专利名称：一种骨髓涂片缩醛磷脂染色试剂组及使用方法
技术领域：
本发明属于医疗领域，特别是涉及一种骨髓涂片縮醛磷脂染色试剂 组及使用方法。
技术背景由于各种血液病的病理变化不同、造血功能障碍及患者个体之间的 差异，使不同血液病的同种细胞，相同疾病不同个体之间的同种细胞， 其形态易发生变化，甚至难以鉴别。骨髓涂片组织化学染色是观察造血 细胞形态变化的基本方法，是血液病诊断和治疗的主要依据，骨髓涂片 染色方法的可靠性是血液病正确诊断和有效治疗的关键技术。组织化学 染色是针对骨髓不同细胞系统，以及各系统细胞的特殊结构和成分进行 的特异性染色，以明确细胞的种类和系统，以达到明确诊断的目的。而 目前的骨髓涂片组织化学染色的特异性不强，往往同一种细胞在不同疾 病中的染色结果不同，或不同细胞在同一种疾病中的染色结果相同，使 组织化学染色的特异性明显下降，造成血液病的诊断依据不充分。因此， 研究一种特异性强、方法简便、便于观察、能明确细胞种类的组织化学 染色方法是今后的发展趋势。 发明内容鉴于以上缺陷，本发明的目的在于提供一种骨髓涂片缩醛磷脂染色 试剂组及使用方法，该种染色试剂组特异性强、方法简便、便于观察。为了达到以上目的，本发明提供的该种骨髓涂片縮醛磷脂染色试剂组，其采用HgCl2为固定物，采用Schiff试剂为染液，包括以下试剂-A液HgCl2溶液，其制备方法为取HgCLl. 8-2. 2克，加水100ml;B液Schiff试剂，其制备方法为取碱性品红0.9-1. 1克，溶于200ml沸水中，当冷却至58-62-C时，进行过滤，加20mllN盐酸，再加 入亚硫酸氢钠1. 8-2. 2克，加塞避光静置8-12小时，再加入300mg活性 碳，混匀，过滤，滤液应为无色透明，4-8。C保存，溶液变红则失效；C液亚硫酸盐水溶液，其制备方法为取10%亚硫酸氢钠5. 5-6. 5ml， 1N盐酸4.5-5. 5ml，蒸馏水87_91ml均匀混合，临用时现配；D液Mayer苏木素溶液，其制备方法为取苏木素0. 9-1. 1克，蒸 馏水98-102ml，碘化钠0. 18-0. 22克，钾明矶48-50克均匀混合。本发明针对骨髓细胞学检査过程中，原始巨核细胞、幼稚巨核细胞 与原始粒细胞、原始淋巴细胞不易区分；病理性小巨核细胞的淋巴样小 巨核细胞、单圆核小巨核细胞、多圆核小巨核细胞、大单圆核小巨核细 胞与淋巴细胞的鉴别比较困难等问题，禾l」用縮醛磷脂在HgCl2的作用下很 快分解，产生的醛与Schiff试剂发生反应使无色品红重现颜色，细胞浆 呈红色的原理，提出本发明的技术方案。而本发明提供的该种骨髓涂片縮醛磷脂染色试剂组的使用方法是(D每例患者取骨髓涂片2张， 一张经HgCl2固定为观察片，另一张不 作HgCl2固定为对照片，然后同步染色；(2) 新鲜涂片经HgCl2溶液固定，蒸馏水充分冲洗；(3) Schiff试剂染色，亚硫酸盐水溶液充分冲洗；(4) Mayer苏木素液复染，流水冲洗，干后油镜观察；(5) 染色结果判断细胞浆呈红色为阳性，细胞浆未着色为阴性，对 照片细胞浆应为无色，否则为假胞浆反应。本发明的优点是1、 染色方法简便易行，整个染色过程只有4步，所需时间只有40 分钟，便于在各级医院实验室中应用推广；2、 染色结果便于观察，阳性结果细胞浆呈红色，阴性结果细胞浆无色；3、 特异性强，骨髓巨核细胞系统的原始巨核细胞、幼稚巨核细胞、 病理性小巨核细胞和血小板均呈阳性反应，是鉴别急性白血病M^中的巨 核细胞(特别是小巨核细胞)与其它白血病细胞的有效方法。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案进一步说明，但不作对本 发明的限定-实施例1首先按照以下配方及方法制备骨髓涂片縮醛磷脂染色试剂组A液HgCl2溶液，其制备方法为取HgCl22克，加水100ml;B液Schiff试剂，其制备方法为取碱性品红l克，溶于200ml 沸水中，当冷却至6(TC时，进行过滤，加20mllN盐酸，再加入亚硫酸 氢钠2克，加塞避光静置10小时，再加入300mg活性碳，混匀，过滤， 滤液应为无色透明，6'C保存，溶液变红则失效；C液亚硫酸水溶液，其制备方法为取l(m亚硫酸氢钠5.5ml， 1N 盐酸4.5ml，蒸馏水87ml均匀混合，临用时现配；D液Mayer苏木素溶液，其制备方法为取苏木素1克，蒸馏水 100ml，碘化钠0.2克，钾明矾50克均匀混合。临床实验(1) 每例患者取骨髓涂片2张， 一张经HgCl2固定为观察片，另一张不 作HgCl2固定为对照片，然后同步染色；(2) 新鲜涂片经HgCl2溶液固定IO分钟，蒸馏水充分洗三次；(3) Schiff试剂染10分钟，亚硫酸盐水溶液洗三次，每次2分钟， 流水冲洗10分钟；(4) Mayer苏木素液复染2分钟，流水冲洗，干后油镜观察；(5) 染色结果判断细胞浆呈红色为阳性，细胞浆未着色为阴性，对 照片细胞浆应为无色，否则为假胞浆反应。实施例2首先按照以下配方及方法制备骨髓涂片縮醛磷脂染色试剂组A液:HgCl2溶液，其制备方法为取HgCl2l.8克，加水100ml;B液Schiff试剂，其制备方法为取碱性品红0.9克，溶于200ml 沸水中，当冷却至58r时，进行过滤，加20mllN盐酸，再加入亚硫酸 氢钠1.8克，加塞避光静置8小时，再加入300mg活性碳，混匀，过滤， 滤液应为无色透明，4"C保存，溶液变红则失效；C液亚硫酸水溶液，其制备方法为取l(F。亚硫酸氢钠6ml， 1N盐 酸5ml，蒸馏水90ml均匀混合，临用时现配；D液Mayer苏木素溶液，其制备方法为取苏木素0.9克，蒸馏水 98ml，碘化钠O. 18克，钾明矾48克均匀混合。临床实验-(1) 每例患者取骨髓涂片2张， 一张经HgCl2固定为观察片，另一张不 作HgCl2固定为对照片，然后同步染色；(2) 新鲜涂片经HgClz固定10分钟，蒸馏水充分洗三次；(3) Schiff试剂染10分钟，亚硫酸盐水溶液洗三次，每次2分钟， 流水冲洗IO分钟；(4) Mayer苏木素液复染2分钟，流水冲洗，干后油镜观察；(5) 染色结果判断细胞浆呈红色为阳性，细胞浆未着色为阴性，对 照片细胞浆应为无色，否则为假胞浆反应。实施例3首先按照以下配方及方法制备骨髓涂片縮醛磷脂染色试剂组-A液HgCl2溶液，其制备方法为取HgCl22.2克，加水100ml;B液Schiff试剂，其制备方法为取碱性品红l.l克，溶于200ml 沸水中，当冷却至62'C时，进行过滤，加20mllN盐酸，再加入亚硫酸 氢钠2. 2克，加塞避光静置12小时，再加入300mg活性碳，混匀，过滤， 滤液应为无色透明，8'C保存，溶液变红则失效；C液亚硫酸水溶液，其制备方法为取109&亚硫酸氢钠6.5ml， 1N 盐酸5.5ml,蒸馏水91ml均匀混合，临用时现配；D液Mayer苏木素溶液，其制备方法为取苏木素1. 1克，蒸馏水 102ml，碘化钠0.22克，钾明矾50克均匀混合。临床实验(1) 每例患者取骨髓涂片2张， 一张经HgCl2固定为观察片，另一张不 作HgCl2固定为对照片，然后同步染色；(2) 新鲜涂片经HgCl2溶液固定10分钟，蒸馏水充分洗三次；(3) Schiff试剂染10分钟，亚硫酸盐水溶液洗三次，每次2分钟， 流水冲洗IO分钟；(4) Mayer苏木素液复染2分钟，流水冲洗，干后油镜观察；(5) 染色结果判断细胞浆呈红色为阳性，细胞浆未着色为阴性，对 照片细胞浆应为无色，否则为假胞浆反应。
权利要求
1. 一种骨髓涂片缩醛磷脂染色试剂组，其特征在于，包括以下试剂A液HgCl2溶液，其制备方法为取HgCl21.8-2.2克，加水100ml；B液Schiff试剂，其制备方法为取碱性品红0.9-1.1克，溶于200ml沸水中，当冷却至58-62℃时，进行过滤，加20ml 1N盐酸，再加入亚硫酸氢钠1.8-2.2克，加塞避光静置8-12小时，再加入300mg活性碳，混匀，过滤，滤液应为无色透明，4-8℃保存，溶液变红则失效；C液亚硫酸盐水溶液，其制备方法为取10％亚硫酸氢钠5.5-6.5ml，1N盐酸4.5-5.5ml，蒸馏水87-91ml均匀混合，临用时现配；D液Mayer苏木素溶液，其制备方法为取苏木素0.9-1.1克，蒸馏水98-102ml，碘化钠0.18-0.22克，钾明矾48-50克均匀混合。
2、 一种如权利要求1所述的骨髓涂片縮醛磷脂染色试剂组的使用方法，其 特征在于，包括以下步骤(l)骨髓涂片经HgCl2固定，蒸馏水冲洗；(3) Schiff试剂染色，亚硫酸盐水溶液冲洗；(4) Mayer苏木素液复染，流水冲洗；(5) 染色结果判断细胞浆呈红色为阳性，细胞浆未着色为阴性。
全文摘要
本发明属于医疗领域，提供了一种骨髓涂片缩醛磷脂染色试剂组及其使用方法，其试剂组采用HgCl<sub>2</sub>为固定物，采用Schiff试剂为染液，包括以下试剂HgCl<sub>2</sub>溶液、Schiff试剂、亚硫酸盐水溶液及Mayer苏木素溶液，而其使用方法为(1)骨髓涂片经HgCl<sub>2</sub>固定，蒸馏水冲洗；(3)Schiff试剂染色，亚硫酸盐水溶液冲洗；(4)Mayer苏木素液复染，流水冲洗；(5)染色结果判断细胞浆呈红色为阳性，细胞浆未着色为阴性。本发明染色方法简便易行，染色结果便于观察，具有极高的特异性，是鉴别急性白血病M<sub>7</sub>中的巨核细胞与其它白血病细胞的有效方法。
文档编号G01N33/48GK101251533SQ20081008959
公开日2008年8月27日 申请日期2008年4月9日 优先权日2008年4月9日
发明者洪 范 申请人:范 洪;石海香