专利名称：一种鳜鱼耳石横截面磨片的制作方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于鱼类生态学领域，具体涉及一种鳜鱼耳石横截面磨片的制作方法，还涉及一种鳜鱼耳石横截面磨片在年龄鉴定中的应用。
背景技术：
鳜是我国重要的淡水经济鱼类，由于其肉质鲜嫩，营养丰富，又无肌间刺而深受消费者欢迎。同时，鳜属于我国淡水水体中典型的食鱼性鱼类，是水生生态系统中的顶级消费者，对调节和维持生态系统平衡发挥着重要作用。但近些年来由于过度捕捞、生存环境恶化以及栖息地生境丧失等原因，鳜天然资源普遍呈下降趋势。鱼类的年龄鉴定是鱼类资源科学评估的基础，也是分析和评价鱼类种群数量变动趋势的基本依据之一，鱼类个体的生长、繁殖、种群补充和死亡率的计算，都需要具有精确的年龄数据。因此，对鳜鱼年龄的准确鉴定是一项尤为重要的基础性工作。鱼类年龄鉴定具有较长的研究历史，早在18世纪科学家就开始利用鱼类的骨质结构鉴定鱼类年龄。利用鱼体硬组织上的轮纹鉴定鱼类年龄是最为传统和常用的方法。目前，常用于年龄鉴定的硬组织材料有鳞片、耳石、脊椎骨、鳃盖骨、鳍条和匙骨等，其中，最常用是鳞片和耳石。鳞片长期以来被认为是可靠的年龄鉴定材料，具有取材简单、数量较多、对鱼体损伤小等优点，但由于鱼体对鳞片有重吸收现象，且鳞片被在身体表面，在生长过程中会收到一定程度的磨损，因此对于高龄鱼来说，鉴定结果往往比实际年龄偏低。除了年轮标志外，鱼类的鳞片上还会出现其他轮纹，如副轮、幼轮等，会对年龄的鉴定工作造成干扰。耳石是存在于真骨鱼类内耳膜迷路内，起平衡定向和听觉作用的硬组织，主要由碳酸钙构成。耳石的获取一般较鳞片复杂，但由于耳石沉积的持续性，加之存在于鱼的内耳，受到头部外骨骼的保护，其生长的一致性与形态的完整性能得到很好的保护。因此耳石的年轮和日轮能准确地记录了鱼类生活史历程。目前，耳石是应用最广泛的年龄鉴定材料，也是最为精确的年龄鉴定材料。目前，鳜鱼年龄鉴定采用的材料主要是鳃盖骨。鳜鱼鳞片细小，密带和疏带不明显，常出现副轮和生殖轮，冬轮和假轮难以区分，给年龄鉴定带来困难，因此，鳞片很少用于鳜鱼的年龄鉴定。虽说鳜鱼鳃盖骨上年轮比较明显，但相当一部分个体在宽带内出现暗黑色的狭带，由此狭带产生的假年层常会高估鳜的真实年龄。鳜鱼矢耳石呈乳白色，半透明。整个耳石呈扁平盾形，内外侧面凹凸不平，内侧面向外凸出，外侧面向内凹陷；核心靠近外侧面，处于背叶和腹叶的中间位置，在内侧面背叶和腹叶之间有一道较为明显的凹槽，上述外形结构对年龄鉴定造成极大困难，耳石的核心和四周的轮纹往往不能完整地呈现在同一磨片上，无法准确进行年龄鉴定。因此，本方法通过选取鳜矢耳石作为年龄鉴定材料，对其横截面进行磨片，保证耳石核心和四周轮纹在同一磨片上呈现，通过判读耳石磨片上黑白相间的轮纹分布特征，克服了假年层对年轮的干扰，提高了年轮的清晰度和 可识别度，从而达到准确鉴定鳜鱼年龄的目的。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种鳜鱼耳石横截面磨片的制作方法，该方法解决了内外侧面凹凸不平耳石的磨片制作难点，保证耳石核心和轮纹完整地出现在磨片上，有效提高了鳜鱼年轮的清晰度和可识别度，从而达到准确鉴定鳜鱼年龄的目的。