专利名称：：用于评价个体变应原敏感性的方法
技术领域：
：本发明涉及监测变应原免疫治疗效果的方法。技术背景变态反应是免疫系统的功能障碍，其中个体是过敏性的，对被称为变应原的、典型的本质上无害物质产生免疫反应。参与变态反应的主要抗体是IgE。每个个体都具有不同的IgE抗体，并且每个变态反应物质刺激产生其本身特定的IgE产物。因此，结合定义的变应原的IgE抗体仅仅与该变应原产生反应。IgE的恒定区(Fc区域)能够结合特定的细胞受体，其能够释放组胺或者其它炎症介质、细胞因子和/或蛋白酶进入周围组织。释放组胺的细胞主要是肥大细胞和嗜碱粒细胞。当结合细胞的IgE通过变应原接触并交联时，就会引发释放组胺。特别地，组胺引起主要的变态反应。例如在鼻、眼和窦房结中释放的组胺刺激打喷嚏、流鼻涕和眼睛发痒；在肺部释放的组胺会引起气道的内层(lining)的收縮和膨胀，并引起分泌稠黏液；在皮肤释放的组胺会引起疹或荨麻疹；在消化系统释放的组胺会引起胃痉挛和腹泻。典型的反应原来自植物花粉，比如黑麦草、豕草、梯牧草和白桦树花粉、霉菌孢子，药物比如青霉素类、磺胺嘧啶类(sulfanomides)、水杨酸盐类和局部麻醉剂类，食物比如坚果、海鲜，蛋类，豌豆、豆类、花生以及其他豆类、牛奶，昆虫产物比如蜜蜂蛰毒、黄蜂螫毒、蟑螂和尘螨，及动物毛发和皮屑。存在许多变态反应的医学治疗方法。在医学实践中通常使用三种主要的方法化疗、免疫疗法以及其它的医学方法。在化疗中，拮抗药常被用于阻断变态反应介质的反应，防止细胞活化和去颗粒化过程。它们包括抗组胺剂、肾上腺皮质素、肾上腺素(肾上腺素制剂(印in印hrine))、胆茶碱和色甘酸钠。这些药物有助于减轻过敏性症状，但是在长期缓解病症中起的作用很小。它们在某些患有过敏症的患者的急性恢复中起紧急作用。在其它药物中，医生们认为许多治疗方法在治疗过敏症中是有效的，尤其是传统中药。然而，这些中没有一种得到良好的品质证据的支持。最有前景的治疗形式可能是免疫疗法。在免疫疗法过程中，个体逐渐接种，以抗逐渐增加剂量的相应免疫原。这样可以减轻过敏的严重行或者完全消除过敏症。另外，可以注射单克隆的抗-IgE抗体。这些抗体结合游离的IgE，其发出用于破坏的这些信号源。但它们不会结合己经在嗜碱粒细胞和肥大细胞上的Fc受体的IgE，因为这将刺激过敏性炎症应答。在变态反应免疫反应中使用的蛋白质和糖蛋白通常是从以下物质中提取的，比如花粉，霉菌，毛皮和昆虫毒液。根据临床评价，每周一次或两次以递增的剂量重复皮下注射引起疾病的变应原或其衍生物的溶液，直至达到维持剂量。然后，每2到4周注射该维持剂量。为了以一种成功的方法实现免疫治疗，必须进行对所述疗法进程的监测。例如，Wantke等(ClinExpAllergy23(1993)992-995)公开了监测用于过敏性结膜炎(rhinoconjimctivitis)的免疫疗法的方法。其中作者分析了自发性组胺释放，即，在免疫治疗前和免疫治疗后的病人中，不加入变应原而释放的组胺，并且，其还显示暴露于变应原后的释放进入血液中的组胺在治疗4个月后明显减少。但是，该方法不能用于评估对某种特定的变应原和治疗的特定效果的敏感性改变。St印han等(Allergy44(1989)453-459)经超过五年的时间通过分析变应原诱发组胺在全血中的释放研究了蜂毒免疫疗法的效果。但是，该项研究的作者并没有将组胺释放的结果和临床参数联系在一起，例如，皮肤敏感性，因此也没有数据证实使用所述试验可测定和反映给定变应原的临床敏感性。而且，在治疗前后获得的样本也不能互相比较。Yuta等(Arerugi51(2002)634-648)研究了从嗜碱粒细胞中释放的组胺，其用于评价过敏性鼻炎的免疫治疗。作者分析了治疗开始时和免疫治疗6个月后的样本，并表明了治疗的积极效果。在这篇文献中，分析了治疗前后获得的样本，作者仅能够表明该短暂记录(rushprotocol)导致细胞衰竭，但并未表明组胺释放减少。在这篇文献中，其表明在免疫治疗诱导的"封闭性抗体"之前短暂免疫治疗已经开始发挥作用，g卩，在几小时或者几天之后。这可以解释为细胞的衰竭。然而，对在治疗几周后出现的封闭性抗体的效果评估是很重要的。因此，必须采用IgG抗体仍旧存在于例如全血中的分析测定。与此相反，在Yuta等人的文章中，细胞被清洗过，因此，不能测定此阻滞IgG的干扰。除了组胺释放之外，用于评价嗜碱细胞和肥大细胞活性的其它方法是己知的，其包括测量leutrienes的释放(VanRooyen&Anderson:R.J.Immunol.Methods2004，288，1-7)，纤维蛋白溶酶(TairaM等.，J.Asthma2002，39，315-322)和其它肥大细胞或嗜碱细胞产物的释放，当特异性变应原激活肥大细胞和嗜碱细胞时，释放这些产物。此外，由于个体暴露在变应原中导致活性的标记物比如CD63和CD203c的上调也可以通过流式细胞计量法测定(HauswirthA.W.等J.AllergyClin.Immunol.2002，110，102-109)。
发明内容因此，本发明的一个目的是提供检测个体变应原免疫治疗的可能的临床有效性和进程和个体变应原敏感性的体外途径和方法。因此，本发明提供一种评价个体变应原敏感性和/或变应原免疫疗法的临床有效性的方法，其包括步骤一采集至少两个来自接受或打算接受用至少一种纯的变应原或其衍生物免疫治疗个体的样本，所述样本选自血液或者其成分、结缔组织、鼻的、支气管的、皮肤的或者消化道的活组织检查物质，其中所述样本包含对所述变应原产生应答时能够释放介质的细胞，一使所述样本与所述变应原或其衍生物接触，和一确定从所述样本中释放出的介质含量，并且评价个体在治疗前的变应原敏感性和/或通过比较所述含量来评价免疫治疗的临床效果。为了保证有效的治疗，对个体变应原敏感性和/或临床效果，以及变应原免疫治疗的进程的评价是很重要的，例如，所述评价通过改变变应原的给药剂量和/或给药时间间隔。因此，需要一种可靠的方法来监测免疫治疗，该方法能够直接反应个体在免疫治疗过程中对某类型的变应原蛋白酶传染性因子的敏感性。与变应原特殊结合的IgE量的检测证实其并不适于确定个体对于某种类型的变应原的致敏性程度，因为存在于个体中的IgE量与从肥大细胞和嗜碱性细胞释放出的介质之间没有直接的相关性。所以，包含介质释放细胞的个体样本的介质释放是优选的。令人惊奇的是，根据本发明的方法提供了与传统使用的皮肤过敏试验相比，如果不是相同的也是相当的结果。从个体采集到的样本优选地与免疫治疗中相同的变应原接触。但是，也有可能用过敏原提取物进行免疫治疗，并用基本上纯化的("纯的")变应原来监测所述治疗。当然，根据本发明的方法也可以通过确定个体变应原在治疗过程中的敏感性来监测变应原免疫治疗的进程。根据本发明的"变应原"是能够诱导产生特异性抗体(IgE)的分子或分子混合物，IgE触发介质释放细胞释放介质，且引起个体继发的过敏应变效应。当然，"变应原"也能够诱导产生不同于IgE的抗体(例如，IgG)。然而，在根据本发明的方法中使用的变应原优选为纯化的，即，变应原实质上由一种单一的变应原分子组成，其中纯度超过90%(w/w)，优选95%(w/w)，最优选99°/q(w/w)。由于使用了基本上纯化的或者分离的变应原，才有可能以可再现的方式确定和计量在免疫治疗中和在根据本发明的方法中使用的变应原。与此相反，取决于特定的纯化条件，变应原提取物包含不同浓度的特异性变应原。此外，过敏原提取物也可以包含多于一种变应原，其可以以不同浓度存在于提取物中(需要的变应原的量不能以精确的方式定义)，并且可以进一步引起交叉反应(例如见MarthK等(2004)J.AllergyClin.Immunol.113:470-474;MarthKetal.(2004)XXIIIEAACIcongressabstractbook597181;AkkerdaasHJetal.(2003)Arb.PaulEhrlichInst.BundesamtSeraImpfstoffeFrankf.a.M.94:87-95)。此外，变应原提取物可能含有影响所述提取物稳定性的杂质或其他物质。该问题也可通过使用基本上纯化的或者'纯的"变应原来避免。如在本文中使用的术语"衍生的"变应原是指经过修饰的变应原(删除、定点突变、截短等等)，它们仍显示出与衍生其的天然变应原相同的变应原性质和IgE结合性。根据本发明的一个优选的实施选方式，所述介质选自组胺、纤维蛋白溶酶、前列腺素、白三烯，尤其是半胱氨酰白三烯，嗜酸细胞阳离子蛋白、细胞因子比如白介素(IL)，特别是IL-2R、CD63、CD203c及其组合。将所述个体暴露于变应原之后，个体的变应性反应主要是由肥大细胞释放的介质引起的。这些介质产生了变应性反应的早期症状(例如喷嚏、搔痒)，且生成刺激产物并渗透到粒细胞循环的局部组织中(例如，嗜酸性细胞)。该介质可由通过脱粒(组胺或蛋白酶)或重新合成所述介质之后从细胞中释放(QuraishiS.A等人，JA0AS叩plement5，104:S7-S15)。根据本发明，也可确定了除介质之外的激活标记物(例如YoshimuraC等(2002)JAllergyClinImmunol.109:817-23)。样本是血液或其成分(例如血浆、血清)、结缔组织、鼻的、支气管的、皮肤或者消化道的活组织检査物质。介质释放细胞可以发现于血液及其成分、结缔组织和某些其它组织中。令人惊奇地发现，当使用纯的变应原，尤其是当使用全血时，根据本发明的方法非常精密地反映出表皮敏感性。与此相反，特异性IgE的测定与表皮的敏感性并不相关。因此，本发明所采用的样本可以是血液样本(优选肝素化血(h印arinisedblood))或者结缔组织。在根据本发明的方法中使用的介质释放细胞可以是从样本中分离出来的。由于这种分离，可除去存在于所述样本中的其它可能的干扰物质。例如，特别是考虑到在样品与变应原接触时测定释放进入样本中的介质量的过程中，血液可以包含能提供高背景的释放介质。这一问题可以通过在样本暴露于变应原之前，测定存在于其中的介质量来避免。另一方面，试验数据显示组胺释放与皮肤敏感性之间基本上没有相关性，例如存在。因此，根据本发明是使用的样本在与变应原或其衍生物接触之前并不是分离的或洗过的。这一点可以通过以下事实来推导，当洗涤介质释放细胞时，样本中所有的抗体都被去除，包括其应当在变应原治疗期间诱导的那些IgG抗体，和其将起阻断抗体的作用以减少IgE变应原复合物的量(因为其与IgE分子竞争)的那些IgG抗体(参见，例如Stahl-Skov等人(1977)Clin.Exp.Immunol.27:432-439)。优选地，所述细胞为肥大细胞和/或嗜碱细胞和/或嗜酸细胞。肥大细胞和嗜碱细胞为当暴露在变应原中时释放大多数介质，尤其是组胺的细胞。肥大细胞存在于皮肤、肺和胃肠道的结缔组织中，而嗜碱性细胞存在于血液中。这些细胞可以通过已知的方法分离，并可用于根据本发明的方法中。用于肥大细胞的分离试验设计参见JamurMC等(JHistochemCytochem.199745:1715-1722)，MasseyWA(JImmunol.1991147:1621-7)，用于嗜碱性细胞的分离方法参见ValentP.(Proc.Natl.Acad.SciUSA1989，86，5542-5546)。根据本发明的一个优选实施例，所述样本进一步包含免疫球蛋白(Ig)，尤其是免疫球蛋白G(IgG)。所述过程优选地用包含IgG的样本来例如，全血样本来进行。在这些样本中存在IgG是优选的，因为其使得将所述细胞暴露于变应原时能测定阻断IgG的干扰。在变应原免疫治疗过程中，产生了耙向于所述变原的IgGs。当将个体与所述变应原接触，并阻止变应原与IgE结合时，这些IgGs结合变应原。因为，变应原结合IgGs的产物直接参与个体对变应原的应答，从而，影响个体对变应原的敏感性，因此，所述该样本优选地应当包括IgGs。为了评价个体对变应原的敏感性或者变应原免疫疗法的临床效果，优选地在所述个体接受免疫治疗前后采集样本。为监测和评价免疫治疗的效果，有必要在治疗前和治疗过程中测定个体对于变应原的敏感性。因此，在治疗的不同阶段确定介质释放。在治疗过程中，变应原的敏感性理想地下降。而且，在治疗前的一个或多个时间点测定介质释放可能有助于在治疗过程中定量所述变应原。根据本发明的另一个优选地的实施方案，所述样本是在所述个体在接受免疫治疗后采集的。当然，免疫治疗也可以通过在首次给予包含一种变应原的药物后分析样本来单独评价。