专利名称：一种鲐鱼耳石横截面切片的制作及其年龄鉴定方法
技术领域：
本发明涉及一种鲐鱼耳石横截面切片的制作及其年龄鉴定方法，具体涉及 一种通过灼烧法来制作的鲐鱼耳石横截面切片及其年龄鉴定的方法，属水产学 领域。
背景技术：
鲐鱼是我国近海重要的经济鱼类之一，对鲐鱼生长参数的合理估算是进行 鲐鱼资源科学评估的基础，并且还是对鲐鱼年龄的准确鉴定的一项极为重要的 基础性工作。
鱼类自孵化初始，耳石就已经形成，之后半透明的冬轮和不透明夏轮每年 都在耳石上沉积，共同组成了年轮。根据耳石上的轮纹数就可以确定鱼类的年 龄。因此，如何准确地对鲐鱼耳石上的轮纹加以判读，确定其年轮数是鲐鱼年 龄鉴定的关键技术问题。
鳞片、脊椎骨、耳石都曾被用来鉴定鲐鱼的年龄。鲐鱼鳞片小而薄，不易 采集和保存，且冬轮和假轮极难区分，对年龄鉴定带来极大困难。虽然鲐鱼第
I-V脊椎骨上的年轮比较明显，但其立体的锥形形状使得年轮在显微镜下也难
以观察，而且脊椎骨的采集必须切割鱼体，因此是比较麻烦。
对耳石表面进行观察是定鲐鱼年龄最常用的方法，但鲐鱼耳石为乳白色、 且半透明，冬轮和夏轮不易区分，且耳石表面分布有众多的轮纹，使得日轮、 年轮和夏轮难以区分，对年龄鉴定造成极大困难，容易导致错误地判读鲐鱼的 年龄。当耳石表面存在结晶体时，结晶体覆盖轮纹，无法对其进行年龄鉴定。 因此，本方法通过对耳石进行灼烧，加强了冬轮和夏轮的颜色对比，并通过判读耳石横截面上的轮纹，克服了日轮和结晶体对年轮的干扰，提高了年轮到可 辨识度，从而达到提高鲐鱼年龄鉴定准确度的目的。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种鲐鱼耳石横截面切片的制作及其年 龄鉴定方法，该方法可有效提高鲐鱼年龄的可辨识度和准确度。 为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案来实现 一种鲐鱼耳石横截面切片的制作方法，包括以下步骤
1) 浸泡将鲐鱼耳石取出后，放入容器中，加入重量百分比浓度为70% 的酒精，浸泡l周；
2) 清洗耳石将鲐鱼耳石从容器中取出，放入盛有水的培养皿中，在解剖 镜下，用小毛刷将鲐鱼耳石表面残留的有机组织和杂质清洗干净；
3) 画线鲐鱼耳石清洗干净后，在解剖镜下观察，凹面朝上，找出鲐鱼耳 石的核心，然后用铅笔画一条穿过鲐鱼耳石核心的标记线，在鲐鱼耳石前区部 位画一条切割线；
4) 切除耳石在解剖镜下， 一手用镊子将鲐鱼耳石固定，另一手用解剖刀 沿切割线，将鲐鱼耳石前区部分切除；
5) 灼烧将切割后的鲐鱼耳石从培养皿中取出，放置在吸水纸上将水吸干， 然后将鲐鱼耳石放置在带有凹面的载波片上，用酒精灯灼烧至褐色或深棕色；
6) 树脂包埋按1丄5的体积比将压克力粉和固化剂配置成溶液，将溶液 倒入塑料模具，溶液覆盖模具底部即可，耳石切割面朝上并平行于模具底部， 继续加入溶液，加满为止，在避光放置24小时，固化；
7) 切割将包埋有鲐鱼耳石的模具以标记线为中心，切割成0.8-1.2mm的 薄片；
8) 打磨将鲐鱼耳石切片放置在磨床打磨盘上，分别用规格为P1200和P2000的防水砂纸打磨至0.3-0.7mm厚；
9)抛光将规格为0.3pm的抛光粉配置成70 90g/L的悬浮液备用，将防 水砂纸换成抛光绒布，用注射器吸入抛光粉悬浮液，均匀滴撒在绒布上，然后 将切片两面抛光。
所述的鲐鱼年龄鉴定方法为，将载玻片一面用深蓝色涂料完全覆盖，晾干 备用；将鲐鱼耳石切片放置于涂有深蓝色涂料的载玻片上，在CCD解剖镜下， 并滴上几滴甘油，在反射光照射下，对轮纹进行判读。
本发明中所用到的压克力粉和固化剂，化学名称为甲基丙烯酸甲酯，是金 相式样专用的进口树脂材料，适用于PCB、 FPC、半导体技术、微电子技术、 医学技术、光电技术等领域。在室温下将压克力粉和固化剂按适当比例混合， 即可静态固化，生成高分子聚合物--透明树脂。其固化迅速，固化效果理想(固 化时间6min);不会对人体造成伤害，无毒；使用安全、简便。
