多成分药剂的评价方法

专利名称：多成分药剂的评价方法
技术领域：
本发明涉及多成分药剂的评价方法，更具体地说，本发明涉及下述的多成分药剂的评价方法，在该评价方法中，利用三维高效液相色谱法(下文中有时省略表示为“3D-HPLC”)对构成多成分药剂的各个成分的差异程度进行测定，利用通过对上述测定的数据加以特定的解析方法而得到的数值对多成分药剂进行评价。
背景技术：
多成分药剂、特别是中药制剂等源自天然物的制剂的定量概况和定性概况会由于与所使用的原料生药相关的地质学因素、生态学因素、采集时期、采集地点、采集年代、生长期的天气状况等原因而发生变化。因此，关于中药制剂等的多成分药剂，为了评价其品质、安全性和功效等，规定了一定的判定标准，国家的监督机关、化学组织和制造商等根据该标准进行评价。
然而，多成分药剂的品质等的判定标准一般是通过适当选择多成分药剂中一种或几种具有特征的成分，根据其含量等来制定的。
例如在月刊药事Vol.28，No.3，67-71(1986)中记载了这样的评价方法当无法认定多成分药剂中的本质成分时，选择多个具有能够定量分析、易溶于水、热水中不分解、不与其他成分发生化学反应等物性的成分，对这些成分的含量进行化学分析，将所得到的数值作为评价的标准。
另一方面，已知这样的评价方法测定多成分药剂的色谱，在每个洗脱时间下得到紫外可见吸收光谱(下文中省略表示为“指纹图谱数据”)，由其成分信息制定评价的标准。例如，在特开2002-214215号公报中有下述的记载从指纹图谱数据中选择几个峰值并将其条形码化，由此进行多成分药剂的评价。
然而，在上述方法中存在“特定成分的含量”或“特定成分的色谱峰”这样的概念，由于要对其进行定量，因而要在色谱图上将特定成分的色谱峰与其他成分的色谱峰相分离，并计算特定成分的峰面积或峰高，如此，需要利用计算机进行波形处理操作，该操作成为降低数据准确性的因素。即，在峰的洗脱时间方面没有严格意义上的重现性，因此在峰的波形处理中产生了偏差。这种偏差在对小而宽的峰或连续的峰进行波形处理时尤为显著，作为评价方法缺乏可靠性。而且，利用计算机进行波形处理通常需要庞大的时间。
并且，在上述的方法中，信息量(取值点)被限定于特定成分的峰数，因此无法自由增减信息量，也无法调整数据处理时间，因此有时无法确定最佳的评价方法。
此外，上述方法中，由于多个特定成分的含量作为多个数值而得到，需要将这些数值综合起来进行判断，无法以一个数值对多成分药剂进行评价。即，对于应当评价的一个多成分药剂与多个多成分药剂组有怎样的差异，其程度无法用一个数值来表示。
于是，人们期待一种多成分药剂的评价方法，该评价方法的偏差小，可靠性高，数据处理时间也得以改善，而且能够用一个数值来进行判定。

发明内容
本发明的发明人鉴于上述情况进行了认真的研究，结果发现了如下的评价方法，从而完成了本发明，即，使用3D-HPLC的指纹图谱数据，利用特定的方法处理该指纹图谱数据的各个项目并进行数理解析，由此，可以用一个数值来对多成分药剂的品质、安全性和功效等进行评价。
即，本发明提供一种多成分药剂的评价方法，该评价方法的特征是，使用至少通过如下步骤(1)至步骤(5)所得到的马氏距离(Mahalanobisdistance)，对应当评价的多成分药剂与作为标准组选出的多个多成分药剂的差异程度进行判定；其中，所述步骤为(1)获得所述应当评价的多成分药剂的3D-HPLC的指纹图谱数据的步骤
(2)将上述步骤(1)中得到的指纹图谱数据与构成标准组的其他同种多成分药剂的3D-HPLC的指纹图谱数据相组合的步骤；(3)在所述步骤(2)的指纹图谱数据中，相对于多成分药剂的序号、以及洗脱时间或检测波长，来分配MT法中的变量轴，并将信号强度作为MT法中的特征量的步骤；(4)利用MT法，由所述步骤(3)的特征量得到单位空间的步骤；(5)利用MT法，得到应当评价的多成分药剂与所述步骤(4)中所得到的单位空间的马氏距离的步骤。
而且，本发明还提供一种多成分药剂的评价方法，该评价方法的特征是，使用至少通过如下步骤(1)至步骤(8)所得到的马氏距离，对应当评价的多成分药剂与作为标准组选出的多个多成分药剂的差异程度进行判定；其中，所述步骤为(1)获得所述应当评价的多成分药剂的3D-HPLC的指纹图谱数据的步骤；(2)将上述步骤(1)中得到的指纹图谱数据与构成标准组的其他同种多成分药剂的3D-HPLC的指纹图谱数据相组合的步骤；(3)在所述步骤(2)的指纹图谱数据中，相对于多成分药剂的序号、以及洗脱时间或检测波长中的任意一项，来分配MT法中的变量轴，并将信号强度作为MT法中的特征量的步骤；(4)利用MT法，由所述步骤(3)的特征量得到单位空间的步骤；(5)在每个检测波长或洗脱时间，利用MT法，得到全部的多成分药剂与所述步骤(4)中所得到的单位空间的马氏距离的步骤；(6)相对于多成分药剂的序号和步骤(3)中未分配变量轴的另一项，来分配MT法中的变量轴，并将步骤(5)中得到的马氏距离作为MT法中的特征量的步骤；(7)利用MT法，由所述步骤(6)的特征量得到第2单位空间的步骤；(8)利用MT法，得到应当评价的多成分药剂与所述步骤(7)中所得到的第2单位空间的马氏距离的步骤。
此外，本发明进一步提供一种记录介质，该记录介质上记录有用于实施上述评价方法的程序和/或用于得到单位空间的标准组的指纹图谱数据。