本发明还有一个目的在于提供了一种鳜鱼耳石横截面磨片在年龄鉴定中的应用。为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施:一种鳜鱼耳石横截面磨片的制作方法:其步骤是:1.耳石清洗:取出耳石后，先用蒸馏水冲洗，然后放入体积百分比为75%的酒精中清洗干净，晾干后放在二甲苯中浸泡24小时，使其透明。2.确定中心线:耳石清洗干净后，放在显微镜透射光下找到鳜鱼耳石中心核，然后用铅笔经过中心核画一条平行于耳石短轴的线，作为中心线，便于磨制时观察进度。3.修剪:用小剪刀小心地将耳石两端修剪平整，使其与中心线平行，以保证耳石固定时的牢固性。4.粗磨:用耳石夹具(专利号ZL201220386074.X)夹住耳石，在600#砂纸上打磨耳石两端，使磨面与中心线平行，两端磨面各自距离中心线1.0-1.5mm时，粗磨完成。5.首次固定:取一小块热熔胶(705A)，放在载玻片一端的中央，用酒精灯缓缓加热使其融化，用镊子夹住耳石将其垂直于载玻片插入热熔胶中。热熔胶凝固后耳石即可被固定在载玻片上。6.细磨:握住载玻片，粘有耳石的一面朝下，食指在载玻片另一面顶住耳石固定的位置，先用600#的水磨砂纸打磨，打磨的时候砂纸要用水润湿，变磨制边观察。待磨制到距离中心线大概只有0.5mm时逐渐选用1000#、2000#和3000#砂纸打磨，待打磨至0.2-0.3mm时用抛光纸抛光,一端磨制完毕。7.卸载:第一端磨制完毕以后，把载玻片清理干净，用酒精灯缓缓加热凝固的热熔胶，用镊子取出耳石，清洗掉未磨制一端附着的热熔胶。8.二次固定:再次加热(180 200°C)载玻片使热熔胶融化，用镊子夹住耳石未磨制的一端，将磨制好的一端用热熔胶垂直黏着在载玻片上。9.二次打磨:按照步骤(6)的方法打磨，边打磨便放在显微镜下观察，待耳石核心和轮纹清晰后，用抛光纸抛光，打磨面清理干净后用中性树胶封片，得到鳜鱼耳石横截面磨片。10.观察鉴定:将制作好的耳石磨片放在显微镜下，在入射光照射下通过与显微镜连接的万能视频成像装置(LY-WN-HP SUPER (XD)观察轮纹特征并鉴定年龄。一种鳜鱼耳石横截面磨片在年龄鉴定中的应用，其步骤是:将制作好的耳石磨片放在显微镜下，在入射光照射下通过与显微镜连接的CXD观察轮纹特征、记录轮纹距离、拍照并判读年龄。根据耳石横截面的实际大小，将耳石磨片放大10-40倍。在入射光照射下，耳石核心呈黑色，处于耳石磨片一侧(外侧面)的中心位置，构成线状核区。从耳石核出发，朝耳石的内侧面、背叶和腹叶侧形成亮带与暗带交错的带区，亮带较宽，呈半透明的棕黄色，形成时间为春季到秋季，统称为夏轮8 ;暗带较窄，呈不透明的黑色，形成于冬季，称之为冬轮7。夏轮8和冬轮7交替出现，构成一个完整的年轮，对冬轮7进行计数，磨片上冬轮7数即为年龄大小。与现有技术相比，本发明 具有以下优点:
