施例5实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
[0031]图6:实施例6实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
[0032]图7:实施例7实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
[0033]图8:实施例8实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
[0034]图9:实施例9实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
[0035]图10:实施例10实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
[0036]图11:实施例11实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
[0037]图12:实施例12实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
[0038]图13:实施例13实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
[0039]图14:图13中Α部分(98min~130min)洗脱液的高效液相色谱检测谱图，即右旋α-环戊基扁桃酸；
[0040]图15:图13中Β部分(138min~170min)洗脱液的高效液相色谱检测谱图，即左旋α-环戍基扁桃酸。
(五)【具体实施方式】
[0041]下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此:[0042]实施例1
[0043](1)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.7，含有0.lOmol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为
7.5)按照8:2:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0044](2)称取15mg外消旋α -环戊基扁桃酸用ImL有机相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0045](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号ΤΒΕ-20Α)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集50min到130min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即50~86min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，SP85~130min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图1所示)，计算分离度为0.91。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱法检测条件为:J&KCHEMICALC18 (5 μ m, 150mmX4.6mm)色谱柱；柱温:25°C ;流动相:24%乙醇水(水ρΗ2.68，磷酸盐缓冲液调节并含9.5mmol.L—1轻丙基-β -环糊精):乙腈(95:5，ν/ν)等度洗脱；流速0.6mL/min ;检测波长220nm ;进样量:20 μ L。
[0046]实施例2
[0047](1)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.7，含有0.lOmol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为7.5)按照9:1:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0048](2)称取15mg外消旋α -环戊基扁桃酸用ImL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0049](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号ΤΒΕ-20Α)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集30min到65min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即30~46min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，SP46~65min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图2所示)，计算分离度为0.78。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
[0050]实施例3
[0051](1)将正己烷:乙酸乙酯:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.7，含有0.10mol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为7.5)按照7:3:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0052](2)称取15mg外消旋α -环戊基扁桃酸用lmL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0053](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-20A)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集50min到lOOmin之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即50~75min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，即75~lOOmin内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图3所示)，计算分离度为0.93。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
[0054]实施例4
[0055](1)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.7，含有0.lOmol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为7.5)按照8.5:1.5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0056](2)称取15mg外消旋α -环戊基扁桃酸用lmL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0057](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-20A)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集35min到75min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即35~54min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，SP54~75min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图4所示)，计算分离度为0.86。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
[0058]实施例5
[0059](I)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.7，含有0.lOmol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为
7.5)按照8.5:1.5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0060](2)称取15mg外消旋α -环戊基扁桃酸用ImL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。 [0061](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号ΤΒΕ-20Α)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为20°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集40min到90min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即40~64min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，SP64~90min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图5所示)，计算分离度为0.87。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
[0062]实施例6
[0063](I)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.5，含有0.lOmol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为