优选地，至少一个样本为在所述个体接受免疫治疗后最长1小时、2小时、6小日寸、12小时、24小时、5天、10天、4周、6个月、12个月、24个月和36个月后采集。被分析的样本可以在首次给予变应原药物后一个确定的时间段后被采集。同时单独确定释放的介质之间的时间间隔最好是在1小时、2小时、6小时，、12小时、2天、5天、l周、2周、4周、2个月、4个月、6个月、12个月、24个月之间变化。根据本发明的一个实施方案，所述变应原是重组产生的。有效的变应原免疫治疗和精确测定介质释放的方法优选地用由重组产生的变应原进行。由于基因工程很可能产生一种高含量的特异性变应原，并分离所述变应原。变应原通常直接分离自包含变应原的原料(例如，花粉)，并且由于所述变应原包含在提取物中，所述变应原通常是不同的变应原和潜在的致敏性物质的混合物的一部分。甚至纯化的"天然的变应原"包含各种亚型，这些亚型中的某些可能甚至是高过敏性的或非过敏性的，从而，给出错误的测试结果(FerreimF.等.，J.Exp.Med.1996，183，599-609)。这一问题可以由变应原的重组产品而避免。用于对个体给药使用的变应原也可以用于根据本发明的方法中。所述变应原优选地包括至少一个删除部分，至少一个替代部分或者至少一个插入部分。在治疗过程中，无论患者是否对低变应原或者它们的衍生物变得敏感，都可使用这些低变应原或者其衍生物。根据本发明一个优选的实施方案，所述变应原通过基因工程重组所述变应原片段而被修饰。优选地，使所述样本与不同浓度的所述变应原接触。从介质释放细胞释放出的介质的量取决于根据本发明的方法中应用的变应原的浓度。用于诱导不同量的介质释放的变应原的浓度越高，从个体采集到的细胞的敏感性就越低，反之亦然。因此，介质释放量的确定需要采用不同浓度的变应原。优选地，所述变应原的浓度选自lng/ml到lOOPg/ml的范围内，优选lpg/ml至10Pg/ml的范围内。根据一个优选的实施方案，确定包含在从个体采集的样本中的细胞介质总量。为了测定存在于细胞中的介质总量，将这些细胞例如经过几次冻融循环而进行裂解。确定的介质量表明所述介质可能通过所述细胞释放，该值可以被用于确定细胞对于某一变应原的细胞致敏度。细胞致敏度(degreeofcellularsensitisation)优选地是通过确定能诱导10%，优选30%的所述细胞介质的总量的所述变应原的浓度来定义。细胞致敏度是免疫治疗进程的指针，因为它显示了占10%，优选20%，25%,30%的存在于介质释放细胞中的介质的总量的细胞的浓度。在一个理想的变应原免疫治疗过程中，使用的变应原浓度将增加，因为从所述细胞释放一定量介质的高浓度的变应原表明细该胞比先前测定的细胞敏感性低。而且，也可以评价诱导介质释放的最大剂量。这样就产生了剂量响应曲线，和用于测定所述曲线在变应原免疫治疗过程中的变化。因此，个体的变应原敏感性和/或变应原免疫治疗的临床效果优选地通过观察在所述免疫治疗过程中细胞的致敏度来评价。根据本发明一个优选的实施方案，样本中的介质通过免疫法和/或色谱法来测定，优选的方法选自放射免疫测定法(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)、逆转录酶多聚酶链式反应、免疫荧光流式细胞计量法及其组合。所有这些方法已经被确定接近临床的敏感性。然而，这些方法中没有一种用于观察在血清学，嗜碱细胞激活作用(basophilactivation)和皮肤敏感性中纯的变应原(例如PierkesM.等JAllergyClinImmunol.(1999)103:326-32;DiLorenzoG.等，JAllergyClinImmunol.(1997)100:832-7)。本发明使用的优选的变应原包括所有如在www,allergen.org/List,htm中可获得的所有主要的蛋白质变应原。根据本发明特定优选的变应原包括大部分的变应原，如大部分的白桦花粉变应原，如Betv1，大部分的梯牧草花粉变应原，如Phlp1、Phip2、Phip5和Phlp6，大部分的房尘螨变应原，如Derp1、Derp2，大部分的猫变应原，如Feld1，大部分的蜜蜂和黄蜂变应原(见列表)，其它抑制蛋白，特别是Phlp12，其他的白桦变应原，尤其是Betv4，储螨(storagemite)变应原，尤其是L印d2，和在表l中列出的变应原。表l:本发明优选的变应原(包括参考实施例)变应原物种名称变应原名称生物化学ID或者旧名豚草(Ambrosiaartemisiifolia)短豕草(shortragweed)Amba1抗原EAmba2抗原KAmba3Ra3Amba5Ra5Amba6Ra6MWcDNA或者参考蛋白质Acc.No83811510CCCCC8，208，212211，2324,25Amba7Ra712P三裂叶豚草(Ambrosiatrifida)巨型豕草(giantragweed)Ambt5Ra5G4.4C北艾(Artemisiavulgaris)艾蒿(mugwort)Artv127-29CArtv235PArtv3脂质转移蛋白12PArtv4抑制蛋白14C向曰葵(Heliarvthusannuus)向日葵(sunflower)Hela134Hela2抑制蛋白15.7C山靛(Mercurialisannua)Mera1抑制蛋白14-15C石竹目(Caryophyllale)灰菜(Chenopodiumalbum)藜(lamb's-quaxters)，黎(pigweed)，Chea117C白藜(whitegoosefooOChea2抑制蛋白14CChea3polcalcin10C钾猪毛菜(Salsolakali)俄国蓟草(Russian-thistle)Salk143P蔷薇目(Rosales)蓰草(Humulusjaponicus)日本蛇麻草(Japanesehop)Humj4wC犹大墙草(Parietaxiajudaica)Parjl脂质转移蛋白115CParj2脂质转移蛋白2CParj3抑制蛋白C269，10，272828A532929AY15210Y13271AY049012,29BAY082337AY08233829CAY335187参考变应原异构体(isoallergens)的歹據参考变应原异构体的列表参考变应原异构ParietariaofficinalisParol脂质转移蛋白15体的列表29DB.草未草目(Poales)洋根草(Cynodondactylon)百慕大草(Bermudagrass)Cynd132C30，S83343Cynd7C31，X91256Cynd12抑制蛋白14c31a，Y08390Cynd159cAF517686Cynd22w烯醇化酶数据审理中(pending)Cynd23Cynd149cAF517685Cynd24发病机理相关的p.21p审理中鸭茅(Dactylisglomerata)野茅(orchardgrass)Dacg1AgDgl32Dacg211Dacg3Dacg531草甸羊茅(Festucapratensis)牛尾草(meadowfescue)Fesp4w60绒毛草(Holcuslanatus)天鵝绒草(velvetgrass)HoiI1黑麦草(Loliuraperenne)ryegrassLolp1groupI27Lolp2groupII11Lolp3groupIII11Lolp5LolpIX，LolplbLolp11hom:胰蛋白酶抑制剂16喜湿篛草(Phalarisaquatica)金黄草(canarygrass)PCCP3233，S4535433A,U2534334CCPP31/35CZ2708435,3637,37A，X733633834，3939APhaa1C猫尾草(Phleumpratense)梯牧草(timothy)Phipi27CPhip2CPhip4PPhip5Ag2532CPhip6CPhipll胰蛋白酶抑制剂族.20CPhip12抑制蛋白Phip13多聚半乳糖醛酸酶55-60C草地早熟禾(Poapratensis)肯塔基蓝草(Kentuckybluegrass)Poap1组I33PPoap531/34C假高梁(Sorghumhalepense)石茅高梁(Johnsongrass)Sorh1C40,S80654X78813X75925，4141A42Z27082,43AF521563，43ACX77583,44AJ23884B4634，4748C.树槟榔目(Arecales)海麥(Phoenixdactylifera)椰麥(datepalm)Phod2抑制蛋白14.3CAsturiaspc.山毛榉目(Fagales)普通赤杨(Alnusglutinosa)红桦(alder)Alng1白桦(Betulaverrucosa)西南桦(birch)Betv1Betv2抑制蛋白Betv317CS5089217C参考变应原异构体的列表15CM65179CX79267Betv4Betv6h:异黄酮还原酶Betv7亲环蛋白欧洲鹅耳栃(Carpinusbetulus)铁树(hornbeam)Carb1欧洲板栗(Cast騰asativa)板栗(chestnut)Cass1Cass5甲壳酶Cass8脂质转移蛋白欧榛(Corylusavellana)榛树(hazel)Cora1Cora2抑制蛋白Cora8脂质转移蛋白Cora911S球蛋白样蛋白Cora10腔结合蛋白.Cora117S豌豆球蛋白样蛋白美洲l白橡(Quercusalba)白栎(Whiteoak)Quea18CX87153,S5481933.5C参考变应原异构体的列表18PP8153117C参考变应原异构体的列表22P529.7P5317C参考变应原异构体的列表14C9C40/CBeyerp.c.70CAJ29561748CAF44186417P54唇形目(Lamiales)木犀科(Oleaceae)欧聘(Fraxinusexcelsior)零树(ash)Frae1普通女贞(Ligustrumvulgare)女贞子(privet)Ligv1欧盟成员国橄榄(Oleaeur叩ea)橄榄树(olive)01ee101ee2抑制蛋白01ee320P58A，AF52629520P58A16C59,6015-18C60A9.260BOlee432Olee5超氧化剂物歧化酶Olee610Olee7Olee80&2+-结合蛋白21Olee9beta-1,3-葡聚糖酶Olee10糖基水解酶族11欧洲丁香(Syringavulgaris)紫丁香(lilac)Syrv1车前草禾斗(Plantaginaceae)长叶车前(Plantagolanceolata)EnglishplantainPla1118PP8074116PP80740C60C'U86342P60D'P81430C60E,AF07867946CAF249675C60F，AY08233520P58AP84224241-45CC43松杉目(Pinales)CryptomeriajaponioasugiCryj1Cryj2Cupressusarisordca柏树(cypress)Cupa1地中海柏木(Cupressussempervirens)线杉(commoncypress)Cupsi43CCups3w34C美国雪松(Juniperusashei)朿U柏(mountaincedar)Juna143PJuris2CJuna330P杜松木(Juniperusoxycedrus)希腊阿伯刺桧(pricklyjuniper)Juno4hom:钙调蛋白29C55，56S7，D29772A1243570参考变应原异构体的列表refpendingP8129457A，AJ40465357B,P8129557C，AF031471香柏(mountaincedar)Juns150维吉尼亚雪松(Juniperusvirginiana)东方红柏(easternredcedar)Junv14358P81825，58B悬铃木禾斗(Platanaceae)二球悬铃木(PlatanusacerifoliaLondonplanetreePlaa1Plaa2Plaa3脂质转移蛋白18PP8281743PP8296710PIrisp.c.D.