鳜鱼耳石外形与其他大多数鱼类明显不同，其主要特点是内外侧面凹凸不平，内侧面向外凸出，外侧面向内凹陷；核心靠近外侧面，处于背叶和腹叶的中间位置，在内侧面背叶和腹叶之间有一道较为明显的凹槽。上述外形结构对年龄鉴定造成极大困难，耳石的核心和四周的轮纹往往不能完整地呈现在同一磨片上，因此无法准确进行年龄鉴定。本发明解决了内外侧面凹凸不平耳石的磨片制作难点，保证耳石核心和轮纹完整地出现在磨片上，为耳石呈现内外侧面凹凸不平的鱼类年龄鉴定提供了一种新方法。该方法与传统方法相比具有轮纹更清晰、年轮更易读的优势；其次，耳石磨片制作简单，每4-6分钟可以制作完成一个磨片，采取横截面磨片的制作方式可以保证耳石核心和四周轮纹在同一磨片上呈现，便于判读年轮；再次，在横截面磨片上，耳石核偏向磨片的一侧，从耳石核出发呈现明暗交替的轮纹，夏轮和冬轮清晰可见，可以克服假年层对年轮的干扰，保证了年轮鉴定的准确性。
图1为一种鳜鱼矢耳石的内、外侧面轮廓示意图。其中，I为耳石背叶，2为耳石腹叶，3为耳石内侧面上的凹槽，4为耳石核心，5为耳石中心线，6为耳石磨片的厚度。图2为以后总鳜鱼矢耳石横截面磨片。其中，7为冬轮(窄带)，代表年轮，8为夏轮(宽带)。
具体实施例方式下面结合具体图示对本发明的进行详细说明:实施例1:一种鳜鱼耳石横截面磨片的制作方法:其步骤是:1.耳石清洗:打开鳜鱼的脑`颅，用尖头镊子从球囊中取出矢耳石，放在盛有清水的培养皿中，用解剖针轻轻剥掉耳石表层的粘膜，清洗干净后放在体积百分比为75%的酒精中清洗以去掉耳石表层的油脂，晾干后放在二甲苯中浸泡24小时，使其透明。2.确定中心线:24小时后，将浸泡过的耳石从二甲苯溶液中取出，用清水冲洗掉耳石表明残留的二甲苯后晾干备用。然后将耳石放在显微镜载物台上，外侧面朝上，在透射光下找到鳜鱼耳石中心核4，然后用铅笔经过中心核画一条平行于耳石短轴的中心线5，以便磨制时观察进度。3.修剪:用小剪刀小心地将耳石两端修剪平整，使其与中心线5平行，以保证耳石固定时的牢固性。4.粗磨:用耳石夹具夹住耳石，在600#砂纸上打磨耳石两端，使磨面与中心线平行，两端磨面各自距离中心线1.0-1.5mm时，粗磨完成。5.首次固定:取一小块热熔胶，放在载玻片一端的中央，用酒精灯缓缓加热使其融化，用镊子夹住修剪好的耳石，将其垂直于载玻片插入热熔胶中。热熔胶凝固后耳石即可被固定在载玻片上。6.打磨:握住载玻片，粘有耳石的一面朝下，食指在载玻片另一面顶住耳石固定的位置，先用600#的水磨砂纸打磨，打磨的时候砂纸要用水润湿，变磨制边观察。待磨制到距离中心线大概只有0.5mm时依次选用1000#、2000#和3000#砂纸打磨，待打磨至0.2-0.3mm时6用抛光纸抛光,一端磨制完毕。7.卸载:第一端磨制完毕以后，把载玻片清理干净，用酒精灯缓缓加热凝固的热熔胶，用镊子取出耳石，清理未磨制一端附着的热熔胶。8.二次固定:再次加热载玻片使热熔胶融化，用镊子夹住耳石未磨制的一端，将磨制好的一端用热熔胶垂直黏着在载玻片上。9.二次打磨:按照步骤(6)的方法打磨，边打磨便放在显微镜下观察，待耳石核心和轮纹清晰后，用抛光纸抛光，打磨面清理干净后用中性树胶封片，即得一种鳜鱼耳石横截面磨片。实施例2:—种鳜鱼耳石横截面磨片在年龄鉴定中的应用，其步骤是:将制作好的耳石磨片放在显微镜下，在入射光照射下通过与显微镜连接的CXD观察轮纹特征、记录轮纹距离、拍照并判读年龄。根据耳石横截面的实际大小，将耳石磨片放大10-40倍。