图1是表示数据压缩前后的桂枝茯苓丸中药制剂的指纹图谱的图。图中，图1(a)表示数据压缩前的指纹图谱，图1(b)表示数据压缩后的指纹图谱。
图2是表示344个桂枝茯苓丸中药制剂(津村社制TJ-25)的马氏距离与个数的关系的图。
图3是表示马氏距离为1.0的补中益气汤(津村社制TJ-41)和马氏距离为2704的补中益气汤的指纹图谱的图。图中，图3(a)表示马氏距离为1.0的补中益气汤的指纹图谱，图3(b)表示马氏距离为2704的补中益气汤的指纹图谱。
图4是表示251个桃核承气汤中药制剂(津村社制TJ-61)的马氏距离与个数的关系的图。
图5是表示马氏距离为1.0的桃核承气汤(津村社制TJ-61)和马氏距离为35178330的桃核承气汤的指纹图谱的图。
具体实施例方式
本发明是根据利用MT法对指纹图谱数据进行数理解析而得到的马氏距离来对多成分药剂进行评价的方法。
本发明方法中具有本发明1方法和本发明2方法，其中，本发明1方法包括步骤(1)至步骤(5)，进行一次变量轴的分配；本发明2方法包括步骤(1)至步骤(8)，进行两次变量轴的分配。
实施本发明1方法时，首先，作为步骤(1)，需要得到多成分药剂的3D-HPLC的指纹图谱数据。
此处，多成分药剂的定义是含有多个有效化学成分的药剂，其不受特别限定，可以优选举出植物萃取物、生药、及使用这些物质的中药制剂等。而且，剂型也不受特别限定，例如包括汤剂、中药浸膏颗粒、中药浸膏液、中药片剂、中药胶囊等。
本发明中使用的3D-HPLC是指在多个规定的洗脱时间的每一个所得到的洗脱成分的光谱。
作为该3D-HPLC中使用的洗脱柱(column)，通常使用高效液相色谱法中使用的洗脱柱。
而且，3D-HPLC的检测波长不受特别限定，优选150nm～900nm的范围，特别优选由200nm～400nm的紫外可见吸收区域中选出的多个波长，更优选由200nm～300nm中选出的多个波长。
关于光谱的信号强度，即可以是穿透率(transmittance)，也可以是吸光度(absorbance)，但优选吸光度。
在步骤(1)中得到的指纹图谱是指，使用上述3D-HPLC，相对于例如洗脱时间和检测波长，三维地表示上述光谱的信号强度的图谱，例如图1(a)所示图谱。因此，指纹图谱数据是指至少将多成分药剂的序号(批号)、洗脱时间、检测波长和信号强度作为数据的图谱数据。
使用3D-HPLC的指纹图谱数据可以通过市售的装置得到，作为这种市售的装置，可以举出岛津制作所制造的LC-VP系统等。
本发明1方法中的步骤(2)是将上述步骤(1)中得到的指纹图谱数据与构成标准组的其他同种多成分药剂的3D-HPLC的指纹图谱数据相组合的步骤。
构成标准组的其他同种多成分药剂的3D-HPLC的指纹图谱数据也可以通过上述方法得到。测定条件等差异不受特别限定，优选应当评价的多成分药剂和构成标准组的其他同种多成分药剂都使用同一洗脱柱在同样条件下测定。
对于构成标准组的其他同种多成分药剂来说，例如在中药制剂的情况下，即使是被称作同一名称的物质，由于其采集时期、采集地点、采集年代、生长期的天气状况等不同，其成分组成根据地质学因素、生态学因素、气候学因素等而发生变化，因而所述构成标准组的其他同种多成分药剂是指上述这些因素可以为不同的多个多成分药剂。
标准组选自多个多成分药剂，但优选为某一公司制造的多成分药剂的组。另外也优选为获得指纹图谱数据的所有的多成分药剂的组。
进一步地，在知道作为标准的地质学因素、生态学因素、气候学因素等的情况下，优选选择落入该因素范围内的多成分药剂作为标准组。例如可以限定采集年代，或是限定采集地点。另外也优选选择在一定期间内由特定公司出售的多成分药剂。进一步地，尤其是当存在具有一定的特定药效的多成分药剂、或是存在作为标准的多成分药剂时，优选选择这些多成分药剂。而且，也优选选择多个公司以同一名称出售的全部的多成分药剂。此外，还可以将要评价的一个多成分药剂本身也用于构成标准组。
构成标准组的多成分药剂的数量不受特别限定，优选为5个以上，特别优选为100个以上。
本发明1方法中的步骤(3)为下述步骤在所述指纹图谱数据中，相对于多成分药剂的序号、以及洗脱时间或检测波长中的一个，来分配MT法中的变量轴，并将信号强度作为MT法中的特征量。
此处的本发明的MT法是指，在现在的品质工学中一般作为MT法已知的计算方法，例如可以举出《品质工学的数理》日本规格协会发行(2000)第136-138页、品质工学应用讲座《化学·药学·生物学的技术开发》日本规格协会编(1999)第454-456页、及品质工学，11(5)，78-84(2003)中记载的方法。
而且还可以使用一般市售的MT法程序软件。作为市售的MT法程序软件，可以举出(株)Probe社的PRAT for Research V1.0、PRAT forDevelopment V1.0；(财)日本规格协会的TM-ANOVA；(株)Ohken社的MTS Ver.2.0 for Excel、MT for windows等。
本发明1方法中，至少需要相对于多成分药剂的序号、以及洗脱时间或检测波长中的一个来分配MT法中的变量轴，并将信号强度作为MT法中的特征量。
变量轴的分配不受特别限定，优选将洗脱时间分配为MT法中所谓的项目轴(x轴)，将多成分药剂的序号分配为所谓的序号列轴(y轴)，将信号强度分配为MT法中所谓的特征量。
此处，上述项目轴(x轴)和序号列轴(y轴)如下定义。即，在MT法中，针对下述表1中的数据集Xij，求出平均值mj和标准偏差σj，根据将Xij标准化后的数值xij＝(Xij-mj)/σj，求出i和j的相关系数r，得到单位空间和马氏距离，此时，定义项目轴(x轴)和序号列轴(y轴)，使“在每个项目轴(x轴)的数值处，变化序号列轴(y轴)的数值，求出平均值mj和标准偏差σ j”。