螨(Mites)粗脚粉螨(Acarussiro)螨(mite)Acas13脂肪酸结合蛋白热带无爪螨(Blomiatropicalis)螨(mite)节肢动物14*粉尘螨(Dermatophagoidesfaxinae)美洲(屋尘瞒(Americanhousedustmite)Derf1半胱氨酸蛋白酶25Derf214CCAJ006774Biot1半胱氨酸蛋白酶39CAF277840Biot3胰蛋白酶24*CCheongp，c.Biot4a淀粉酶56CCheongp.c.Bio.t5CU59102Biot6糜蛋白酶25CCheongp,c.Biot10原肌球蛋白33C61Biot11副肌球蛋白110CAF525465,61ABiot12BtllaCU27479Biot13Bt6,脂肪酸结合蛋白CU58106Biot19抗微生物肽族7.2CCheongp,c,6970，70A，参考变应原异构体的列表3024-319898Derf3胰蛋白酶Derf7Derf10原肌球蛋白Derf11副肌球蛋白Derf14mag3,载脂蛋白Derf1598k甲壳酶Derf16凝溶胶蛋白/绒毛蛋白53Derf17Ca结合EF蛋白53Derf'18w60k甲壳酶60家尘螨(Dermatophagoidesmicroceras)屋尘螨(housedustmite)Derm1半胱氨酸蛋白酶25屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus欧洲屋尘螨(Europeanhousedustmite)Derp1抗原Pl，半胱氨酸蛋白酶25梅氏嗜霉螨(Euroglyphusmaynei)螨(mite)Eurm2Eurm14载脂蛋白家食舌甘螨(Glycyphagusdomesticus)储螨(storagemite)GIyd2DerP214CDerP3胰蛋白酶28/30CDerP4淀粉酶60PDerP514CDerP6糜蛋白酶25PDerP722/28CDerP8谷胱甘肽转移酶CDerP9溶胶原丝氨酸蛋白PDerP10原肌球蛋白36CDerP14载脂蛋白样蛋白C177C63SW:Q26456,717272AD17686AF17877271A71A.Weberp.c.6862，参考变应原异构体的列表62A-C,参考变应原异构体的列表636465666767A67BY14906Eptonp.c.参考变应原异构体的列表AF14982772B,参考变应原异构体的列表害嗜鳞螨(Xepidoglyphusdestructor)储螨(storagemite)Lepd2C印d1Lepd5L印d7L印d10原肌球蛋白Lepd13腐食酪螨(Tyrophagusputrescentiae)储螨(storagemite)Tyrp215CCCCC73，74，74A，参考变应原异构体的列表75,AJ25027875，AJ27105875A,AJ25009675，AJ25027975B,Y12690E.动物Bosdomesticus牛(domesticcattle)Bosd2Ag3，lipocalin(也参考食品)2076，参考变应原异构体的列表Bosd3Ca-bindingS100hom.11CL39834Bosd4a乳清蛋白14.2CM18780Bosd5e-乳清蛋白18.3CX14712Bosd6血清白蛋白67CM73993Bosd7免疫球蛋白16077Bosd8酪蛋白20-3077犬禾斗(farailiaris)家犬(Canisdomesticus)Canf125C78，79狗(dog)Canf227C78'79Canf3白蛋白CS72946Canf418PA59491马(Equuscaballus)马(domestichorse)Equc1lipocalin25CU70823Equc2Equc3Equc4Equc5AgXFelisdortiesticus猫cat(唾液(saliva))lipocalinAg3-白蛋白18.5P79A，79B67C79C，X7404517P79D17PGoubranBotrosp.c.Feld1cat—138C15Feld2白蛋白C79E，X84842Feld3抑半胱氨酸11C79F,AF238996蛋白酶蛋白Feld4lipocalin22CAY497902Feld5w免疫球蛋白A■Adedoyinp.c.Feld6w免疫球蛋白MAdedoyinpc.Feld7w免疫球蛋白G150Adedoyinp.c.800-1000豚鼠(Caviaporcellus)脉鼠(guineapig)Cavp1lipocalinhomologue20PCavp2小鼠(Musmusculus)小鼠(mouse)(尿液)Musm1MUP家鼠(Rattusnorvegius)大鼠(rat)(尿液)Rstn1171917PCCSW:P83507，80SW:P8350881，81A82，83F.真菌(霉菌)1.子囊菌门(Ascomycota)1.1子囊菌纲(Dothideales)链格孢(Alternariaalternata)Alta1Alta2Alta3热休克蛋白.28CU8263325C83A，U6244270CU87807,U87808Alt34prot.disulfideisomerase57CAlta6酸性核糖体蛋白P211CAlt7YCP4蛋白22cAlt10醛脱氢酶53cAlt11烯醇化酶45cAlt12酸性核糖体蛋白PI11c草本枝孢(Cladosporiumherbarum)X84217X78222,U87806X78225X78227,P42041U82437X84216Clah11383B，83CClah22383B，83CClah3核糖体脱氢酶53CX78228Clah4酸性核糖体蛋白P211CX78223Clah5YCP4蛋白22CX78224Clah6烯醇化酶46CX78226Clah12酸性核糖体蛋白PI11CX851801.2曲霉菌目(Eurotiales)黄曲霉(Aspergillusflavus)A印fl13碱性丝氨酸蛋白酶3484烟曲霉(Aspergillusfumigatus)Aspf118CM83781,S39330Aspf237CU56938Aspf3过氧化物酶体蛋白19CU20722Aspf430CAJ001732Aspf5金属蛋白酶40CZ30424Aspf6Mn过氧化物超氧26.5CU53561化剂物歧化酶Aspf712CAJ223315Aspf8核糖体蛋白P211CAJ224333Aspf934CAJ223327Aspf10天冬氨酸蛋白酶34CX85092Aspf11肽酰-脯氨酰异构酶2484AAspf12热休克蛋白P9090C85Aspf13碱性丝氨酸蛋白酶3484BAspf1516CAJ002026Aspf1643Cg3643813Aspf17CAJ224865Aspf18空泡丝氨酸蛋白酶34Aspf22w烯醇化酶46CAspf23L3核糖体蛋白44C黑曲霉(Aspergillusniger)Aspn14e-木糖苷酶105CAspn18空泡丝氨酸蛋白酶34CAspn253-植酸酶B66-100Aspn85C米曲霉(Aspergillusoryzae)Aspo13碱性丝氨酸蛋白酶34CAspo21TAKA-淀粉酶A53C短密青霉(菌)(Penicilliumbrevicompactum)Penb13碱性丝氨酸蛋白酶33产黄青霉菌(Penicilliumchrysogenum)(formerlyP.notatum)Pench13碱性丝氨酸蛋白酶34CPench18空泡丝氨酸蛋白酶32Pench20N-acetylglucosaininiclas桔青霉(Penicilliumcitrinum)草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)Peno18空泡丝氨酸蛋白酶341.3肉座菌目(Hypocreales)大刀镰刀菌(Fusariumculmorum)Fusc1核糖体蛋白P211*Fusc2硫氧还蛋白样蛋白13*84CAF28464585A，AF464911AF10894484B85B，P34754Z84377X17561D00434，M3321886A87876887APenc3过氧化物酶体膜蛋白1886BPenc13碱性丝氨酸蛋白酶3386APenc19热休克蛋白.P7070CU64207Penc22w烯醇化酶46CAF254643Penc24延伸因子IPCAY363911cc87BAY077706AY0777071.4散囊菌目(0nygenales)TrichophytonrubsumTrir2Trir4丝氨酸蛋白酶CC8888断发毛癣菌(Trichophytontonsurans)Trit130PTrit4丝氨酸蛋白酶83C88A881.5酵母菌目(Saccharomycetales)白色念珠菌(Candidaalbicans)Csnda140Canda3过氧化物酶体蛋白29念珠菌(Candidaboidinii)Candb220CC89AY136739CJ04984，J049852.担子(真)菌亚门(Basidiomycotina)2.1层菌纲(Hymenomycetes)裸盖燕属(Psilocybecubensis)Psic1Psic2亲环蛋白毛头鬼伞(Coprinuscomatus)shaggyc邻Copc1亮氨酸拉链蛋白Copc2Copc3Copc5Copc71611C89AAJ132235AJ242791AJ242792AJ242793AJ2427942.2锈菌(Urediniomycetes)胶红酵母RhodotorulamucilaginosaRhom1烯醇化酶47Rhom2空泡丝氨酸蛋白酶31CC89BAY5472852.3Ustilaqinomycetes糠秕马拉色(氏)霉菌(Malasseziafurfur)Malaf2MF1，过氧化物酶体21CMalaf3MF2，过氧化物酶体20CMalaf4线粒体苹果酸脱氢酶35C鳞斑霉属(Malasseziasy即odialis)AB011804,90膜蛋白AB011805,90膜蛋白AF084828，90AMalasiCMalas518*CMalas617*CMalas7CMalas819*CMalas937*CMalas10热休克蛋白.7086CMalas11Mn过氧化物超23C氧化剂物歧化酶X96486,91AJ011955AJ011956AJ011957,91AAJ011958,91AAJ011959,91AAJ428052AJ5484213.半知菌亚门(Deuteromycotina)3.l结节菌目(Tuberculariales)附球(真)菌属(Epicoccumpurpurascens)(formerlyE.nigrum)Epip1丝氨酸蛋白酶30SW:P83340,9IBG.昆虫(Insects)Aedesaegyptii蚊子(mosquito)Aeda1三磷酸腺苷双磷酸酶Aeda2蜜蜂(Apismellifera)蜜蜂(honeybee)磷脂酶A2透明质酸酶蜂毒肽Apim1Apim2Apim4Apim6Apim7Bombuspennsylvanicus熊蜂(bumblebee)Bomp1磷脂酶Bomp4蛋白酶德国小蠊(Blattellagermanica)德国蟑螂(Germancockroach)6837164437-8CUB丝氨酸蛋白酶3916CCCCPCPPL12389M33157929394Kettnerp.c.AY1275799595Blag1Bd90kBlag2天冬氨酸蛋白酶36Blag4calycin21Blag5谷胱甘肽转移酶22Blag6肌钙蛋白C27美洲大蠊(Periplanetaaraericana)美国蟑螂(Americancockroach)Pera1Cr-PIIPera3Cr-PI72-78Pera7原肌球蛋白37摇蚊(Chironomuskiiensis)蠓(midge)CCCCCCCChik10原肌球蛋白32.5*C地方摇蚊(Chironomusthummithummi)蠓(midge)Chit1--9血红蛋白16CChit1.01组分III16CChit1.02组分IV16CChit2.0101组分I16CChit2.0102组分IA16CChit3组分n-e16CChit4组分IIIA16CChit5组分VI16CChit6.01组分VIIA16CChit6.02组分ix16CChit7组分VI1B16CChit8组分VII116CChit9组分x16C猫界头蚤(Ctenocephalidesfelisfelis)猫蚤(catflea)Ctef1Ctef2MIb27Ctef325松异带蛾(Thaumetopoeapityocampa)pineprocessionarymothCC9697989898AY14854AJ01218499P02229P02230P02221P02221P02222P02231P02224P02226P02223P02225P02227P02228AF231352Thap1衣鱼化epismasaccharina)衣鱼(silverfish)L印s1原肌球蛋白36C大黄蜂(Dolichovespulamaculata)whitefacehornetDolm1磷脂酶Al35CDolm2透明质酸酶44CDolm5抗原523C长黄古月蜂(Dolichovespulaarenaria)yellowhornetDola5抗原523CPolistesannularies黄蜂waspPola1磷脂酶Al35PPola2透明质酸酶44PPola5抗原523C胡蜂(Polistesdominulus)MediterraneanpaperwaspPold1Pold4丝氨酸蛋白酶32-34CPold5Polistesexclamans黄蜂(wasp)Pole1磷脂酶Al34PPole5抗原523C纸巢蜂(Polistesfuscatus)黄蜂(wasp)Polf5抗原523C柞蚕马蜂(Polistesgallicus)黄蜂(wasp)Polg5抗原524C长足胡蜂(Polistesraetricus)黄蜂(wasp)Polm5抗原523C10615PPIR:A59396，99AAJ309202100101102,103104105105104HoffmanpHoffmanp.P81656107104106P83377黄边胡蜂(Vespacrabo)EuropeanhornetVespc1磷脂酶Vespc5抗原5日环古月蜂(Vespamandarina)giantasianhornetVespm1Vespm5VespulaflavopilosayellowjacketVesf5古月蜂(Vespulagermanica)yellowjacketVesg5客页斑脸黄古月蜂(Vespulamaculifrons)yellowjacketVesm1磷脂酶AlVesm2透明质酸酶Vesm5抗原5VespulapennsylvanicayellowjacketVesp5抗原5VespulasquamosayellowjacketVess5抗原5Vespulavidua黄蜂(wasp)Vesvi5抗原523黄古月蜂(Vespulavulgaris)yellowjacketVesv1磷脂酶AlVesv2透明质酸酶Vesv5抗原5MyrmeciapilosulaAustralianjumperantMyrp1Myrp23423PC抗原5抗原533.544232323C354423CPC106CPC107106Hoffmanp.cP8165723C10623C106108109104106106CC105A105A104X70256S81785热带火蚁(Solenopsisgeminata)tropicalfireantSolg2Solg4红火蚁(Solenopsisinvicta)fireantSoli2Soli3Soli4黑火蚁(Solenopsissaevissima)BrazilianfireantSols2TriatomaprotractaCaliforniakissingbugTriap1ProcalinHoffmanP.CHoffmanP.C13C110,11124C11013C110Hoffmanp.c.20CAF179004，111A.H.食品鳕鱼(Gaduscallarias)codGadc1变应原M大西洋鲑(Salmosalar)大西洋鲑(Atlanticsalmon)Sals1微清蛋白BosdomesticusdomesticcattleBosd4(milk)Bosd5也参考动物(seeBosd6Bosd7Bosd8家鸡(Gallusdomesticus)鸡(chicken)Gald1卵类粘蛋白a乳清蛋白e-乳球蛋白alsoanimals)血清白蛋白免疫球蛋白caseins12C12C14.2C18.3C67C16020-3028C112，113X97824M18780X14712M739937777114,115Gald2卵类白蛋白44CGald3Ag22,伴清蛋白78CGald4溶菌酶14CGald5血清白蛋白69C刀额新对虫下(Metapenaeusensis)蝦(shrimp)Mete1原肌凝蛋白褐对虫下(Penaeusaztecus)蝦(shrimp)Pena1原肌凝蛋白Penaeusindicus蝦(shrimp)Peni1原肌凝蛋白斑节对虫下(Penaeusmonodon)黑虎虫下(blacktigershrimp)Penm1原肌凝蛋白38CPenm2精氨酸激酶40C太平洋褶柔鱼(Todarodespacificus)squidTodp1原肌凝蛋白38P散大蜗牛(Helixaspersa)browngardensnailHelas1原肌凝蛋白36C南非鲍螺(Haliotismidae)鲍鱼(abalone)Halm149食用蛙(Ranaesculenta)ediblefrogRane1微清蛋白a11.9*CRane2微清蛋白P11.7*C芥菜(Brassicajuncea)orientalmustardBraj12S白蛋白14C欧洲油菜(Brassicanapus)油菜(rapeseed)Bran12S白蛋白15P芜菁(Brassicarapa)芜菁(turnip)Brar2honuprohevein25114,115114,115114，115X60688CU0800836P11634C116AAF479772,117117AY14855,117B117CAJ315959AJ414730118118A,P80208P81729BMAI-Ia淀粉酶0-淀粉酶gamma-3大麦醇溶蛋白大麦(Hordeumvulgare)大麦(barley)Horv15Horv16Horv17.......Horv21gamma-3大麦醇溶蛋白34SW:P80198黑麦(Secalecereale)黑麦ryesecc20黑麦醇溶蛋白小麦(Triticumaestivum)小麦(wheat)Tria18凝集素Tria19omega-5麦醇溶蛋白65P玉米(Zeamays)玉米(maise,corn)Zeam14脂质转移蛋白.9P早稻(0ryzasativa)稻(rice)0rys1C旱芥(Apiumgraveolens)开菜(celery)Apig1hom:Betv116*CApig4抑制蛋白Apig555/58P古月萝卜(Daucuscarota)胡萝卜(carrot)Dauc1hom:Betv1Dauc4抑制蛋白欧榛(Corylusavellana)棒子(hazelnut)Cora1.04hom:Betv1Cora2Cora8抑制蛋白脂质转移蛋白17149CCCC15C119C119A，位基因列表PIR:A59156P19656119B，031771Z48967AF129423P8194316CU7D，参考变应原异构体的列表AF456482参考变应原异构体的列表AF327622AF329829苹果(Malusdomestica)苹果(邻ple)Maid1Maid2hom:竹芋蛋白Maid3脂质转移蛋白hom:Betv1C9Cc,1814C内切壳多糖酶9Maid4抑制蛋白梨(Pyruscommunis)梨(pear)Pyrc1hom:Betv1Pyrc4抑制蛋白Pyrc5hom:异黄酮还原酶33.5鱼萼梨(Perseaamericana)酪梨(avocado)Persa1杏(Pnmusarmeniaca)杏(邻ricot)Pruar1hom:Betv1Pruar3脂质转移蛋白甜樱桃(Prunusavium)甜樱桃(sweetcherry)Pruav1hom:Betv1Pruav2hom:竹芋蛋白Pruav3脂质转移蛋白Pruav4抑制蛋白Prunusdoinestics欧李(Europeanplum)Prud3脂质转移蛋白桃(Prunuspersica)桃(peach)Prup3脂质转移蛋白10prup4抑制蛋白14戸弊(Asparagusofficinalis)戸等(Asparagus)Aspaol脂质转移蛋白9P番红花(Crocussativus)14.4*10159CPCCCCC参考变应原异构体的列表A243427Pastorellop.C参考变应原异构体的列表CAF05730CAF129424AF07147732CZ78202U93165U66076U32440AF221501AF129425119CPP81402C参考变应原异构体的列表119D番红花(saffroncrocus)莴苣(Xactucasativa)莴苣(lettuce)Lacs1脂质转移蛋白葡萄(Vitisvinifera)葡萄(gr即e)Vitv1脂质转移蛋白香蕉(Musaxparadisiaca)香蕉(banana)Musxp1凤梨(Ananascomosus)凤梨(pineapple)Anac1抑制蛋白Anac2菠萝蛋白酶拧檬(Citrusliraon)拧檬(lemon)Cit13脂质转移蛋白橙(Citrussinensis)舌甘橙(sweetorange)Cits1germin样蛋白Cits2抑制蛋白Cits3脂质转移蛋白蒸枝(Xitchichinensis)蕩枝(litchi)Litc1抑制蛋白白芥(Sinapisalba)黑芥子(yellowmustard)Sina12S白蛋白大豆(Glycinemax)大豆(soybean)Glym1Glym2Glym3抑制蛋白Glym4(SAM22)PR-10绿豆(Vignaradiata)绿豆(mungbean)Cros121VarastehA_Rp.c.9Viethsp.c.9PP80274抑制蛋白15CAF37794815CAF37794922.8*C119E-G,D140599PTorrejonp.c.23PTorrejonp.c.14PTorrejonp.c.9PTorrejonp.c.15CAY04901314C120HPS7P120A8PA5710614C参考变应原异构体的列表prot.17CX60043,120BVigr1PR-10蛋白15CAY792956花生(Arachishypogaea)花生(peanut)Arah1豌豆球蛋白63.5CL34402Amh2羽扇豆球蛋白17CL77197Arah3大豆球蛋白60CAF093541Arah4大豆球蛋白37CAF086821Arah5抑制蛋白15CAF059616Arah6hom:羽扇豆球蛋白15CAF092846Arah7hom:羽扇豆球蛋白15CAF091737Arah8PR-10蛋白17CAY328088扁豆(Xensculinaxis)扁豆(lentil)Lenc1豌豆球蛋白47Lenc2种子生物素酰化的蛋白66Pisumsavitura豌豆(pea)Piss1豌豆球蛋白44Piss2convicilin63中华猕猴桃(Actinidiachinensis)奇异果(kiwi)Actc1半胱氨酸蛋白酶30Actc2竹芋蛋白样蛋白24辣椒(Capsicumanriuum)bellpepperCapalwosmotin样蛋白23C即a2抑制蛋白14番莉(Lycopersiconesculentum)番茄(tomato)Lyce1抑制蛋白14Lyce2b-呋喃果糖苷酶50Lyce3脂质转移蛋白.6CPPCCCC参考变应原异构体的列表120C参考变应原异构体的列表审理中P00785SW:P81370，121AJ297410AJ417552AJ417553参考变应原异构体的列表U81996马铃薯(Solariumtuberosum)马铃薯(potato)Solat1pateitin43Solat2组织蛋白酶D抑制剂21Solat3半胱氨酸蛋白酶抑制剂21Solat4天冬氨酸蛋白酶抑制剂16+4巴西坚果(Bertholletiaexcelsa)巴西坚果(Brazilnut)Bere12S白蛋白9Bere211S球蛋白种子贮存蛋白29东部黑核桃(Juglansnigra)黑核桃(blackwalnut)Jugn12S白蛋白19*Jugn2豌豆球蛋白-样蛋白56*胡桃(Juglansregia)EnglishwalnutJugr12S白蛋白Jugr2豌豆球蛋白44Jugr3脂质转移蛋白9腰果(Anacardiumoccidentale)腰果(Cashew)Anao1豌豆球蛋白样蛋白Anao2豆球蛋白样蛋白Anao32S白蛋白蓖麻(Ricinuscommunis)蓖麻(CastorbearORicc12S白蛋白芝麻(Sesamumindicum)芝麻(sesame)Sesi12S白蛋白Sesi22S白蛋白sesi37S豌豆球蛋白样球蛋白Sesi4油质蛋白Sesi5油质蛋白505514PPPPCCCCCCPCCCCC451715P15476P16348P20347P30941P04403,M17146AY221641AY102930AY102931U66866AF066055Pastorello参考变应原异构体的列表AF453947AY081853P0簡9121A，AF240005AF091841CAF240006CAAG23840CAAD42942甜瓜(Cucumismelo)甜瓜(muskmelon)Cuem1丝氨酸蛋白酶66CD32206Cuem2抑制蛋白14CAY271295Cuem3pathogenesis-relp.PR-I16*PP83834I.