在入射光照射下，耳石核心呈黑色，处于耳石磨片一侧(外侧面)的中心位置，构成线状核区。从耳石核出发，朝耳石的内侧面、背叶和腹叶侧形成亮带与暗带交错的带区，亮带较宽，呈半透明的棕黄色，形成时间为春季到秋季，统称为夏轮8 ;暗带较窄，呈不透明的黑色，形成于冬季，称之为冬轮7。夏轮8和冬轮7交替出现，构成一个完整的年轮，对冬轮7进行计数，磨片上冬轮7数即为年龄大小。耳石横截面磨片轮纹十分清晰，很容易判读年龄，且判读结果准确可靠。通过上述方法对标记放流的56尾鳜鱼(知道准确的年龄大小)进行年龄鉴定，吻合率达100%，进一步证实了本发明方法鉴定 鳜鱼年龄的准确性。
权利要求
1.一种鳜鱼耳石横截面磨片的制作方法，其步骤是: 0.耳石清洗:取出耳石后，先用蒸馏水冲洗，然后放入体积百分比为75%的酒精中清洗干净，晾干后放在二甲苯中浸泡24小时； 2).确定中心线:耳石清洗干净后，放在显微镜透射光下找到鳜鱼耳石中心核，然后用铅笔经过中心核画一条平行于耳石短轴的线，作为中心线； 3).修剪:将耳石两端修剪平整，使其与中心线平行； 4).粗磨:夹住耳石，在砂纸上打磨耳石两端，使磨面与中心线平行，两端磨面各自距离中心线1.0-1.5mm时,粗磨完成； 5).首次固定:将热熔胶棒切割少许，放在载玻片一端的中央，用酒精灯加热使其融化，用镊子夹住耳石将其垂直于载玻片插入热熔胶中，热熔胶凝固后耳石固定在载玻片上； 6).细磨:握住载玻片，粘有耳石的一面朝下，食指在载玻片另一面顶住耳石固定的位置，先用水磨砂纸打磨，待磨制到距离中心线0.5mm时逐渐选用砂纸打磨，待打磨至0.2-0.3mm时用抛光纸抛光,一端磨制完毕； 7).卸载:第一端磨制完毕以后，把载玻片清理干净，用酒精灯加热凝固的热熔胶，用镊子取出耳石，清洗掉未磨制一端附着的热熔胶； 8).二次固定:再次加热载玻片使热熔胶融化，用镊子夹住耳石未磨制的一端，将磨制好的一端用热熔胶垂直黏着在载玻片上； 9).二次打磨:按照步骤(6)的方法打磨，用抛光纸抛光，打磨面清理干净后用中性树胶封片。·
2.权利要求1所述的一种耳石的制作方法所制得的耳石在鳜鱼年龄鉴定中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种鳜鱼耳石横截面磨片的制作方法及应用，属于鱼类生态学领域。本发明选取矢耳石作为研究材料，对其横截面进行磨片，将制作好的耳石磨片放在显微镜下，在入射光照射下通过CCD软件鉴定年龄并测定轮纹之间的宽度，观察耳石磨片的轮纹分布特征，鉴定鳜的年龄。与传统鉴定方法相比，此方法实现了对鳜鱼耳石轮纹的清晰可视，耳石核偏向耳石磨片的一侧，构成线状核区；从耳石核出发，朝耳石的另一侧形成亮带与暗带交错的带区，亮带较宽，形成时间为春季到秋季，暗带较窄，形成于冬季，即为年轮。这种明暗交替的轮纹，使年龄更容易辨别和判读，从而大大提高了鳜鱼年龄鉴定的准确性。
文档编号B24B1/00GK103231285SQ20131014789
公开日2013年8月7日 申请日期2013年4月26日 优先权日2013年4月26日
发明者李为, 丁城志, 连玉喜, 李钟杰, 张堂林, 刘家寿, 叶少文, 苑晶 申请人:中国科学院水生生物研究所