在本发明1方法的步骤(4)中，利用MT法，由在步骤(3)中分配了轴的数据和特征量来得到基准点和单位量(下文中有时省略表示为“单位空间”)。此处，基准点、单位量和单位空间按照上述MT法的文献中记载的那样定义。
本发明1方法中的步骤(5)是利用MT法得到应当评价的多成分药剂与所述单位空间的马氏距离(MT法中记载为D2)的步骤。此处，与上述MT法的文献中的说明同样地定义马氏距离(D2)，而且马氏距离可以按照上述文献中记载的方法求得。
选择多成分药剂的序号和洗脱时间作为变量轴时，在每个检测波长处获得各多成分药剂的马氏距离；选择多成分药剂的序号和检测波长作为变量轴时，在每个洗脱时间处获得各多成分药剂的马氏距离。例如，将洗脱时间分配为项目轴(x轴)，将多成分药剂的序号分配为序号列轴(y轴)，将信号强度分配为MT法中的特征量时，在每个检测波长处获得马氏距离(D2)。
使用如此得到的马氏距离，能够对应当评价的多成分药剂与作为标准组选出的多个多成分药剂的差异程度适宜地进行判定。
另外，本发明2方法是一般被称为分割合成法、多阶段MT(multi-MT)法或多段MT法的方法的应用。
为了实施本发明2方法，与本发明1方法同样地进行步骤(1)至(5)。
进一步地，本发明2方法中的步骤(6)中，相对于多成分药剂的序号和步骤(3)中未分配变量轴的另一项来分配MT法中的变量轴，并将马氏距离作为MT法中的特征量。
例如，作为本发明2方法中的优选方法可以举出如下的方法在步骤(3)中，将洗脱时间分配为MT法中所谓的项目轴(x轴)，将多成分药剂的序号分配为所谓的序号列轴(y轴)，将信号强度分配为MT法中所谓的特征量，在该情况下，在每个检测波长处得到对应于各多成分药剂的序号的马氏距离；接着，重新将检测波长分配为项目轴(x轴)，将多成分药剂的序号分配为所谓的序号列轴(y轴)，将上述步骤(1)至(5)中得到的马氏距离分配为MT法中所谓的特征量。
本发明2方法中的步骤(7)与所述步骤(4)相同，是基于重新分配了轴的数据组而得到第2单位空间的步骤。
本发明2方法中的步骤(8)是利用MT法得到应当评价的多成分药剂与所述步骤(7)中得到的第2单位空间的马氏距离的步骤。
使用步骤(8)中得到的马氏距离(下文中有时称为“合成马氏距离”)，能够对所述一个应当评价的多成分药剂与作为标准组选出的多个多成分药剂的差异程度适宜地进行判定。
若使用合成马氏距离，则能够考虑到洗脱时间、检测波长和多成分药剂的序号的全部条件而作出评价，由此发挥出3D-HPLC的特长，因而特别优选。
本发明的优选方式有下述方式由来自特定公司的以同一名称制造或销售的多成分药剂构成标准组，得到3D-HPLC的指纹图谱数据，求出其它公司所销售的应当进行评价的一个多成分药剂与单位空间的马氏距离，对该其它公司的多成分药剂与标准组有着怎样差异的程度进行判断。另外，若选择一定的标准组，将由该标准组得到的单位空间规定为全国或国际上的固定标准，就能够在全国或国际上对中药制剂等的多成分药剂进行同样的客观的评价，因此优选。
在本发明中，也优选将所述指纹图谱数据进行适当压缩。即，也优选将指纹图谱数据的信息量任意减少。在本发明中，优选压缩信号强度、多成分药剂的序号(批号)、洗脱时间、检测波长等各数据(测定点)的数量。尤其是关于洗脱时间，由于有时有效成分从柱中洗脱出来的时间范围受到限制，因而优选通过只选择该洗脱时间带中的数据等来进行压缩。关于检测波长，由于有时有效成分的吸收光谱存在于限定的波长范围中，因而优选通过只选择该限定的波长范围中的数据等来进行压缩。而且，除了限定数据的选择范围之外，还可以通过从众多的取值点中等距离地抽取适当数量的取值点的方法等来进行数据的压缩。
关于洗脱时间，优选将其限定为有效成分从柱中开始洗脱到洗脱结束的时间范围内的数据。
具体地说，关于洗脱时间的选择，可以举出下述方法只选择有效成分从柱中洗脱出来的时间范围内的数据，并以通常市售的3D-HPLC装置在洗脱时间每隔约0.3秒～1秒处得到信号强度等数据，优选只在该数据中选取洗脱时间每间隔选自约3秒～30秒的等间隔秒数的数据的方法；特别优选只在该数据中选取洗脱时间每间隔选自5秒～20秒的等间隔秒数的数据的方法。
进一步地，优选将通常得到的3D-HPLC指纹图谱数据的取值点的数量减少至1/4～1/100。而且，作为取值点的数量，优选为100个～1000个。特别优选为200个～800个。
关于检测波长，优选选择重要的有效成分具有特征吸收的波长范围。例如，优选检测波长仅限定于200nm～400nm的数据。特别优选检测波长限定于200nm～300nm。