其它的海兽胃线虫(Anisakissimplex)线虫(nematode)AniS1AniS2副肌球蛋白AniS3原肌凝蛋白A(niS4软蜱禾斗(Argasreflexus)鸽壁虱(pigeontick)Argr1猪蛔虫wormAscs1番木瓜(Caricap邵ayeO番木瓜(p邻aya)Carp3wpapainDendron印hthyanipponicasoftcoralDenn1巴西橡胶树(Heveabrasiliensis)rubber(latex)24974191710PCCP23.4*C53121B，A59069AF173004121C,Y19221P83885AJ697694122122A,M15203122BHevb1延长因子58P123，124Hevb21,3-葡聚糖酶34/36C125Hevb324P126，127Hevb4微螺旋复合物100-115P128的组分Hevb516CU42640Hevb6.01hevein前体20CM36986,p02877Hevb6.02hevein5CM36986,p02877Hevb6.03c-末端片断14CM36986,p02877Hevb7.01hom:patatin42CfromB-serumHevb7.02hom:patatinfromC—serum44CCCCHevb8抑制蛋白14Hevb9烯醇化酶51Hevb10Mn过氧化物超氧26化剂物歧化酶Hevb11class1甲壳酶Hevb12脂质转移蛋白9.3CHevb13酯酶42P人类人自体变应原Hornsi73*CHorns210.3*CHorns320.1*CHorns436*CHorns542,6*C非洲白木(Triplochxtonscleroxylon)欧斐切木(obeche)Trips11型甲壳酶38.5PU80598AJ223038参考变应原异构体的列表AJ132580参考变应原异构体的列表参考变应原异构体的列表AY057860P83269Y14314X80909X89985Y17711P02538Kespohlp.c.参考文献1Marsh，D.G.，andL.R.Freidhoff.1992.ALBE,anallergendatabase.IUIS，Baltimore,MD，Edition1.0.2Marsh，D.G.etal.1986.Allergennomenclature.BullWHO64:767-770.3King,T.P.etal.1964.Biochemistry3:458—468.4Lowenstein，H.1980.Allergy35:188-191.5Aukrust，L.l進Allergy35:206-207.6Demerec，M.etal.1966.Genetics54:61-75.7Bodmer，J.G.etal.1991.Immunogenetics33:301-309.8Griffith,I.J.etal.1991.Int.Arch.AllergyAppl.Immunol.96:296-304.9Roebber，M.etal.1985.J.Immunol.134:3062—3069.10Metzler,W.J.etal.1992.Biochemistry31:5117-5127.11Metzler，W.J.etal.1992.Biochemistry31:8697-8705.12Goodfriend,L.etal.1979.Fed.Proc.38:1415.13Ekramoddoullah，A.K.M.etal.1982.Mol.Immunol.19:1527-1534.14Ansari，A.A.etal.1987.J".AllergyClin.Immunol.80:229-235.15Morgenstern，J.P.etal.1991.Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:9690-9694.16Griffith,I.J.etal.1992.Gene113:263-268.17Weber，A.etal,1986.Biochem.Physiol.83B:321-324.18Weber，A.etal.1987.Allergy42:464—470.19Stanworth，D.R.etal.1990.BulletinWHO68:109—111.20Rafnar，T.etal.1991.J.Biol.Chem.266:1229-1236.21Rogers，B.L.etal.1991.J.Immunol.147:2547-2552.22Klapper，D.G.etal.1980.Biochemistry19:5729-5734.23Ghosh，B.etal.1993.J.Immunol.150:5391—5399.24Roebber,M.etal.1983.J.Immunol.131:706—711.25Ubahn，B.，andD.G.Klapper.1993.丄AllergyClin.Immunol.91:338.26Roebber,M.，andD.G.Marsh.1991.丄AllergyClin.Immunol.87:324.27GoodfriendL.etal.MolImmunol22:899-906，1985.28HimlyM.etal.FASEBJ"17:106-108，2003.28ANilsen，B.M.etal.1991.丄Biol.Chem.266:2660-2668.29WopfnerN.etal.BiolChem383:1779—1789，2002.29AJimenezA.etal.1994.IntArchAllergyImmunol105:297-307.29BBarderasR.etal.IntArchAllergyImmunol127:47-54，2002.29CCarnesJ.etal.Allergy56，Supplement68:274，2001.29DGiulianiA.etal.Allergy42:434-440，1987.30Smith,P.M.etal,1996.J.AllergyClin.Immunol.98:331-343.31Suphioglu,C.etal.1997.FEBSLett.402:167-172.31aAsturiasJ".A.etal.1997.ClinExpAllergy27:1307-1313.32Mecheri，S.etal.1985.AllergyAppl.Immunol.78:283-289.33Roberts，A.M.etal.1993.Allergy48:615—623.33aGuerin-Marchand，C.etal.1996.MoLImmunol.33:797-806,34Klysner,S.etal.1992.Clin.Exp.Allergy22:491—497.35Perez，M.etal,1990.J".Biol.Chem.265:16210-16215.36Griffith,I.J.etal.1991.FEBSLetters279:210-215.37A歸ri，A.A.etal.1989.工Biol.Chem.264:11181-11185.37aSidoli，A.etal.1993.J.Biol.Chem.268:21819-21825.38Ansari，A.A.etal.1989.Biochemistry28:8665-8670.39Singh，M.B.etal.1991.Proc.Natl.Acad.Sci.88:1384-1388.39avanReeR.etal.1995.JAllergyClinImmunol95:970-978.40Suphioglu,C.andSingh，M.B.1995.Clin.Exp.Allergy25:853—865.41Dolecek,C.etal.1993.FEBSLett.335:299—304.41AFischerS.etal.1996.JAllergyClinImmunol98:189-198.42Matthiesen,F.，andH.Lowenstein.1991.Clin.Exp.Allergy21:297-307.43Petersen,A.etal.1995.Int.Arch.AllergyImmunol.108:55-59.43AMarknellDeWittA.etal.ClinExpAllergy32:1329-1340，2002.44Valenta，R.etal.1994.Biochem.Biophys.Res.Commun.199:106-118.46Esch，R.E.，andD.G.Klapper.1989.Mol.Immunol.26:557-561.47Olsen，E.etal.1991.J.Immunol.147:205-211.48Avjioglu，A.etal.1993.J.AllergyClin.Immunol.91:340.52KosT.etal.1993.BiochemBiophysResCommun196:1086-92.53Diaz-PeralesA.etal.2000.ClinExpAllergy'30:1403-1410.54Ipsen，H.，and0.C.Hansen.1991.Mol.Immunol.28:1279-1288.55Taniai，M.etal.1988.FEBSLett.239:329-332.56Griffith,I.丄etal.1993.J.AllergyClin.Immunol.91:339.57Sakaguchi，M.etal.Allergy45:309—312，1990.57AYokoyamaM.etal.BiochemBiophysResCommun275:195-202，2000.57BMidoro-HoriutiT.etal.JImmunol164:2188-2192，2000.57CTinghinoR.etal.J\AllergyClin.Immunol.101:772-777，1998.58GrossGNetal.ScandJImmunol8:437-441，1978.58AObispoTMetal.ClinExpAllergy23:311-316，1993.58BMidoro-HoriutiT.etal.ClinExpAllergy31:771-778，2001.59LombarderoM.etal.Clin.Exp.Allergy24:765-770，1994.60Villalba，M.etal.Eur.