8.0)按照8.5:1.5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0064](2)称取15mg外消旋α -环戊基扁桃酸用ImL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0065](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号ΤΒΕ-20Α)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集40min到90min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即40~62min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，gp62~90min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图6所示)，计算分离度为0.90。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
[0066]实施例7
[0067](1)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=3.5，含有0.lOmol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为7.5)按照8.5:1.5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0068](2)称取15mg外消旋α -环戊基扁桃酸用lmL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0069](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-20A)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-1 00)分别收集35min到80min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即35~57min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α -环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，即57~80min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图7所示)，计算分离度为0.83。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
[0070]实施例8
[0071](1)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.7，含有0.05mol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为
7.5)按照8.5:1.5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0072](2)称取15mg外消旋α -环戊基扁桃酸用lmL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0073](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-20A)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集60min到150min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即60~IOlmin内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，即101~150min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图8所示)，计算分离度为0.95。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1o
[0074]实施例9
[0075](I)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.7，含有0.15mol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为
6.0)按照8.5:1.5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0076](2)称取15mg外消旋α -环戊基扁桃酸用ImL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0077](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号ΤΒΕ-20Α)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集30min到70min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的`时间段，将前峰对应时间段，即30~50min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，SP50~70min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图9所示)，计算分离度为0.78。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
[0078]实施例10
[0079](I)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.7，含有0.15mol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为
7.5)按照8.5:1.5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0080](2)称取Img外消旋α-环戊基扁桃酸用ImL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0081](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号ΤΒΕ-20Α)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集40min到80min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即40~60min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，gp60~80min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图10所示)，将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
[0082]实施例11
[0083](1)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液(用0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，pH=2.7，含有0.35mol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为
7.5)按照8.5:1.5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0084](2)称取15mg外消旋α -环戊基扁桃酸用lmL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0085](3)采用分析型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-20A)拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:分离柱体积为20mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.5mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集30min到50min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前`峰对应时间段，即30~38min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，gp38~50min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图11所示)，计算分离度为0.56。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
[0086]实施例12
[0087](1)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液(用