此外，优选将通常得到的3D-HPLC指纹图谱数据的取值点的数量减少至1/2～1/50。进一步地，作为取值点的数量，优选为10个～100个。特别优选为20个～80个。具体地说，通常可以举出以下述方法选择取值点的数量从使用3D-HPLC装置得到的每1nm数量级的波长下的信号强度等数据中，只选取每隔一定波长间隔的数据，优选该间隔为选自2nm～25nm的一定波长间隔，特别优选该间隔选自5nm～20nm的一定波长间隔。
上述多成分药剂的评价方法可以优选用于品质管理。此时特别优选如下的品质管理方法当作为品质管理的对象的一个多成分药剂与单位空间的马氏距离大于选自一定范围的某一值时，将该一个多成分药剂视为不合格。并且，上述一定范围因多成分药剂的种类不同而不同，例如可以优选举出2～1000的范围，特别优选举出10～100的范围。
此外，上述多成分药剂的评价方法可以适宜用于多成分药剂的制造。此时，优选进行制造以使得所制造的多成分药剂与单位空间的马氏距离小于等于选自一定范围的某数值。并且，上述一定范围因多成分药剂的种类不同而不同，例如可以优选举出2～1000的范围，特别优选举出10～100的范围。
具体地说，可以举出如下两种多成分药剂的制造方法只有当应当评价的一个多成分药剂与单位空间的马氏距离在某数值以下时，将该一个多成分药剂选为制品的多成分药剂的制造方法；混合多个多成分药剂或其原料以使所述马氏距离在某数值以下的多成分药剂的制造方法。
本发明的评价方法中，可以将其评价方式作为程序输入计算机来进行运算。
即，可以适宜使用判断一个多成分药剂与多个多成分药剂的差异程度的一元判定程序，该程序用于在计算机中执行至少如下(A)～(D)的操作操作(A)将从形成标准组的多个多成分药剂的3D-HPLC中得到的指纹图谱数据进行保存；操作(B)输入从应当评价的多成分药剂的3D-HPLC中得到的指纹图谱数据，将其与经保存的所述(A)中的指纹图谱数据组合为一个数据组；操作(C)在上述操作(B)的数据组中，相对于多成分药剂的序号、以及洗脱时间或检测波长，来分配MT法中的变量轴，并以信号强度作为MT法中的特征量，利用MT法得到单位空间；操作(D)利用MT法，得到应当评价的多成分药剂与所述单位空间的马氏距离。
该程序也可以活用为记录有该程序的信息记录介质或传递该程序的信息传递介质。此处，信息记录介质是指通用计算机能够读写的信息储存方式(半导体内存、软盘、硬盘等)、光读取方式(CD-ROM、DVD等)等；信息传递介质是指用于使程序信息作为传送波进行传递并提供的计算机网络(LAN、因特网等的WAN、无限通信网络等)、系统中的通信介质(光纤或无线电通信)等。
此外，在上述记录介质中除了记录上述程序外，也可以记录标准组的数据。
即，可为记录有如下(I)和(II)的信息记录介质(I)执行上述操作(A)和(B)的程序；(II)从构成标准组的多个同种多成分药剂的3D-HPLC中得到的指纹图谱数据。
而且，根据每个多成分药剂，例如每个中药制剂，只记录有上述(II)的指纹图谱数据的记录介质在评价中也是有用的。
根据本发明，由于不对HPLC峰进行波形处理，因而数据中的偏差小，可靠性高，由于信息量(取值点的数量)不限于特定成分的峰数，因而可以自由地增减信息量，此外，由于不需要组合多个成分的含量的数值来进行判定，以一个数值就可以进行判定，因此能够简单地对应当评价的一个多成分药剂与标准组的差异程度进行准确、客观、简便、一元的判断。
实施例下面举出实施例和试验例进一步详细说明本发明，但本发明不受这些例子的任何制约。
实施例1步骤(1)和(2)对于株式会社津村社于1998年至2003年的期间内制造的344批次的桂枝茯苓丸中药制剂(浸膏颗粒)(下文中省略表示为“TJ-25”)和A社制造的桂枝茯苓丸中药制剂，以下述方法制备测定样品，按照下述条件获得3D-HPLC的指纹图谱数据。
<测定样品的制备方法>
将3g各批次的浸膏颗粒与100mL甲醇进行混合，使用均质器搅拌100秒。放置2分钟后，从液面和底面的中间位置收集提取液，使用带有预滤器的膜滤器进行过滤，制备测定样品。
<3D-HPLC的指纹图谱数据的获得条件>
测定装置LC-VP系统(岛津制作所制)展开柱TSK-GEL 80TS(Tosoh社制)流动相A液50 mM醋酸-醋酸铵缓冲液B液乙腈梯度条件线性梯度柱温度40℃流速1.0mL/min进样量30μL检测器SPD-M10Avp(岛津制作所制)检测波长200nm～400nm解析软件CLASS-VP(岛津制作所制)如表2所示，对得到的3D-HPLC的指纹图谱数据进行压缩。