丄Biochem.216:863-869，1993.60AAsturiasJAetal.JAllergyClinImmunol100:365-372，1997.60BBataneroE.etal.EurJBiochem241:772-778，1996.60CBataneroE.etal.FEBSLett.410:293-296，1997.60DTejeraMLetal.J"AllergyClinImmunol104:797-802，1999.60ELedesmaA.etal.FEBSLett466:192-196，2000.60FBarralP.etal.JImmunol172:3644-3651，2004.61YiFCetal.ClinExpAllergy32:1203-1210，2002.61ARamosJDetal.IntArchAllergyImmunol126:286-293，2001.62Chua，K.Y.etal.J.Exp.Med.167:175-182,1988.62AChua，K.Y.etaLInt.Arch.AllergyAppl.Immunol.91:118-123，1990.62BSmithAMetal.IntArchAllergyImmunol124:61-63，2001.62CSmithAMetal.J"AllergyClinImmunol107:977-984，2001.63SmithWA，ThomasWR.IntArchAllergyImmunol109:133-140，1996.64Lake,F.R.etal.J.AllergyClin.Immunol.87:1035-1042，1991.65Tovey，E.R.etal.J.Exp.Med.170:1457—1462，1989.66Yasueda,H.，T.Shida，T.Ando，S.Sugiyama，andH.Yamakawa.1991.AllergenicandproteolyticpropertiesoffourthallergensfromDermatophagoidesmites.In:〃DustMiteAllergensandAsthma.Reportofthe2ndinternationalworkshop"A.Todt,Ed.，UCBInstituteofAllergy,Brussels，Belgium,pp.63-64.67Shen，H.-D.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offmanDR.丄AllergyClin.Immunol.91:187，1993.109JacobsonRSetal.丄AllergyClin.Immunol.89:292，1992.110HoffmanDR.J.AllergyClin.Immunol91:71—78，1993.111SchmidtM.etal.FEBSLetters319:138-140，1993.111APaddockCDetal.JImmunol167:2694-2699，2001.112ElsayedS，BennichH.ScandJImmunol3:683-686，1974.113ElsayedS.etal.Immunochemistry9:647-661，1972.114Hoffman,D.R.1983.丄AllergyClin.Immunol.71:481-486.115Langeland，T.1983.Allergy38:493-500.116DaulCB，SlatteryM，MorganJ"E，LehrerSB.1993.CommonCrustaceaallergens:identificationofBcellepitopeswiththeshrimpspecificmonoclonalantibodies.In:"MolecularBiologyandImmunologyofAllergens"(D.KraftandA.Sehon，eds.).CRCPress,BocaRaton,pp.291-293.116AShantiKNetal.J.Immunol.151:5354-5363，1993.117YuCJetal.JImmunol170:445-453，2003.117AMiyazawaMetal.J.AllergyClin.Immunol.98:948-953，1996.117BAsturiasJAetal.IntArchAllergyImmunol128:90-96，2002.117CLopataetal.J.AllergyClin.Immunol.100:642-648，1997.117DHoffmami-SommergruberLetClin.Exp.Allergy29:840-847，1999.118MonsalveRIetal.Biochem.J.293:625-6321993.118A.MonsalveRIetal.1997.ClinExpAllergy27:833-841.119Mena，M.etal.PlantMolec.Biol.20:451-458，1992.119APalosuoK.etal.J".AllergyClin.Immunol.108:634-638，2001.119BXuH.etal.Gene164:255—259，1995.119CPastorelloEAetal.J.AllergyClin.Immunol.94:699-707，1994.119DDiaz-PeralesA.etal.JAllergyClinImmunol110:790-796，2002.119EGalleguillosF,RodriguezJC.ClinAllergy8:21—24，1978.119FBaurX.ClinAllergy9:451-457，1979.119GGailho.ferG.etal.ClinAllergy18:445-450，1988.120Menendez-Arias,L.etal.1988.Eur.J.Biochem.177:159-166.120AGonzalezR.etal.Lancet346:48—49，1995.120BKleine-TebbeJ.etal.JAllergyClinImmunol110:797-804，2002.120CSanchez-MongeR.etal.J.AllergyClin.Immunol.106:955-961，2000.121Gavrovic-JankulovicM.etal.J"AllergyClinImmunol110:805-810，2002.121APastorelloEAetal.J.Chromatogr.BBiomed.Sci.Appl.756:85-93，2001.121BMoneoLetal.J.AllergyClin.Immunol.106:177-182，2000.121CAsturiasJAetal.2000.Allergy55:898-890.122Christie,J.F.etal.1990.Immunology69:596-602.122ABaurX.etal.ClinAllergy12:9-17，1982.122B0nisukaR.etal.IntArchAllergyImmunol125:135-143，2001.123CzupponABetal.JAllergyClinImmunol92:690-697,1993.124AttanayakaDPSTGetal.1991.PlantMolBiol16:1079-1081.125ChyeML，CheungKY.1995.PlantMolBiol26:397-402.126AleniusH.etal.1993.IntArchAllergyImmunol102:61—66.127YeangHY，CheongKF，SunderasanE，HamzahS，ChewNP，HamidS,HamiltonRG，CardosaMJ.1996.The14.6kD(REF，Hevb1)and24kD(Hevb3)rubberparticleproteinsarerecognisedbyIgEfromSpinaBifidapatientswithLatexallergy.JAllergClinImmunolinpress.128SunderasanE.etal.1995.JnatRubbRes10:82-99.编码这些变应原的核酸序列的知识使得它们可重组产生。因此，特别地，这些变应原优选地使用在免疫治疗中和在本发明的方法中。本发明的另一方面是涉及评价个体的变应原敏感性和/或变应原免疫治疗临床效果的方法，其包括步骤一采集在对IgE-变应原复合物产生应答时能释放介质的细胞，一使所述细胞与所述个体的血清和/或血浆接触，所述血清和血浆为用至少一个纯的变应原或其衍生物刺激(spike)，一确定从所述样本中释放出的介质量，并评价个体在治疗前的变应原敏感性和/或通过比较所述量来评价免疫治疗的临床效果。能够释放介质的细胞通常包含结合其的IgE分子。这些细胞能够从接受本发明的方法的个体所获得的样本中分离或者从其它个体样本中分离。当然，在根据本发明的方法中，也可能使用能结合IgE的细胞系。根据本发明的方法特别适用于确定个体的变应原敏感性，因为其能够确定出变应原特异性的IgE和IgG分子在所述个体的血浆和血清中的比率。因为只有IgE-变应原复合物而非游离的IgE能够诱导介质从介质释放细胞比如白细胞中的释放，介质释放水平与存在于样本中的IgE复合物的量相关。依次地，在所述样本中的IgE复合物的量与变应原特异性IgE、变应原和除IgE之外的变应原特异性抗体的量相关，该变应原特异性抗体如IgG、IgA或IgM，IgM与IgE竞争游离的变应原并随后抑制IgE变应原复合物的形成。这意味着低水平的变应原特异性IgE或者高水平的变应原特异性IgG导致低水平的IgE复合物形成，因此引起介质释放减少。变应原在所述血清和/或血浆中的浓度优选地为1ng/ml至100Pg/ml之间，更优选地为1pg/ml至10l^g/ml之间。本发明的另一个方面涉及一种试剂盒，该试剂盒用于评价个体的变应原敏感性和/或用至少一种变应原进行变应原免疫治疗的临床效果，其包括一至少一种变应原，用于诱导能够释放介质的细胞对变应原产生应答时释放介质，一用于检测介质的方法，和一任选地至少一个介质标准。在本文中提供的所述试剂盒包括至少一种变应原，其可用于诱导来自包含在样品中的介质释放细胞的介质释放。然后，直接地或优选地在除去样品的固体部分后检测在反应混合物的上层清液中释放的介质。任选地，用于检测结合所述变应原的IgE分子的方法也包括在本发明的试剂盒中。当IgE结合介质释放细胞和变应原结合时，IgE能够结合不同的变应原，并介导的从所述细胞释放介质。然而，IgE对变应原的特异性通常在血液中不能检测到，且仅当某个人对变应原变得敏感时才会产生。为了精确的确定样本中的介质量(用于提供标准曲线)，介质标准可以是试剂盒的任选部分。优选地，所述细胞是肥大细胞和/或嗜碱细胞和/或嗜酸细胞。根据本发明的另一个优选实施方案，变应原选自大部分的白桦花粉变应原，尤其是Betv1和Betv4、大部分的梯牧草花粉变应原，尤其是phlp1、Phlp2、Phip5、Phip6和Phlp7、大部分的房尘螨变应原，尤其是De:rp1和Derp2、大部分的猫变应原，Feld1、大部分的蜜蜂变应原、大部分的黄蜂变应原、抑制蛋白，特别是Phlp12和储螨变应原，尤其是L印d2及在表1中列出的变应原。用于检测介质的方法优选抗体。如上所述，优选通过免疫治疗检测介质。因此，所述试剂盒可以提供至少一种能够结合特异性介质的抗体。优选地可使用酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)或者横向流动装置(1atemlflowdevices)。本发明的另一个方面涉及用于评价变应原敏感性或用至少一种变应原进行变应原免疫治疗的临床效果的试剂盒，所述变应原包含至少两种下述成分一至少一种变应原，用于诱导对变应原产生应答时能够释放介质的细胞的介质释放，一用于检测介质的方法，一至少一个介质标准，和一对IgE-变应原复合物产生应答时能够释放介质的细胞。本发明通过下述的图形和实施例进行做进一步说明，但不受其限制。图l显示了来自真皮内终点滴定法(X轴给出第一阳性反应的变应原浓度)和rBetv卜特异性血清IgE(Y轴kU/LCAP系统)的相关性结果。图2显示了来自嗜碱细胞组胺释放(X轴给出30%组胺释放的变应原浓度)和rBetvl-特异性血清IgE(Y轴kU/LCAP系统)的相关性结果。图3显示了真皮内终点滴定法(X轴给出第一阳性反应的变应原浓度)和嗜碱细胞组胺释放(Y轴给出30%组胺释放的变应原浓度)结果之间的关系。图4显示了通过CAP确定的Betvl-特异性IgE(X轴kU/L)和通过标记的a-链确定的rBetv卜特异性IgE(Y轴每分钟计数(c.p.m.);l:5血清稀释)之间的相关系。