专利名称：用生化酶标多功能分析仪测试无机离子超微量检测技术的方法
技术领域：
本发明属医学电解质检验领域。具体说是一种用生化酶标多功能分析仪测试无机离子超微量检测技术的方法。
无机离子检验是医学检验的重要组成部分之一。无机离子分析朝着微量、快速、准确、方便的方向发展是当前国内外医学检验的必然趋势。
目前，国内外生产的先进的全自动钾、钠、氯、钙分析仪、全自动电解质分析仪多已微量、快速、准确、自动化程度高，但都脱离不了电极，而电极使用寿命比较短，更换一次成本高。鉴于我国现状，由于受经济、维修、试剂等种种条件的限制，至今尚未能普遍推广先进的全自动电解质分析仪，多数实验室仍使用的是火焰光度分析法和常用的比色法，而这两法都存在着结果不稳定、重复性差，且都需人工计算的不足。火焰光度分析法又因去离子水、标本存放要求高和所用的燃料汽油、液化石油气等有一定的危险性。常用的比色法又因手工操作比色测试速度慢等缺点。若能实现即快速又准确的比色分析设备和技术方法，则具有更大的技术上的优越性和应用上的实际意义。
本发明的目的在于避免上述现有技术中存在的不足之处而采用现有的微孔板代替试管和比色杯，并在孔内直接进行试验操作，达到加入多个已知含量数的标准品，经测试给出的含量是否一致的一种用生化酶标多功能分析仪测试无机离子超微量检测技术的方法。
本发明的目的可以通过以下措施来达到一种用生化酶标多功能分析仪测试无机离子超微量检测技术的方法，其特征在于a．按末梢血常规采集方法将微量采血塑料管上端口接触血滴，下端放低，边轻挤边进血至需要量后烧熔下端，用镊子捏紧封固或不封口，将微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的针头塑料套内，在针头塑料套管或采血塑料管上贴上不干胶序号，离心分离血清备用；b．取洁净8×12标准96微孔板一块；c．采用微量定量加样器，取标准品和被测样品，定量加入微孔板各孔内；d．用微量可调移液器，按所需试剂用量，定量加入上述各孔内；e．将微孔板置室温达到试验所需反应时间；f．将微孔板置生化酶标多功能分析仪测量室内，在90s内同时打印出1～90份结果报告。
本发明的目的还可以通过以下措施来达到本发明采用1μl.2μl.3μl.5μl.10μl.20μl.25μl微量定量加样器，取标准品于2-4个孔内和被测样品定量加入微孔板各孔内。
本发明采用50-250μl、100-500μl微量可调移液器。
本发明采用内径2-3mm的聚乙烯塑料管制成5-7cm规格的微量采血塑料管。
本发明相比现有技术方法具有如下优点1．无机离子测定的方法有很多，最常用的是比色法。方法可靠，但重复性差，同一份标本多次检测往往会出现不同的结果。究其原因，除了采样、加样、操作因素外，主要是检测仪器的精密度和灵敏度不够。而本发明采用一整套适应无机离子超微量检测的生化酶标多功能分析仪和相应的技术方法，不仅提高了仪器的精密度和灵敏度而且能使同份标本、同批标本测试结果基本保持一致。
2．比色法和火焰光度分析法都需人工进行比色、速度慢，存在着比色时间段之间对结果的误差。而用现有技术方法在大批量标本检测中，避免了因标准品与被测样品前后比色的时间过长而直接影响测定结果的准确性。
3．用现有技术方法比色分析速度快。90份样品仅用90s即可测试打印出结果报告。
4．各种耗材少。从取血液到发出报告，无需注射器、试管、吸管、比色杯。减少了清洗工作，节省人力，提高了工作效率。
5．鉴于国内外生产的先进的全自动电解质分析仪，多已微量、快速、准确、自动化程度高。但测量腔易气泡、管道易堵塞，更脱离不了电极，而电极使用寿命比较短，更换一次成本高。目前我国多数实验室仍使用的是火焰光度分析法和常用的比色法，火焰光度计又因所用的燃料汽油、液化石油气等有一定的危险性。而本发明采用一整套适应无机离子超微量检测的生化酶标多功能分析仪和相应的技术方法，是以2-4个已知含量数的标准品随被测样品经测试后，每次均能达到已知含量数的标准，来提高被测标本结果的准确性。
实施例1血清钙测定(邻-甲酚酞络合酮直接比色法)1．末梢血采集(1)采血部位成人以左手无名指为宜，半岁以下婴幼儿通常以拇指或足跟采血。
(2)轻轻按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮肤、待干。
(3)紧捏刺血部位，用无菌采血针穿刺取血。动作应迅速，深度约2-3mm，以稍加挤压血液能流出为宜。
(4)取内径2-3mm长5-7cm规格的聚乙烯塑料管(微量采血塑料管)上端口接触血滴，下端放低，边轻挤边进血，约采1滴血后烧熔下端，用镊子捏紧封固或不封口，将微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的针头塑料套内，在针头塑料套管或采血塑料管上贴上不干胶序号，离心分离血清备用。
2．原理样品中的钙离子在碱性条件下与邻-甲酚酞络合酮络合，生成紫红色络合物，在580nm波长下有特异吸收峰，颜色的深浅与钙的浓度成正比。并加入8-羟基喹啉螯合样品中的镁离子以消除干扰，通过比色测定求出钙的含量。
3．试剂(1)、邻-甲酚酞络合酮显色剂称取8-羟基喹啉500mg，置烧杯中，加浓盐酸5ml，使其溶解并转入500ml容量瓶中，再加入邻-甲酚酞络合酮25mg，待完全溶解后，加Tri-tonX-100 lml，混匀，然后加入去离子水至刻度。置聚乙烯瓶内保存。