由此，取值点的数量如下所示。
多成分药剂的序号…344个检测波长……………11个洗脱时间……………108个在图1中示出数据压缩前后的指纹图谱的一个例子。由此能够毫无疑问地以MT法计算单位空间和马氏距离。
步骤(3)如表3的右列所示，在每个检测波长下，对所得到的3D-HPLC的指纹图谱数据分配MT法中的变量轴。
以10nm的间隔来等分割200nm～300nm的范围，将所得到的11个波长作为“每个检测波长”。


由此，以一般方式得到的指纹图谱数据成为适合MT法数值解析的形式。
步骤(4)如《品质工学的数理》日本规格协会发行(2000)第136-138页、品质工学应用讲座《化学·药学·生物学的技术开发》日本规格协会编(1999)第454-456页及品质工学，11(5)，78-84(2003)中记载的那样，利用MT法得到单位空间，即得到基准点和单位量。
计算时使用(株)Ohken社的MT for windows。
步骤(5)依照上述文献的记载，利用MT法求出A社制的桂枝茯苓丸中药制剂至步骤(4)中得到的基准点的马氏距离。
接着，在步骤(1)中，以表4记载的其他12种桂枝茯苓丸中药制剂代替A社制的桂枝茯苓丸中药制剂作为“应当评价的一个多成分药剂”，除此之外，与上述步骤(1)至步骤(5)同样地计算各个桂枝茯苓丸中药制剂的马氏距离。
在以10nm的间隔对200nm～300nm的范围进行等分割所得到的11个波长下得到马氏距离，作为一个例子，于表4示出230nm的马氏距离。