图5显示了嗜碱细胞组胺释放的结果(X轴最大组胺释放(％))和皮肤单刺试验(Y轴通过2ug/ml重组Betvl皮肤单刺试验诱发的风团反应(mm2)的结果之间的相关性。具体实施例方式实施例实施例1:通过变应原交联结合工gE抗体的效应细胞(肥大细胞和嗜碱粒细胞)对I型变态反应的速发型症状的诱导作用是至关重要的事件(Ka-wakamiT，等，NatRevImmunol(2002)2:773-86)。正如Prausnitz禾口Ki3stner(PrausnitzC，等，CentralbeFBact1AbtOrig(1921)86:160-8)的经典试验所描述的，该事件依赖三个因素，即，变应原-特异性IgE抗体、效应细胞和变应原。因为IgE抗体的特征描述和能够精确地测定变应原-特异性IgE抗体的量的诊断测验的发展，某些试验已经研究了变应原-特异性血清IgE抗体水平和过敏患者对变应原的生物敏感性之间的关系(SteniusB等，ClinAllergy(1971)1:37-55;BryantDH等，ClinAllergy(1975)5:145-57;PauliG等，ClinAllergy(1977)7:337-46;BousquetJ等ClinAllergy(1987)17:529-36;WittemanAM等JAllergyClinImmunol(1996)97:16-25:NiederbergerV，等JInvestDermatol(2001)117:848-51;NormanPS等JAllergyClinImmunol(1973)52:210-24;LichtensteinLM等JAllergyClinImmunol(1971)47:103(A37))。现已确定变应原-特异性血清IgE的是出现速发型反应的必要条件，但是变应原-特异性工gE的量是否与给定的变应原的速发型敏感症有关还有很多争论。为描述这一问题，过去进行的几乎所有研究都是使用变应原提取物，如变应原和非变应原分子的混合物(SteniusB等，ClinAllergy(1971)1:37-55;BousquetJ等，ClinAllergy(1987)17:529-36;NormanPS等JAllergyClinImmunol(1973)52:210-24;LichtensteinLM等，JAllergyClinImmunol(1971)47:103(A37))。这也是为什么这些研究不能在分子水平分析变应原-特异性IgE水平和生物学活性之间相关性的原因。最近的研究报道了这些参数之间具有相当大的差异，所述研究采用纯化的天然的和重组的变应原来重新研究皮肤敏感性和变应原-特异性IgE水平之间的相关性(WittemanAM等，JAllergyClinImmunol(1996)97:16-25;NiederbergerV等JInvestDermatol(2001)117:848-51)。在该实施例当中，纯化重组体Betv1，大部分的的白桦花粉变应原作被用作进一步研究变应原-特异性IgE水平、效应细胞应答反应以及在活体内敏感性之间关系的代表性工具。在18个白桦花粉过敏的人群中，其根据熟知的临床标准且排除花粉的季节选择，定量对指定量的结构折叠的重组体Betv1应答的皮肤敏感性和嗜碱性粒细胞脱粒。比较生物学的试验结果和血清学试验结果。为了评价Betvl-特异性IgE抗体水平，采用两种不同的测定一种是检测任意Betv1-特异性IgE，另一种是检测能够与效应细胞结合的Betvl-特异性IgE。材料和方法研究人群对患者的检查是在白桦花粉季节开始前的一月和四月之间进行。该项研究包括18名患者，8名女性和10名男性，年龄均在28到58岁之间(平均年龄45.6岁)，他们均具有白桦花粉过敏史，并且白桦花粉提取物单刺皮肤试验呈阳性。所有患者都至少在三年前首次被诊断患有中度到严重的鼻炎。5名患者在白桦花粉季节患有轻度哮喘，12名患者对蔷薇科水果(苹果、桃、杏和扁桃)、茄科蔬菜(土豆，西红柿)和伞形科蔬菜(芹菜和胡萝卜)具有口腔过敏症状。进行用呼吸器官过敏原的皮肤单刺试验(stallergenes，France)来证实致敏特性，所述过敏原包括房尘螨、真菌变应原混合物、狗和猫的皮屑、蟑螂、草、树(包括白桦、橄榄和岑树)以及杂草花粉。患者的特征为下表l中列出的。表l.被研究人群的血清学、嗜碱细胞组胺释放和皮肤实验的临床数据结果<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>研究设计为了分析变应原-特异性IgE水平、皮肤敏感性以及嗜碱性粒细胞脱粒之间可能的关系，对患者抽血，并在同一天对他们的皮肤进行测试。进行该分析，要严格避开白桦花粉季节以避免季节性变应原接触带来的影响。在进行研究前至少一周，患者不得服用抗过敏药或者消炎药。没有一名患者在过去5年以上的时间内接受过变应原特异性免疫治疗。在征得同意后，采集血液用于嗜碱细胞组胺释放和用于血清样本。然后，立即采用终点滴定法进行真皮内皮肤试验(GrammerLC等，JAllergyClinImmunol(1985)76:123-7)。测定并量化变应原-特异性抗体变应原-特异性IgGl到IgG4亚型水平与变应原-特异性IgM和IgA水平都通过酶联免疫吸附试验来测定，其采用如上所述的同种型特异性单克隆抗体(VrtalaS等，JAllergyClinImmunol(1996)97:781-7)。结果显示双份测定的平均值，且显示相应于结合抗体的量的OD值。嗜碱细胞组胺释放测试根据Tanisaki等人描述的方法，在一个剂量响应模式中进行用rBetv1和抗-IgE作为阳性对照的全血中激发免疫反应(TanisakiY等，IntArchAllergyApplImmunol(1984)73:141-5)。将10毫升静脉血注入一个含有1毫升肝素的塑料注射器当中。将250Pi不同浓度的rBetv1(从10-4到10mg/ml)或者抗-IgE(从10—4到10—3，especific，Dako，Glostrup,Denmark)力口入至lj含有500ml在氨基丁三醇(10mmo1/1Tris、136mmo1/1NaCl、2.7mmol/1KC1、0.23mmol/1MgCl2、1.8mmol/LCaCl2、5.5mmol/1葡萄糖；pH7.3)中1:4稀释的全血的试管中。将混合溶液在37。C下培养30分钟。反应停止，通过在375xg下冷离心(4°C)5分钟分离细胞。如前所述，取200Pi无细胞上清液用采用酰化组胺单克隆抗体(Iramunotech，Marseille,France)放射免疫测定法进行组胺定量化(MorelAM，等JAllergyClinImmunol(1988)82:646-54)。通过反复融冻使细胞溶解后，测定全部的组胺。所有的试验都按双份进行。用于描述嗜碱细胞敏感性的参数是诱导组胺释放总量的30%的最低变应原浓度。真皮内试验阈值真皮内皮肤试验是通过在胳膊侧部注射0.03ml的10倍稀释的rBetv1来进行的。从1000mg/ml的溶液连续稀释配制溶液，并且试验的首次稀释液为10mg/ml。该试验注射后15分钟读数。记录风团区域和红斑。当诱导的风团区域超过了由注射引起的风团区域时，认为测试呈阳性，并且诱导产生阳性测试结果的最低变应原浓度用于与其它参数的比较(GrammerLC，等，JAllergyClinImmunol(1985)76:123-7)。数据的统计分析通过使用VisualStatsProfessional软件(version2003)的Spearmans非参量检验测定不同参数之间的相关性。结果rBetvl-特异性免疫球蛋白E水平与皮肤对rBetv1的敏感性之间几乎没有关系。为了比较rBetv卜特异性IgE水平与皮肤敏感性，通过CAP进行测定rBetvl-特异性IgE水平，其与诱导真皮内试验风团反应呈阳性的rBetv1阈浓度相关。图1显示了变应原-特异性IgE水平与皮肤敏感性之间没有相关性&=-0.007，P二0.977)。观察到在患者体内变应原-特异性IgE和皮肤敏感性之间存在较大偏差。例如，患者8显示出较高的Betv1-特异性IgE水平(79.9kU/1)，但是仅在10mg/ml的rBetv1(表1)显示出阳性ID反应。另一方面，患者10具有低的rBetv1-特异性IgE(4.5kU/1),但是对Betv1(1ng/mlrBetv1的阳性ID测试反应)的皮肤敏感性比患者8大1000倍。7名具有相似的rBetv1-特异性IgE水平(17.126.6kU/l)的患者(2，5，7，9，11，12和17)显示出极宽的皮肤rBetvl敏感性范围(从3到IO5mg/ml)(表l)。rBetv1-特异性IgE水平与rBetvl-相关的嗜碱细胞敏感性之间几乎没有相关性图2(IgEvs.30%组胺释放)显示出rBetvl-特异性IgE水平与Betvl-诱导的嗜碱细胞敏感性之间也缺乏相关性(图2:r=-0.113，P=0.656)。诱发30%的组胺释放的rBetv1浓度从l(T到1mg/ml之间变化。对于给定的rBetv1-特异性IgE水平(RASTclass3:4.5117.lkU/1)，诱发30%组胺释放的rBetv1的浓度在1000倍的范围内变化(1l(T3mg/ml)。rBetv1-诱发的嗜碱细胞组胺释放与皮肤敏感性之间的相关性图3显示，真皮内试验和嗜碱细胞组胺释放试验结果之间具有比血清学和生物学试验结果之间更好的相关性。引发30%组胺释放的rBetv1浓度和真皮内风团反应之间具有显著倾向(r=0.614;P=0.007)。那些在rBetv1-特异性IgE水平和生物学试验结果之间显示出极差相关性的患者(例如患者8和10)，他们的真皮内试验结果与嗜碱细胞组胺释放进行比较时显示出较好的相关性(表l)。进行其它实验结果是为了解释下述给出的血清学试验和生物学试验之间的偏差。rBetvl-特异性免疫球蛋白G亚类、免疫球蛋白A和免疫球蛋白M的测定结果。己经描述了Betv1-过敏症患者的血清含有Betvl-特异性IgG抗体，它可以干扰IgE结合Betv1或者识别Betv1分子而不是IgE的抗原表位，因此对于IgE结合Betv1没有影响(ViscoV等人JImmunol(1996)157:956-62;Den印ouxS，等FEBSLett(2000)465:39-46)。因此，确定了rBetv1-特异性IgG的水平(IgGlIgG4;表1)。所述患者显示出不同的rBetv1-特异性IgGlIgG4亚类的应答，在IgGl和IgG4亚类中具有最显著的响应。血清中并未检测到显著水平的rBetv1-特异性IgA和IgM抗体，排除了这些抗体类别可能影响IgE对Betv1的识别。评价Betvl-特异性免疫球蛋白E占所有IgE的百分数如果Betvl-特异性IgE仅仅占所有IgE的百分数低，那么组胺释放的不足和皮肤反应性可以通过以下事实来解释嗜碱细胞和肥大细胞主要被抗其它变应原的IgE占据。因此，确定了总的IgE值，并且可以计算Betvl-特异性IgE比例。这一实施例中的患者具有相对较低的总IgE值(〈168kU/L)，而且没有在低的Betv1-特异性IgE百分比和弱的生物学应答之间相关性。例如，在显示出高的敏感性的患者11中，Betv1-特异性IgE仅仅占总的IgE的20X。另一方面，虽然患者13为低敏感性的，但是总体62.6%的IgE直接抗Betv1(表1)。讨论变应原-特异性IgE抗体水平、效应细胞的敏感性以及临床敏感性之间是否存在相关性一直是存在争论的问题。某些研究显示变应原-特异性血清IgE抗体与变应原-引发的速发型反应之间存在明显的相关性，甚至当采用多种变应原和非变应原成分的复合混合物时，而这使得难于比较皮肤试验和RAST(SteniusB等人，ClinAllergy(1971)1:37-55;BousquetJ等人，ClinAllergy(1987)17:529-36;NormanPS等人，JAllergyClinImmunol(1973)52:210-24;LichtensteinLM等人.JAllergyClinImmunol(1971)47:103(A37))。最近，其它采用纯的变应原的研究(WittemanAM等，JAllergyClinImmunol(1996)97:16-25)和重组变应原(NiederbergerV等JInvestDermatol(2001)117:848-51)已经证实了在抗体水平和生物学敏感性之间存在相当大的偏差。