制作本发明的鲐鱼横截面切片及其年龄鉴定时，需要特别注意以下几点
(1) 鲐鱼耳石薄且脆，不能通过直接切割获取横截面。因此用树脂包埋， 再通过切割、打磨来获得鲐鱼耳石的横截面。横截面应通过耳石核心，以保证 横截面包含完整的年轮信息。
(2) 灼烧时间和程度控制。鲐鱼耳石不能直接用火焰灼烧，应放置在载玻 片上，用酒精灯外焰灼烧3-5秒，当鲐鱼耳石由白色变为褐色或棕红色时，立 即停止灼烧。鲐鱼耳石颜色为淡黄色时，说明灼烧时间不够，可继续灼烧至褐 色或棕红色。若鲐鱼耳石灼烧过度，颜色由褐色转变为黄灰色，鲐鱼耳石则完 全不透明。
(3) 鲐鱼耳石经灼烧后，在放射光下，其横截面中心，不透明度的白色椭 圆团块是鲐鱼耳石的核心，鲐鱼耳石核心外围透明的黄棕色条带为冬轮或夏 轮，不透明的白色条带为夏轮。夏轮经常在冬轮边缘出现，并汇入冬轮。相对 冬轮，夏轮较细，且不完整，为冬轮的分支。本发明实现了对鲐鱼耳石冬轮和夏轮的清晰可视，避免了结晶、日轮、夏 轮对年轮的干扰，增强了冬轮和夏轮的颜色对比，使冬轮和年轮更容易辨识和 判读，从而提高了鲐鱼年龄鉴定的准确性，耳石切片还可长久保存。
以下结合附图和具体实施方式
来进一步说明本发明。
图1为本发明的鲐鱼耳石外形(凹面)及标记线、切割线的结构示意图。
其中10为前区，ll为前背区，20为后区，21为后背区，30为背区，40 为腹区，50为切割线，60为核心，70为标记线。
图2为本发明的鲐鱼耳石横截面上的冬轮、夏轮及鲐鱼耳石核心的结构示 意图。
具体实施例方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解， 下面结合具体图示，进一步阐述本发明。
实施例1
鲐鱼耳石横截面切片的制作
1) 浸泡鲐鱼耳石取出后，放入有标记号码的lml容积的离心管中，加 入70%的酒精，浸泡1周，以除去鲐鱼耳石表面残留的部分有机组织；并用防 水记号笔标记。
2) 清洗耳石将鲐鱼耳石从离心管中取出，放入盛有水的培养皿中，在解 剖镜下，用小毛刷将鲐鱼耳石表面残留的有机组织和杂质清洗干净，以避免灼 烧时，有机组织产生的杂质污染耳石，影响观察。
3) 画线鲐鱼耳石清洗干净后，在解剖镜下观察，凹面朝上，找出鲐鱼耳 石的核心60，然后用铅笔画一条穿过鲐鱼耳石核心的标记线70，在鲐鱼耳石前区10部位画一条切割线50，切割线50应离开标记线70足够的距离，以避 免切割时损坏鲐鱼耳石核心60。
4) 切除耳石参照图l，在解剖镜下， 一手用镊子将鲐鱼耳石固定，另一 手用解剖刀沿切割线50，将鲐鱼耳石前区IO部分切除。
5) 灼烧将切割后的鲐鱼耳石从培养皿中取出，放置在吸水纸上将水吸干， 然后将鲐鱼耳石放置在带有凹面的载波片上，用酒精灯灼烧3-5秒，耳石颜色 由白变为褐色或深棕色时，停止加热。灼烧时应均匀加热，密切注意耳石颜色 变化。防止耳石灼烧不够或过度灼烧，从而影响冬轮和夏轮的颜色对比。灼烧 不够，颜色对比不够强烈；灼烧过度，冬轮和夏轮则完全变为不透明，将无法 鉴定年龄。
6) 树脂包埋先将塑料模具标号，号码与鲐鱼耳石标号一致。模具为一开 口、空心的长方体长22.5mm、宽9mm、高10mm、壁厚1.5mm、底厚2mm。 将按1:1.5的体积比的压克力粉和固化剂配置成溶液，将溶液倒入塑料模具中。 溶液覆盖模具底部即可，鲐鱼耳石切割面朝上并平行于模具底部，继续加入溶 液，加满为止。在避光处放置24小时，使溶液固化完全。注意配置溶液时， 应尽量避免气泡出现，气泡可能出现在鲐鱼耳石截面上，影响轮纹判读。
7) 切割将包埋有鲐鱼耳石的模具固定在切割机夹具上，以鲐鱼耳石表面 的标记线70为中心，在切割机上将其切割成lmm的薄片。
8) 打磨将鲐鱼耳石切片放置在磨床打磨盘上，以标记线为中心，用规格 P1200和P2000的防水砂纸打磨至0.5mm厚。
9) 抛光将规格为0.3 U m的抛光粉配置70 90g/L的悬浮液备用，将防水 砂纸换成抛光绒布，用注射器吸入抛光粉悬浮液，均匀滴撒在绒布上，然后将 切片两面抛光。
经过上述9个步骤，鲐鱼耳石横截面切片制作完成。