(2)、1mol/L AMP碱性缓冲液称取2-氨基-2-甲基-1-丙醇89.14g，置1L容量瓶中，加500ml去离子水溶解，待完全溶解后加至刻度。置聚乙烯瓶内室温保存。
(3)、显色应用液应用时，根据标本的多少将上述两液等量混合。
(4)、钙标准液2.5mmol/L4．加样取洁净8×12标准96微孔板一块按下表加样
混匀，置室温5分钟。
5．测试将试验微孔板置生化酶标多功能分析仪测量室内，用580nm单波长、设空白孔和标准孔位，确认Au/As*C公式，设置标准品单位含量钙标准品为2.5mmol/L即设置C=002.5，启动测量打印各孔血清钙含量的结果报告。
6．结果血钙测定 邻-甲酚酞络合酮-比色法试剂 北京北化精细化学品有限责任公司生产批号 000110波长方式 单波长测量波长 580nm标准液(品) 2.5mmol/L报告方式 1、血钙测试结果2、吸光度测试结果使用公式 Au/As*C标准品单位含量设置 C=0025(2.5mmol/L)两种报告方式如下1、血钙测定结果 A行01、02、03孔为空白调“O”孔，04、05、06、07孔为标准品测定结果，其余为标本测定孔结果。
2、吸光度测试结果与生化测定结果相对应的各孔吸光度值
实施例2氯化物测定(硫氰酸汞比色法)1．末梢血采集同实施例1。
2．原理待测物中的氯离子与硫氰酸汞作用，生成难以解离的氯化汞，并释放出相应量的硫氰酸离子，该离子与试剂中铁离子结合生成橙红色的硫氰酸铁，其色泽与氯的含量成正比。
3．试剂(1)饱和硫氰酸汞溶液称取硫氰酸汞2.0g，溶于1L蒸馏水中，放室温48小时，并经常摇动，取上清液应用。
(2)硝酸汞溶液称取硝酸汞6.0g，用50ml蒸馏水溶解，加入1ml浓硝酸并稀释至100ml。
(3)显色应用液称取硝酸铁[Fe(No3)3 9H2O]13g，加水约400ml溶解，再加入1.5ml浓硝酸、500ml饱和硫氰酸汞溶液和5.0ml硝酸汞溶液，最后用水稀释至1000ml。用塑料瓶存放，置室温保存。
(4)氯化物标准液100mmol/L。空白试剂称取硝酸铁13g，溶于400ml蒸馏水中，加浓硝酸1.5ml，再稀释至1000ml。
4．加样取洁净8×12标准96微孔板一块按下表加样
混匀，置室温10分钟。
5．测试将试验微孔板置生化酶标多功能分析仪测量室内，用490nm双波长、设空白孔和标准孔位，确认Au/As*C公式，设置标准品单位含量，例如氯标准品为100mmol/L即设置C=100.0，启动测量打印各孔氯含量的结果报告。
6．结果氯化物测定 硫氰酸汞比色法试剂 北京北化精细化学品有限责任公司生产批号 000202波长方式 双波长测量波长 490nm标准液(品) 100mmol/L报告方式 1、氯化物测定结果2、吸光度测试结果使用公式 Au/As*C标准品单位含量设置 C=100.0(100mmol/L)两种报告方式如下1、氯化物测定结果A行01、02孔为空白调“0”孔，03、04、05孔为标准品测定结果，其余为标本测定孔结果。
2、吸光度测试结果与氯测定结果相对应的各孔吸光度值
权利要求
1．一种用生化酶标多功能分析仪测试无机离子超微量检测技术的方法，其特征在于a．按末梢血常规采集方法将微量采血塑料管上端口接触血滴，下端放低，边轻挤边进血至需要量后烧熔下端，用镊子捏紧封固或不封口，将微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的针头塑料套内，在针头塑料套管或采血塑料管上贴上不干胶序号，离心分离血清备用；b．取洁净8×12标准96微孔板一块；c．采用微量定量加样器，取标准品和被测样品，定量加入微孔板各孔内；d．用微量可调移液器，按所需试剂用量，定量加入上述各孔内；e．将微孔板置室温达到试验所需反应时间；f．将微孔板置生化酶标多功能分析仪测量室内，在90s内同时打印出1～90份结果报告。
2．根据权利要求1所述的用生化酶标多功能分析仪测试无机离子超微量检测技术的方法，其特征在于采用1μl、2μl、3μl、5μl、10μl、20μl、25μl微量定量加样器，取标准品于2-4个孔内和被测样品定量加入微孔板各孔内。
3．根据权利要求1所述的用生化酶标多功能分析仪测试无机离子超微量检测技术的方法，其特征在于采用50-250μl、100-500μl微量可调移液器。
4．根据权利要求1所述的用生化酶标多功能分析仪测试无机离子超微量检测技术的方法，其特征在于采用内径2-3mm的聚乙烯塑料管制成5-7cm规格的微量采血塑料管。
全文摘要
本发明提供了一种利用现有的微孔板,并在孔内直接进行试验操作。采用聚乙烯塑料管制成不同规格的微量采血塑料管和应用定量加样(移液)器,达到无需静脉抽血。使之在无机离子检测项目中,以多个已知含量数的标准品随被测样品经同时测试后,使标准品每次均能达到已知含量数的标准,来提高被测标本结果的准确性。再结合相应配套的生化酶标多功能分析仪测试打印检测报告。
文档编号G01N33/50GK1299969SQ00134389
公开日2001年6月20日 申请日期2000年12月12日 优先权日2000年12月12日
发明者吴斌, 张红宁, 梁立森, 韩明伦 申请人:吴斌