通过使用在步骤(1)至步骤(5)中得到的每个检测波长下的马氏距离，能够判定某一种桂枝茯苓丸与标准组的差异程度。由此显示出，该评价方法在品质管理上是有效的。
实施例2在实施例1中，在每个检测波长下，得到了相对于各多成分药剂的序号的马氏距离，通过将实施例1中得到的马氏距离作为MT法中的特征量，利用多段MT法如下求出合成马氏距离。
步骤(1)至步骤(5)
与实施例1同样地进行。
步骤(6)如表5所示，分配MT法中的轴。


即，作为数据集如表6所示。


表中，(Di，j)2是当多成分药剂的序号为i、检测波长为j时在实施例1中所得到的马氏距离。
步骤(7)及步骤(8)与实施例1同样地求出单位空间，计算合成马氏距离。
图2所示的图中，将为了得到单位空间而共同使用的344个批次的津村社制的桂枝茯苓丸(TJ-25)的合成马氏距离作为横轴，将具有该马氏距离的样品个数作为纵轴。另外，出于其定义，为了得到单位空间而使用的344个批次的TJ-25的马氏距离的平均值总是为1。
相当于应当评价的多成分药剂的2个津村社制的桂枝茯苓丸和11个津村社制以外的桂枝茯苓丸中药制剂至基准点的合成马氏距离示于表7。


通过使用所得到的合成马氏距离，可以以一个数值判定所述桂枝茯苓丸中药制剂与344个津村社制的桂枝茯苓丸中药制剂(TJ-25)的差异程度。例如，明显可以看出，G社制和C社制-II与由344个TJ-25构成的标准组的差异最大。
而且，使用合成马氏距离，可以作出较宽的检测波长范围下的广泛的评价。
而且，可以看出，利用该评价方法能够制造出品质稳定的桂枝茯苓丸中药制剂。
此外，可以看出，关于津村社制桂枝茯苓丸中药制剂(TJ-25)，记录了MT法的单位空间数据的记录介质在评价中是有用的。
实施例3对于株式会社津村社于1998年至2003年的期间内制造的100个批次的补中益气汤(下文中省略表示为TJ-41)，用与实施例1、2相同的方法制备测定样品，在同样的条件下获得3D-HPLC的指纹图谱数据，利用MT法得到单位空间，即得到基准点和单位量。
求出为了得到上述单位空间所使用的全部TJ-41和津村社制以外的6种补中益气汤样品与单位空间的马氏距离。使用马氏距离，能够简单、准确、客观地判断出一种补中益气汤与基准点的差异程度。
于图3(a)示出马氏距离为1.0的补中益气汤(TJ-41)的指纹图谱。而且，于图3(b)示出马氏距离为2704的补中益气汤的指纹图谱。只看指纹图谱无法了解它们的差异程度，但通过本发明得到的马氏距离中，1.0和2704这两个数值大不相同，由此可知，马氏距离在对多成分药剂之间的差异程度进行定量判断时是有力的。
实施例4步骤(1)和(2)对于株式会社津村社于1999年至2003年的期间内制造的251个批次的桃核承气汤中药制剂(浸膏颗粒)(下文中省略表示为“TJ-61”)和A社制造的桃核承气汤中药制剂，以下述方法制备测定样品，按照下述条件获得3D-HPLC的指纹图谱数据。
<测定样品的制备方法>
将2g各批次的浸膏颗粒与100mL甲醇进行混合，使用均质器搅拌100秒。放置2分钟后，从液面和底面的中间位置收集提取液，使用带有预滤器的膜滤器进行过滤，制备测定样品。
<3D-HPLC的指纹图谱数据的获得条件>
测定装置LC-VP系统(岛津制作所制)展开柱TSK-GEL 80TS(Tosoh社制)流动相A液 50mM醋酸-醋酸铵缓冲液B液 乙腈梯度条件线性梯度柱温度40℃流速1.0mL/min
进样量30μL检测器SPD-M10Avp(岛津制作所制)检测波长200nm～400nm解析软件CLASS-VP(岛津制作所制)如表8所示，对所得到的3D-HPLC的指纹图谱数据进行压缩。


由此，取值点的数量如下所示。
多成分药剂的序号…251个检测波长……………21个洗脱时间……………145个步骤(3)如表9的右列所示，在每个检测波长下，对所得到的3D-HPLC的指纹图谱数据分配MT法中的变量轴。
以10nm的间隔来等分割200nm～400nm的范围，将所得到的21个波长作为“每个检测波长”。


由此，以一般方式得到的指纹图谱数据成为适合MT法数值解析的形式。
步骤(4)利用MT法得到单位空间，即得到基准点和单位量。
计算时使用(株)Ohken社的MT for windows。
步骤(5)利用MT法求出A社制的桃核承气汤中药制剂与步骤(4)中得到的基准点的马氏距离。
接着，在步骤(1)中，以表10记载的其他9种桃核承气汤中药制剂代替A社制的桃核承气汤中药制剂作为“应当评价的一个多成分药剂”，除此之外，与上述步骤(1)至步骤(5)同样地计算各个桃核承气汤中药制剂的马氏距离。
在以10nm的间隔等分割200nm～400nm的范围所得到的21个波长下得到马氏距离，作为一个例子，于表10示出280nm下的马氏距离。