实施例2鲐鱼年龄的鉴定
将载玻片一面均匀涂上蓝色涂料，晾干配用。
将鲐鱼耳石切片放置于载玻片上，用甘油覆盖切片，在蓝色背景和反射光 照射下，用带CCD的显微镜进行年轮判读和计数并拍照，放大倍数10 100。
在反射光下，冬轮80、夏轮90交替存在。冬轮80呈半透明的黄棕色条带，夏 轮90呈不透明的白色条带。鲐鱼耳石核心60呈不透明的白色团块，周围有细 小的夏轮90。夏轮90在反射光下也呈半透明的黄棕色条带，通常伴随冬轮存 在，注意区分冬轮80和夏轮90。相对于冬轮80，夏轮90更细，而且不完整。 对冬轮记行计数，冬轮80数即为年龄。每一个鲐鱼耳石都由两人独自判读， 分别计数。如果两人计数相同，则认为年龄判读正确，接受该结果；如果两人 计数的年轮数目不同，则重新判读、计数，并对结果进行讨论。讨论后意见一 致，则接受，否则放弃。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业 的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中 描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明 还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本 发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
权利要求
1.一种鲐鱼耳石横截面切片的制作方法，其特征在于，包括以下步骤1)浸泡鲐鱼耳石取出后，放入容器中，加入重量百分比浓度为70％的酒精，浸泡1周；2)清洗耳石将鲐鱼耳石从容器中取出，放入盛有水的培养皿中，在解剖镜下，用小毛刷将鲐鱼耳石表面残留的有机组织和杂质清洗干净；3)画线鲐鱼耳石清洗干净后，在解剖镜下观察，凹面朝上，找出鲐鱼耳石的核心，然后用铅笔画一条穿过鲐鱼耳石核心的标记线，在鲐鱼耳石前区部位画一条切割线；4)切除耳石在解剖镜下，一手用镊子将鲐鱼耳石固定，另一手用解剖刀沿切割线，将鲐鱼耳石前区部分切除；5)灼烧将切割后的鲐鱼耳石从培养皿中取出，放置在吸水纸上将水吸干，然后将鲐鱼耳石放置在带有凹面的载波片上，用酒精灯灼烧至褐色或深棕色；6)树脂包埋按1∶1.5的体积比将压克力粉和固化剂配置成溶液，将溶液倒入塑料模具，溶液覆盖模具底部即可，鲐鱼耳石切割面朝上并平行于模具底部，继续加入溶液，加满为止，在避光放置24小时，固化；7)切割将包埋有鲐鱼耳石的模具以标记线为中心，切割成0.8-1.2mm的薄片；8)打磨将鲐鱼耳石切片放置在磨床打磨盘上，用P1200规格的防水砂纸打磨至0.3-0.7mm厚；9)抛光将规格为0.3μm的抛光粉配置成70～90g/L的悬浮液备用，将防水砂纸换成抛光绒布，用注射器吸入抛光粉悬浮液，均匀滴撒在绒布上，然后将切片两面抛光。
2.根据权利要求1所述的鲐鱼年龄鉴定方法，其特征在于，将载玻片一面 用深蓝色涂料完全覆盖，晾干备用；将鲐鱼耳石切片放置于涂有深蓝色涂料载玻片上，在CCD解剖镜下，滴上几滴甘油覆盖鲐鱼耳石切片，在反射光照射 下，对轮纹进行判读。
全文摘要
本发明涉及一种鲐鱼耳石横截面切片的制作及其年龄鉴定的方法，横截面切片的制作包括浸泡、清洗耳石、画线、切除耳石、灼烧、树脂包埋、切割、打磨和抛光等步骤。将鲐鱼耳石切片放置于涂有深蓝色涂料的载玻片上，在CCD解剖镜下，滴上几滴甘油覆盖鲐鱼耳石切片，在反射光照射下，对轮纹进行判读，以对鲐鱼年龄进行鉴定。本发明实现了对鲐鱼耳石冬轮和夏轮的清晰可视，避免了结晶、日轮、夏轮对年轮的干扰，增强了冬轮和夏轮的颜色对比，使冬轮和年轮更容易辨识和判读，从而提高了鲐鱼年龄鉴定的准确性，耳石切片还可长久保存。
文档编号G01N1/28GK101539495SQ20091004698
公开日2009年9月23日 申请日期2009年3月4日 优先权日2009年3月4日
发明者纲 李, 陈新军 申请人:上海海洋大学