0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，ρΗ=2.7，含有0.lmol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为7.5)按照8.5:1.5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0088](2)称取150mg外消旋α -环戊基扁桃酸用8mL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0089](3)采用半制备型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-200V)拆分外消旋α -环戊基扁桃酸:分离柱体积为200mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速度控制器，转速为800rpm，以2.0mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集90min到160min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即90~125min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α -环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，即125~160min内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图12所示)，计算分离度为0.99。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例I。
[0090]从洗脱液中回收样品:将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至I~2，再用甲基叔丁基醚萃取2~3次，合并甲基叔丁基醚层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得右旋α -环戊基扁桃酸单体和左旋α -环戊基单体。右旋α -环戊基扁桃酸单体，纯度为99.6%，回收率为92.9%，左旋α -环戊基扁桃酸单体，纯度为99.5%,回收率为93.4%ο
[0091]实施例13
[0092](I)将正己烷:甲基叔丁基醚:含有羟丙基环糊精的磷酸盐缓冲液(用
0.lmol/L磷酸盐缓冲溶液配制，ρΗ=2.7，含有0.lmol/L羟丙基-β -环糊精，取代度为7.5)按照8.5:1.5:10的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。
[0093](2)称取200mg外消旋α _环戊基扁桃酸用IOmL有机相相溶解，溶解后制成样品溶液，待用。
[0094](3)采用半制备型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司，仪器型号TBE-200V)拆分外消旋α -环戊基扁桃酸:分离柱体积为200mL，进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为10°C，开启速 度控制器，转速为800rpm，以2.0mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(即当流动相从色谱柱出口处流出时)，由进样阀开始进样。然后以波长254nm的紫外检测器(上海金达生化仪器有限公司，仪器型号UVD-200UV)检测流出液，并按照时间梯度，用自动部份收集器(上海沪西分析仪器厂有限公司，仪器型号SBS-100)分别收集90min到180min之间每2min时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段，即90~132min内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段，即132~ISOmin内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液。根据紫外检测谱图(见图13所示)，计算分离度为0.98。将含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液和含目标组分左旋α-环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液进行高效液相检测(高效液相色谱图分别见图14和图15)，两个单体洗脱液的纯度均大于98%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
[0095]从洗脱液中回收样品:将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH至I~2，再用甲基叔丁基醚萃取2~3次，合并甲基叔丁基醚层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得右旋α -环戊基扁桃酸单体和左旋α -环戊基单体。右旋α -环戊基扁桃酸单体， 纯度为99.4%，回收率为93.6% ;左旋α -环戊基扁桃酸单体，纯度为99.7%,回收率为91.4%。
【权利要求】
1.一种外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行:(1)将有机溶剂Α、有机溶剂Β与含有羟丙基-β -环糊精的磷酸盐缓冲液按照体积比1~9:1~9:10组成溶剂体系，混合均匀，静置分层，分液得到有机相和水相；所述羟丙基-β -环糊精的取代度为4.5~8.0 ;所述含有羟丙基-β -环糊精的磷酸盐缓冲液的pH值为2.0~8.0 ;所述含有羟丙基-β -环糊精的磷酸盐缓冲液中羟丙基-β -环糊精的浓度为0.02~0.40mol/L ;所述有机溶剂A为C1~C8的烷烃；所述有机溶剂B为C2~C8的醚或C3~C8的酯类；(2)将外消旋α-环戊基扁桃酸用步骤(1)所得的有机相溶解，制成样品；(3)采用高速逆流色谱法拆分外消旋α-环戊基扁桃酸:以步骤(1)得到的有机相为固定相，水相为流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为2~35°C，开启速度控制器，转速为200~2000rpm，以0.1~3.0mL/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，即当流动相从色谱柱出口处流出时，将步骤(2)制得的样品由进样阀进样，紫外检测器在波长190~400nm下检测流出液，按照时间梯度，用自动部份收集器分别收集30min到200min之间梯度时间间隔的洗脱液，并根据紫外检测谱图中对映体双峰出现的时间段，将前峰对应时间段内收集的洗脱液合并即得含目标组分右旋α-环戊基扁桃酸单体的前峰洗脱液，将后峰对应时间段内收集的洗脱液合并即得含目标组分左旋α -环戊基扁桃酸单体的后峰洗脱液；所述前峰是指对映体双峰中先出来的主峰，所述后峰是指对映体双峰中后出来的主峰； (4)从步骤(3)中收集得到的前峰洗脱液中回收，得到右旋α-环戊基扁桃酸单体；从步骤(3)中收集得到的后峰洗脱液中回收，得到左旋α-环戊基扁桃酸单体。
2.如权利要求1所述的外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法，其特征在于步骤(1)中，所述有机溶剂Α为正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷或石油醚。
3.如权利要求1所述的外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法，其特征在于步骤(1)中，所述有机溶剂Β为乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯或甲酸乙酯。
4.如权利要求1所述的外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法，其特征在于步骤(1)中，所述的含有羟丙基- β -环糊精的磷酸盐缓冲液的pH值为2.0~4.0。
5.如权利要求1所述的外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法，其特征在于步骤(1)中，所述的含有羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液中羟丙基-β-环糊精的浓度为0.05 ~0.40mol/L。
6.如权利要求1所述的外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法，其特征在于步骤(1)中，所述羟丙基-β -环糊精的取代度为5.5~8.0。
7.如权利要求1所述的外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法，其特征在于步骤(1)中，所述溶剂体系为正己烷、甲基叔丁基醚与pH值为2.7的含羟丙基-β-环糊精的磷酸盐缓冲液以体积比9:1:10混合制成，所述含羟丙基-β -环糊精的磷酸盐缓冲液中羟丙基- β -环糊精的浓度为0.lmol/L。
8.如权利要求1所述的外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法，其特征在于步骤(2)中，所述样品中外消旋α-环戊基扁桃酸的浓度为1~20mg/mL。
9.如权利要求1所述的外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法，其特征在于步骤(3)中，所述梯度时间间隔为每0.5~5min收集一次。
10.如权利要求1所述的外消旋α-环戊基扁桃酸的手性拆分方法，其特征在于步骤(4)中，所述的回收按如下步骤进行:将前峰洗脱液和后峰洗脱液分别用盐酸调节pH值至I~2，再用甲基叔丁基醚萃取2~3次，合并甲基叔丁基醚层，用水洗至中性，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液蒸除溶剂，即分别获得右旋α-环戊基扁桃酸单体和左旋α-环戊基扁桃酸单体。`
【文档编号】B01D15/10GK103694110SQ201310677110
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月12日 优先权日:2013年12月12日
【发明者】童胜强, 张虎, 沈芒芒, 颜继忠 申请人:浙江工业大学