通过使用在步骤(1)至步骤(5)中得到的每个检测波长下的马氏距离，能够判定某一种桃核承气汤与标准组的差异程度。由此显示出，该评价方法在品质管理上是有效的。
步骤(6)
在每个检测波长下，得到了相对于各多成分药剂的序号的马氏距离，通过将步骤(1)至步骤(5)中得到的马氏距离作为MT法中的特征量，利用多段MT法如下求出合成马氏距离。
如表11所示，分配MT法中的变量轴。


即，作为数据集如表12所示。


表中，(Di，j)2是当多成分药剂的序号为i、检测波长为j时在步骤(5)中所得到的马氏距离。
步骤(7)及步骤(8)与步骤(1)至步骤(5)同样地求出单位空间，计算合成马氏距离。
图4所示的图中，将为了得到单位空间所共同使用的251个批次的津村社制的桃核承气汤(TJ-61)的合成马氏距离作为横轴，将具有该马氏距离的样品个数作为纵轴。另外，出于其定义，为了得到单位空间而使用的251个批次的TJ-61的马氏距离的平均值总是为1。
相当于应当评价的一个多成分药剂的3个津村社制的桃核承气汤和7个津村社制以外的桃核承气汤中药制剂至基准点的合成马氏距离示于表13中。


通过使用所得到的合成马氏距离，可以以一个数值判定所述桃核承气汤中药制剂与251个津村社制的桃核承气汤中药制剂(TJ-61)的差异程度。例如，明显可以看出，F社制-I和D社制与由252个TJ-61构成的标准组的差异最大。
于图5(a)中示出马氏距离为1.0的桃核承气汤(TJ-61)的指纹图谱。并且，于图5(b)中示出马氏距离为35178330的桃核承气汤的指纹图谱。
工业上的可利用性根据本发明，提供一种多成分药剂的评价方法，该方法的可靠性高，由于可以自由增减信息量因而能够适当缩短处理数据的时间，能够以一个数值简单地对应当评价的一个多成分药剂与标准组的差异进行判定。因此，由于能够简单地评价多成分药剂的差异程度，可以用于公司内部的品质管理。而且，利用该评价方法可以适宜制造多成分药剂。
此外，通过将全国或国际上的统一标准预先定义为本发明的单位空间，能够判定出某个多成分药剂与该标准的差异，从而能够提供具有稳定品质的中药制剂等多成分药剂。
权利要求
1.一种多成分药剂的评价方法，该评价方法的特征在于，使用至少通过如下步骤(1)至步骤(5)所得到的马氏距离，对应当评价的多成分药剂与作为标准组选出的多个多成分药剂的差异程度进行判定；其中，所述步骤为步骤(1)获得所述应当评价的多成分药剂的三维高效液相色谱法的指纹图谱数据；步骤(2)将上述步骤(1)中得到的指纹图谱数据与构成标准组的其他同种多成分药剂的三维高效液相色谱法的指纹图谱数据相组合；步骤(3)在所述步骤(2)的指纹图谱数据中，相对于多成分药剂的序号、以及洗脱时间或检测波长，来分配MT法中的变量轴，并将信号强度作为MT法中的特征量；步骤(4)利用MT法，由所述步骤(3)的特征量得到单位空间；步骤(5)利用MT法，得到应当评价的多成分药剂与所述步骤(4)中所得到的单位空间的马氏距离。
2.一种多成分药剂的评价方法，该评价方法的特征在于，使用至少通过如下步骤(1)至步骤(8)所得到的马氏距离，对应当评价的多成分药剂与作为标准组选出的多个多成分药剂的差异程度进行判定；其中，所述步骤为步骤(1)获得所述应当评价的多成分药剂的三维高效液相色谱法的指纹图谱数据；步骤(2)将上述步骤(1)中得到的指纹图谱数据与构成标准组的其他同种多成分药剂的三维高效液相色谱法的指纹图谱数据相组合；步骤(3)在所述步骤(2)的指纹图谱数据中，相对于多成分药剂的序号、以及洗脱时间或检测波长中的任意一项，来分配MT法中的变量轴，并将信号强度作为MT法中的特征量；步骤(4)利用MT法，由所述步骤(3)的特征量得到单位空间；步骤(5)在每个检测波长或洗脱时间，利用MT法，得到全部的多成分药剂与所述步骤(4)中所得到的单位空间的马氏距离；步骤(6)相对于多成分药剂的序号和步骤(3)中未分配变量轴的另一项，来分配MT法中的变量轴，并将步骤(5)中得到的马氏距离作为MT法中的特征量；步骤(7)利用MT法，由所述步骤(6)的特征量得到第2单位空间；步骤(8)利用MT法，得到应当评价的多成分药剂与所述步骤(7)中所得到的第2单位空间的马氏距离。
