一种用于质谱成像的基质喷涂装置的制造方法_2

文档序号:9172941阅读:来源:国知局
部平行于组织切片做往复运动,可使基质在较大组织表面积上获得均匀的喷涂。
【附图说明】
[0027]图1为本实用新型用于质谱成像的基质喷涂装置的立体图。
[0028]图2为本实用新型的主视图。
[0029]图3为本实用新型的侧视图。
[0030]图4为本实用新型的俯视图。
[0031]图5为本实用新型中喷雾器的1/4剖面图。
[0032]图6为本实用新型的局部纵切面图。
[0033]图中标记如下:
[0034]I基质溶液输送管,2金属二通管,3加热铝块,4三通管,5鞘气管,6石英毛细管,7高压电源连接头,8风扇,9步进马达,10驱动带,11限位器,12雾化气连接管,13基质溶液输送管锁紧螺丝。
[0035]图7为应用本实用新型时不同电压的基质喷涂的电镜图。
[0036]图8为应用本实用新型时重复性和稳定性的基质喷涂的电镜图。
[0037]图9为应用本实用新型时喷涂盐酸萘乙二胺的电镜图,其中图9(A)为不同电压条件下基质喷涂的电镜图和质谱图,图9(B)为在电压分别为OkV和5kV下不同物质的质谱成像图。
[0038]图10为应用本实用新型时不同基质喷涂的电镜图和与其对应的质谱图。
[0039]图11为应用本实用新型时盐酸萘乙二胺喷涂在胃癌组织切片上的质谱图和与其对应的质谱成像图,其中图11㈧为肿瘤区和非肿瘤区的质谱图,图1l(B)为5个胃癌组织的H&E染色(红色虚线内为胃癌肿瘤区,蓝色虚线圈内为胃癌非瘤区),以及对应胃癌组织的质谱成像。
【具体实施方式】
[0040]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
[0041 ] 下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
[0042]下面结合附图对本实用新型进行进一步说明,但本实用新型并不局限于以下实施例。
[0043]组织样本取自于⑶I八周龄小鼠:购自北京维通利华实验动物技术有限公司。盐酸萘乙二胺(NEDC)、2,5-二羟基苯甲酸(DHB)和9-氨基吖啶(9-AA)均购自Sigma-Aldrich公司。分析纯甲醇试剂购自Fisher Scientific。超纯水由MilliQ system获得。二氧化铟(ITO)导电玻片购于Bruker Daltonics公司。
[0044]实施例1、用于质谱成像的基质喷涂装置及其应用
[0045]如图1-6所示,为本实用新型用于质谱成像的基质喷涂装置,它包括基质溶液输送管I和与之连接的基质溶液喷雾器;基质溶液输送管I与基质溶液喷雾器之间连接有基质溶液加热器,还包括基质溶液干燥器和步进马达9。基质溶液喷雾器,具体包括三通管4、鞘气管5、石英毛细管6 (喷针)和雾化气连接管12。基质溶液加热器,具体包括加热铝块
3、温度检测探头(图中未示)、温度控制器(图中未示)和电源(图中未示)。基质溶液干燥器,具体包括2个风扇8和与之相连接的风扇驱动电源(图中未示)。
[0046]基质溶液输液管I经过金属二通管2与三通管4的第一支路连接,金属二通管2与二者的连接处用基质溶液输送管锁紧螺丝13紧固。基质溶液输送管I与基质溶液喷雾器之间连接有基质溶液加热器,金属二通2的底部连接有加热铝块3,加热铝块3与电源连接(图中未示),温度检测探头(图中未示)嵌埋在加热铝块3中与之相连接,温度检测探头还与温度控制器(图中未示)相连接,温度控制器用于控制电源与加热铝块3之间电路的闭合或断开,加热铝块3用于加热基质溶液输送管I中的基质溶液,以防止基质溶液堵塞基质溶液输送管I。