已经完成了使用确定纯度和结构上折叠的变应原的临床研究(例如，大部分的白桦花粉变应原，Betv1)，其用于研究在分子水平特异性IgE与嗜碱性粒细胞脱粒和皮肤敏感性之间的相关性。发现在这三个方法学和白桦敏感性的临床相关之间存在良好一致；然而，记录了变应原-特异性IgE水平、嗜碱细胞敏感性和活体内的敏感性(例如，皮肤敏感性通过终点滴定法确定)之间的巨大差异。在某些病人当中，观察到了很低的特异性IgE水平，但是同时观察到在嗜碱性粒细胞脱粒和皮肤测试中较高的敏感性，反之亦然。已有文献的回顾显示出缺乏对皮肤测试、嗜碱细胞组胺释放和特异性IgE水平之间的比较研究。少数可以利用的研究显示出不同的结果，并且采用的是粗的变应原提取物。例如，Norman等(NormanPS等，JAllergyClinImmunol(1973)52:210-24)发现三项测试在诊断豕草花粉症方面有良好的一致性。Lich-tenstein等人(Lichtenstein等，JAllergyClinImmunol(1971)47:103(A37))发现皮肤测试和组胺释放之间在数量上具有显著的相关性。然而，在这一实例中并没有进行特异性IgE的测定。致敏性白细胞和肥大细胞对抗原的响应可取决于大量因素。低的敏感性和弱组胺释放的一种可能是仅有很小比例的总血清IgE为变应原-特异性IgE。因此，测定总的IgE水平，并计算变应原-特异性IgE的百分比。然而，发现低百分比的变应原-特异性IgE反应和弱的生物学活性之间具有相关性。特异性-IgE占总IgE的低比例可能是引起对给定变应原的弱的生物反应的原因，这在多种敏感性受试者中可能是非常重要的(NormanPS等人，JAllergyClinImmunol(1973)52:210-24;ConroyMC等人JImmunol(1977)118:1317-21;MacGlashanDWJr等人，JImmunol(1986)136:2231-9)。存在其它因素，其可引起变应原-特异性IgE水平和生物学反应之间的偏差，但是它们即使在采用纯化的变应原的系统中都无法确定。它们包括嗜碱细胞和肥大细胞敏感性的个体差异，因为IgE-受体细胞表面密度有差异，所述表面密度为通过血清IgE水平调节的一个参数(ConroyMC等JImmunol(1977)118:1317-21;MalveauxFJ等，JClinInvest(1978)62:176-81;DemboM等，JImmunol(1978)121:345-53;MacGla-shanDWJr等JAllergyClinImmunol(1999)104:492-8)。不同细胞敏感性已经通过在相似总量和变应原-特异性IgE血清浓度情况下的剂量响应曲线的可变移动(测定50%或30%的敏感性)得到证实(ConroyMC等JImmunol(1977)118:1317-21;MacGlashanDWJr.，JAllergyClinImmunol(1993)91:605-15)。此外，显示在嗜碱粒细胞上具有相等数量IgE分子的人可以释放他们组胺含量的O—100%的(ConroyMC等JImmunol(1977)118:1317-21)。在表皮肥大细胞中也被观察到相同的情况(PetersenLJ等，JAllergyClinImmunol(1996)97:672-9;BordignonV，Petal.，InvestAllergolClinImmunol(2000)10:78-82)。而且，已经显示出发生的早期信号事件包括酪氨酸激酶(sykkinase)和IP3产物，其与特异性IgE水平或者嗜碱细胞敏感性无关(MacGlashanDWJr.,JAllergyClinImmunol(1993)91:605—15;MiuraK等，JImmunol(2001)167:7027;MacGlashanDWJr.，JImmunol(2003)170:4914-25)。最新证据表明肥大细胞也可以受到Toll-样受体影响(MarshallJS等，IntArchAllergyImmunol(2003)132:87-97)。然而，试验使用的rBetvl制剂并不包括内毒素。最后，有可能地是IgE抗体的存在影响了血清学和生物学的测试结果，所述抗体具有诱导不同过敏活性的抗原表位的不同亲和力或结合特异性.结论是，该研究从分子水平上证实变应原-特异性血清IgE水平与细胞和体内试验测定的生物学敏感性之间没有必然的相关性。然而，发现在皮肤试验和嗜碱细胞组胺释放测试之间具有稳定的相关性。实施例2:为了在治疗前确定病人的敏感性以使得给予正确剂量，使用全血的嗜碱细胞组胺释放试验。具有高敏感性的患者将比低敏感性患者注射更小的剂量。治疗前，采用纯化的变应原建立剂量应答曲线。同时，用抗-IgE刺激细胞以确定全部细胞的敏感性，其可以影响对于变应原的敏感性。通常在治疗4一8周后，在抗变应原的IgG抗体变得可检测后，将可以控制治疗的成功性。因为，阻断IgG抗体可能是引起敏感性降低的原因，同时确定对所给变应原的IgG水平是很有用的。此外，采用纯化的变应原和抗-IgE再次测定剂量响应。比较给予最大细胞活化的剂量(即最大组胺释放或者CD203c增量调节)或者测定给出一定程度活化的剂量，并且用处理前获得的试验结果进行比较。材料和方法如在实施例1中描述的。实施例3:如描述的(Stah1-Skov等1977.JExpImmunol27:432-439)，当用洗过的粒细胞制剂进行嗜碱细胞组胺释放试验时，没有发现组胺释放数据和皮肤敏感性之间的相关性。组胺释放可使用来自过敏患者的嗜碱细胞进行。用葡聚糖沉积将它们浓縮，分离，洗涤，再悬浮在组胺释放缓冲液中，并暴露于在37"C下的96-孔滴定板(TPP，Trasadingen,Switzerland)中不同浓度的重组体BetvI(IO-5，10_4，，10,10—2，10—、1lVml)或抗IgEMbE-124-2-8(1ug/ml)中30分钟。培养后，离心分离细胞。回收不含细胞的上清液，通过采用市售放射免疫测定法分析组胺含量(Immunotech，Marseille,France)。将组胺释放表达为在细胞溶解产物中测定的总组胺的百分数(Valent等，1989，ProcNatlAcadSciUSA86:5542-5546)。如描述的(Pauli等，1996，JAllergyClinImmunol97:1100-1109)，采用连续稀释的重组Betvl进行皮肤单刺试验。从暴露于重组Betv1(服。/。-max)的嗜碱细胞释放的最大量组胺与皮肤单剌试验反应(mm2)没有相关性(SPT2^/ml)(r=0.224，P=0.342)(图5)。权利要求1、用于评价个体的变应原敏感性和/或变应原免疫治疗的临床效果的方法，其包括步骤-采集至少两个来自接受或打算接受用至少一种纯的变应原或其衍生物进行免疫治疗的个体的样本，所述样本选自血液或者其部分、结缔组织、鼻的、支气管的、皮肤或者消化道的活组织检查材料，其中所述样本包含对所述变应原产生应答时能够释放介质的细胞，-使所述样本与所述变应原或其衍生物接触，和-确定从所述样本中释放出的介质的量，并且通过比较所述量来评价个体在治疗前的变应原敏感性和/或评价免疫治疗的临床效果。2、用于评价个体的变应原敏感性和/或变应原免疫治疗的临床效果的方法，其包括步骤一采集在对IgE-变应原复合物产生应答时能释放介质的细胞，一使所述细胞与所述个体的血清和/或血浆接触，所述个体用至少一个纯的变应原或其衍生物刺激，和一确定从所述样本中释放出的介质的量，并通过比较所述量来评价个体在治疗前的变应原敏感性和/或评价免疫治疗的临床效果。3、根据权利要求1或2的方法，其特征在于所述介质选自组胺、纤维蛋白溶酶、前列腺素、白三烯，特别是半胱氨酰白三烯、嗜酸细胞阳离子蛋白、细胞因子，如白介素类(IL)，尤其是IL-2R、CD63、CD203c及其组合。4、根据权利要求1至3中任一项的方法，其特征在于所述细胞为肥大细胞和/或嗜碱性细胞和/或嗜酸性细胞。5、根据权利要求1至4中任一项的方法，其特征在于所述样本中进一步包含免疫球蛋白(Ig)，特别是免疫球蛋白G(IgG)。6、根据权利要求1至5中任一项的方法，其特征在于所述样本在所述个体接受免疫治疗前后采集。7、根据权利要求1至6中任一项的方法，其特征在于所述样本在所述个体接受免疫治疗后采集。8、根据权利要求1至5中任一项的方法，其特征在于至少一个样本是在所述个体接受免疫治疗之后最多1小时、12小时、24小时、10天、4周、6个月以及36个月采集。9、根据权利要求1至8中任一项的方法，其特征在于所述变应原是重组产生的。10、根据权利要求9的方法，其特征在于所述变应原包含至少一个缺失，至少一个替换或者至少一个插入。11、根据权利要求9的方法，其特征在于所述变应原为通过基因工程重组所述变应原片段来修饰的。12、根据权利要求1至11中任一项的方法，其特征在于使所述样本与不同浓度的所述变应原接触。13、根据权利要求12的方法，其特征在于所述变应原浓度选自lng/ml至100Pg/ml的范围，优选lpg/ml至醇g/ml的范围。14、根据权利要求1至13中任一项的方法，其特征在于进一步确定所述细胞的介质的总量。15、根据权利要求14的方法，其特征在于细胞的致敏度为通过测定诱导占所述细胞的介质总量的10%，优选30%的释放的所述变应原的浓度来定义。16、根据权利要求15的方法，其特征在于个体的变应原敏感性和/或变应原免疫治疗的临床效果通过观察在所述免疫治疗过程中的细胞致敏度来评价。17、根据权利要求1至16中任一项的方法，其特征在于所述样本中的该介质通过免疫法和/或色谱法确定的。18、根据权利要求17的方法，其特征在于所述方法选自放射免疫测定法(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)、逆转录酶多聚酶链式反应、免疫荧光流式细胞计量术及其组合。19、根据权利要求1至18中任一项的方法，其特征在于所述变应原选自大部分的白桦花粉变应原，特别是Betv1和Betv4，大部分的梯牧草花粉变应原，特别是Phlpl、Phip2、Phip5、Phip6和Phlp7，大部分的房尘螨变应原，特别是Derp1和Derp2，大部分的猫变应原Feldl，大部分的蜜蜂变应原，大部分的黄蜂变应原，抑制蛋白，尤其是Phlp12和储螨变应原，尤其是L印d2。20、用于评价个体变应原敏感性或者对至少一种变应原进行变应原免疫治疗的临床效果的试剂盒，其包括一至少一种变应原，用于诱导对变应原产生应答时能够释放介质的细胞释放介质，一用于检测介质的方法，禾口一任选地至少一个介质标准。21、用于评价个体的变应原敏感性或者对至少一种变应原进行变应原免疫治疗的临床效果的试剂盒，包含至少两种下述成分一至少一种变应原，用于诱导对变应原产生应答时能够释放介质的细胞释放介质，一用于检测介质的方法，一至少一种介质标准，和一对IgE-变应原复合物产生应答时能够释放介质的细胞。22、根据权利要求21的试剂盒，其特征在于所述细胞是肥大细胞和/或嗜碱性细胞和/或嗜酸性细胞。23、根据权利要求20—22中任一项的试剂盒，其特征在于所述变应原选自大部分的白桦花粉变应原，特别是Betv1和Betv4，大部分的梯牧草花粉变应原，特别是Phlpl、Phip2、Phip5、Phip6和Phlp7，大部分的房尘螨变应原，特别是Derp1和Derp2，大部分的猫变应原Feldl，大部分的蜜蜂变应原。大部分的黄蜂变应原，抑制蛋白，尤其是Phlp12和储螨变应原，尤其是L印d2。24、根据权利要求20—23中任一项的试剂盒，其特征在于所述用于检测介质的方法选自由抗体组成的组。全文摘要本发明公开了一种用于评价个体的变应原敏感性和/或变应原免疫治疗临床效果的方法，其包括以下步骤采集至少两个来自接受或打算接受用至少一种纯的变应原或其衍生物免疫治疗个体的样本，所述样本选自血液或者其成分、结缔组织、鼻的、支气管的、皮肤或者消化道的活组织检查物质，其中所述样本包含对所述变应原产生应答时能够释放介质的细胞，将所述样本与所述变应原或其衍生物接触，并且确定从所述样本中释放出的介质的量，并且通过比较所述量来评价个体在治疗前的变应原敏感性和/或评价免疫治疗的临床效果。文档编号G01N33/68GK101115996SQ200680004343公开日2008年1月30日申请日期2006年2月9日优先权日2005年2月9日发明者A·普罗希特,A·韦罗特,C·梅茨-法夫尔,G·保利,N·莫特-卢克施,P·瓦郎,R·瓦伦塔,S·拉弗申请人:碧欧美公司