3.如权利要求1所述的多成分药剂的评价方法，其中，在所述步骤(2)中，将洗脱时间分配为MT法中的项目轴即x轴，将多成分药剂的序号分配为MT法中的序号列轴即y轴，将特征量作为信号强度。
4.如权利要求2所述的多成分药剂的评价方法，其中，在所述步骤(6)中，将检测波长分配为MT法中的项目轴即x轴，将多成分药剂的序号分配为MT法中的序号列轴即y轴，将特征量作为所述步骤(5)中得到的每个检测波长下的马氏距离。
5.如权利要求1～4任意一项所述的多成分药剂的评价方法，其中，所述步骤(2)中，标准组为某一公司制造的多成分药剂的组。
6.如权利要求1～4任意一项所述的多成分药剂的评价方法，其中，所述步骤(2)中，标准组为得到指纹图谱数据的全部多成分药剂的组。
7.如权利要求1～6任意一项所述的多成分药剂的评价方法，其中，对所述指纹图谱数据进行压缩以使其适用于MT法。
8.如权利要求7所述的多成分药剂的评价方法，其中，所述数据的压缩被限定于多成分药剂的有效成分从柱中进行洗脱的时间范围内，按照洗脱时间每间隔选自3秒～30秒的一定秒数来选择采取取值点，由此进行数据的压缩。
9.如权利要求7或8所述的多成分药剂的评价方法，其中，选择采取100个～1000个取值点作为洗脱时间，由此进行数据的压缩。
10.如权利要求7～9任意一项所述的多成分药剂的评价方法，其中，数据的压缩通过限定于选自200nm～300nm的范围内的多个检测波长下的数据来进行。
11.如权利要求7～10任意一项所述的多成分药剂的评价方法，其中，所述数据的压缩通过选择采取检测波长在选自2nm～25nm的每等间隔的波长下的取值点来进行。
12.如权利要求7～11任意一项所述的多成分药剂的评价方法，其中，所述数据的压缩通过选择采取10个～100个取值点作为检测波长来进行。
13.如权利要求1～12任意一项所述的多成分药剂的评价方法，其中，所述多成分药剂为中药制剂。
14.如权利要求1～13任意一项所述的多成分药剂的评价方法，其中，不将多成分药剂的三维高效液相色谱法的指纹图谱数据分离为多成分药剂的各化学成分的信号强度。
15.一种多成分药剂的品质管理方法，在该品质管理方法中，使用权利要求1～14任意一项所述的多成分药剂的评价方法，当一个多成分药剂与单位空间的马氏距离大于规定的值时，将该一个多成分药剂视为不合格。
16.一种多成分药剂的制造方法，该制造方法使用权利要求1～14任意一项所述的多成分药剂的评价方法，按照一个多成分药剂与单位空间的马氏距离为规定值以下的方式进行所述多成分药剂的制造。
17.对一个多成分药剂与多个多成分药剂的差异程度进行判断的一元判定程序，该程序用于使计算机执行至少如下(A)～(D)的操作操作(A)将从形成标准组的多个多成分药剂的三维高效液相色谱法中得到的指纹图谱数据进行保存；操作(B)输入从应当评价的多成分药剂的三维高效液相色谱法中得到的指纹图谱数据，将其与经保存的所述(A)中的指纹图谱数据组合为一个数据组；操作(C)在上述操作(B)的数据组中，相对于多成分药剂的序号、以及洗脱时间或检测波长，来分配MT法中的变量轴，将信号强度作为MT法中的特征量，利用MT法得到单位空间；操作(D)利用MT法，得到应当评价的多成分药剂与所述单位空间的马氏距离。
18.一种信息记录介质，其记录有权利要求17所述的程序。
19.一种信息传递介质，其对权利要求17所述的程序进行传递。
20.一种信息记录介质，其记录有如下(I)和(II)(I)执行所述操作(A)～(D)的程序；(II)从构成标准组的多个同种多成分药剂的三维高效液相色谱法中得到的指纹图谱数据。
全文摘要
本发明涉及一种多成分药剂的评价方法。本发明提供的多成分药剂的评价方法中，将通过3D－HPLC得到的应当评价的多成分药剂的指纹图谱数据与构成标准组的其他同种的多成分药剂的3D－HPLC的指纹图谱数据相组合，并以MT法进行处理，由此，能够根据使用了马氏距离的一个数值对应当评价的多成分药剂的品质、安全性、功效等进行评价。
文档编号G01N30/88GK1965233SQ20058001860
公开日2007年5月16日 申请日期2005年6月6日 优先权日2004年6月7日
发明者矢野耕也, 服部尚子 申请人:株式会社津村