[0047]基质溶液喷雾器中三通管4的第二支路与雾化气连接管12相连通,三通管4的第三支路内设有鞘气管5,鞘气管5内设有石英毛细管6 (喷针),鞘气管5与石英毛细管6之间设有间隙,由雾化气连接管12通入的雾化气经此间隙流出,然后与基质溶液形成喷雾。基质溶液喷雾器和基质溶液加热器均通过驱动带10连接于步进马达9上,步进马达9通过驱动带10驱动基质溶液喷雾器和基质溶液加热器做往复运动,同时带动风扇8做往复运动,步进马达9驱动基质溶液喷雾器和基质溶液加热器于组织切片的上部平行于组织切片做往复运动,以使基质在较大组织表面积上获得均匀的喷涂,步进马达9与驱动速度控制器(图中未示)相连接,驱动速度控制器用于控制步进马达9带动基质溶液喷雾器做匀速往复运动。基质溶液喷雾器往复运动的两端处均设有限位器11,用于控制所述基质溶液喷雾器往复运动行程的两端,以控制基质溶液喷雾器喷涂基质的面积。基质喷涂装置还包括风扇8,风扇8对石英毛细管6喷涂在组织切片上的基质溶液进行干燥;风扇8用于加快喷涂的基质溶液中溶剂挥发,避免因溶液的存在导致基质的迀移,从而使喷涂的基质分布均匀。基质喷涂装置还包括一高压电源(图中未示),高压电源连接于金属二通管2和导电载玻片的高压电源连接头7上,此时导电载玻片上贴附组织切片;高压电源的作用是在石英毛细管6和组织切片之间形成强电场,从而使喷涂在组织切片上的基质均匀分布。
[0048]使用本实用新型进行基质喷涂的工作过程如下:
[0049]用微量注射栗将基质溶液推入基质溶液输送管I中,在基质溶液输送管I中的基质溶液经基质溶液加热器的加热铝块3加热,使基质溶液不堵塞基质溶液输送管I。基质溶液输送管I中基质溶液依次经金属二通管2和三通管4到达石英毛细管6,在石英毛细管6管口基质溶液与雾化氮气相遇,基质溶液喷雾喷涂到负载有组织切片的导电载玻片上;基质溶液喷雾器在步进马达9的驱动下,于组织切片的上部平行于组织切片做匀速往复运动,以使基质在较大组织表面积上获得均匀的喷涂,并且基质喷涂过程中,风扇8将基质溶液快速吹干;与此同时,加载于基质溶液喷雾器与组织切片之间的高压电源工作,使石英毛细管6和导电载玻片之间形成强电场,从而使喷涂在组织切片上的基质均匀分布,即得喷涂基质的组织切片。
[0050]使用本实用新型的具体应用如下:
[0051]一、不同电压条件下基质喷涂
[0052]以质量体积浓度为10mg/mL的9_氨基吖啶为喷涂的基质溶液,200微升基质溶液由注射栗以1000微升/小时的速度推入基质溶液输送管I中。基质溶液以1000微升/小时流速栗入基质溶液输送管I中,基质溶液加热铝块3的加热温度为100°C将基质溶液加热。基质溶液喷雾器以0.17米/秒的速度做匀速往复运动,鞘气管5与石英毛细管6之间氮气压力为0.3MPa,在石英毛细管6与导电载玻片(负载有小鼠组织的切片)之间分别加0,2.5kV和5kV电压进行喷涂,同时,风扇将基质溶液中溶剂吹干,即得到不同电压喷涂的基质。
[0053]如图7所示,为应用本实用新型时不同电压的基质喷涂的电镜图,由图7可知,在5kV的条件下,与O和2.5kV电压条件下相比,9-氨基吖啶基质溶液可均匀喷涂在小鼠组织切片的表面,且结晶致密、均匀细小,晶粒小于5微米。
[0054]二、重复性和稳定性的基质喷涂
[0055]取三种基质溶液:盐酸萘乙二胺、2,5- 二羟基苯甲酸和9-氨基吖啶的质量体积浓度均为10mg/mL。连续三天使用三种基质溶液分别按照下述方法进行喷涂组织切片:以200微升基质溶液由注射栗以1000微升/小时的速度推入基质溶液输送管I中。基质溶液以1000微升/
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