一种血型检测卡及其生产方法

专利名称：一种血型检测卡及其生产方法
技术领域：
本发明涉及一种血型检测卡及其生产方法，属于血型检测技术领域。
背景技术：
血型检测主要根据血型正定型，目前血型正定型一直是根据血型抗体
与对应红细胞抗原的凝集反应。以ABO血型为例A型红细胞表面含A 抗原，血清/血浆含B抗体；B型红细胞表面含B抗原，血清/血浆中含A 抗体；AB型红细胞表面含AB抗原，血清/血浆中不含AB抗体；0型血表 面不含AB抗原，血清/血浆中含AB抗体。这种抗原抗体形成的凝集反应 由医学专业人员根据血型定型试剂来判读结果。
血型正定型检测主要包括4步1、在反应容器或平板上加血型定型 试剂，2、加入少量受检者全血，3、将两者混匀，4、判读结果。血型检 测及结果判定必须由医疗专业人员完成，而且由于多种人为因素(试剂 位置混淆/记忆不清、样品加错位置等)造成血型结果判断错误导致严重 输血反应甚至死亡。
检测过程需要使用抗体溶液，抗体溶液的保存温度一般为4摄氏度， 以防止失效。液态的抗体试剂在运输和保存方面存在4交大困难，尤其是在没有稳定冷藏设备的环境中(例如野外)使用时，常常会因为抗体失 效而无法得到准确的检测结果。
为简化血型检测过程，提供便捷的检测方式，人们进行了如下尝试
中国专利申请200320121646. 2 (公开号为2669196 )公开了一种4企测 AB0血型检测卡。血型卡由带凹槽平面载体和凹槽内干燥的抗体膜构成， 抗体膜分别为抗A、抗B和全凝集素。透明不干胶膜用于覆盖检测完毕的 血型卡标注区和检测区，并用于粘贴档案。检测卡、透明不干胶膜和干燥 剂装入铝箔袋成一个试剂盒。该检测卡室温保存，结果准确，能有效控制效 期，方便了非专业人员使用，结果保存及存档方便，单份测定，可随身携带。 主要用于医院、部队、公检法部门外出AB0血型才企测，个人也可进行血型自检。
中国专利申请03215617. 0 (公开号为2605574 )的血型鉴定卡，/>开 了 一种简便的血型鉴定卡，板卡状，其板卡上设有鉴定凹坑，凹坑上设有识 别标记，最好将鉴定凹坑设计三个，分别为抗A鉴定凹坑、抗B鉴定凹坑和 RH鉴定凹坑；使用纸质板卡，可以在板卡有鉴定凹坑的表面上设防渗膜 层。本实用新型结构简单，使用操作方便，结果快速准确，又成本低，易于普 及推广应用。
中国专利ZL 200620112928. X (公开号为2901313 )公开了 一种ABO 血型反定型试剂盒，包括三个密封瓶、A型、B型和0型红细胞试剂，密封 瓶为塑料滴瓶，由透明塑料瓶、塑料瓶盖、滴管和密封垫组成，A型、B型和0型红细胞试剂是由A型、B型和0型红细胞和红细胞保养液组成，A型、 B型和0型红细胞的浓度为4%, A型、B型和0型红细胞是通过白细胞过滤 器过滤后的红细胞，红细胞保养液是使用药品和蒸馏水按照特定比例配 制而成。本实用新型的有效期不低于3个月，本实用新型的优点是使用方 便、有效期长、灵敏度高、准确性好的ABO血型反定型试剂盒，能够在临 床上准确地i貪断AB0血型。
以上的发明均只能纟企测AB0血型，并且无法彻底消除由于人为误:操作 造成的判读错误。因此，目前需要一种能显著降低血型判读错误率、操 作更加简单、结果显而易见的血型检测卡和/或血型检测方法。

发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种使用方便，结果可靠显见的新 型血型一企测卡。
本发明要解决的另 一个技术问题是提供上述血型检测卡的生产方法。 为实现上述目的，本发明采用以下技术方案
一种血型检测卡，由载体和固定在载体上的抗体层组成，抗体层含有 至少一个字母形状的抗体印迹。抗体印迹的数量可以为一个或多个，还可 以将不同字母的抗体印迹进行组合形成检测单元。例如将字母A形抗体印 迹与字母B形抗体印迹组合，形成ABO血型检测单元。
所述抗体印迹由血型片企测用抗体制成，其中的抗体选自抗A抗体、抗B抗体、抗Rh血型相关抗体、抗P血型相关抗体、抗MNSs血型相关抗体、 抗Duffy血型相关抗体中的一种或几种。
所述抗体印迹的字母形状为与该抗体印迹产生抗原抗体反应的血型 相应的字母。例如抗A抗体印迹呈字母"A"，测得为A型血；抗B抗体印 迹呈字母"B"，测得为B血型；抗Rh抗体印迹呈字母"R",测得为Rh血 型；抗P抗体印迹呈字母"P",测得为P血型、抗MNSs抗体印迹呈字母"M"， 测得为MNSs血型；抗Duffy抗体印迹呈字母"D，，，测得为Duffy血型。
在本发明中，相应于ABO血型的抗体印迹字母形状分别是字母A或B 的形状。根据显示出的红色A、 B字母便可以确定其血液的血型，即字母A 判定其血型为A型；字母B判定其血型为B型；字母AB判定其血型为AB 型；不显示任何字母判定其血型为0型。
相应于Rh、 P、 MNSs、 Duffy血型的抗体印迹字母形状分别是它们的 相应字母形状。Rh血型含有5种抗原DCcEe,出现R这个字母判定其血液 含有D抗原，判断为Rh阳性，未出现字母判定其血液为Rh阴性。P、 MNSs、 Duffy等血型判定与Rh血型相同。
所述抗体印迹中的抗体为多克隆抗体、单克隆抗体或月交体金标记的金 标抗体。其中单克隆抗体和金标抗体的特异性强，可增强反映的灵敏度。 多克隆抗体和单克隆抗体均可通过商业途径购买得到，也可以采用公知的 多克隆抗体或单克隆抗体的制备方法制得。
所述载体选自纸板、玻璃片、塑料板、纤维膜或树脂板中的一种，也可以是其他检验领域可接受的医用材料。所述的纸板是一种能够承受本发 明方法处理的具有一定厚度的纸板。所述的玻璃片是目前市场上普遍销售 载玻片。所述的塑料板是目前市场上销售的聚合物板，例如聚苯乙烯、聚 乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯等聚合物板。所述的纤维膜是目前市 场上销售的纤维膜，例如像丝素蛋白膜、聚乳酸膜玻璃纤维膜、醋酸纤维 素膜或硝酸纤维素膜等。
所述的树脂板是目前市场上销售的树脂板，例如像PVC、 ABS、环氧树 脂或酚醛树脂板等。
所述载体一侧表面或一侧的局部表面具有弧度，例如呈凸面型结构或 凹面型结构，又如在凸面型结构的外围设有凹槽。带有凸面型的结构中， 抗体层位于凸面处，未与抗体反应的血液自动离开抗体层表面，可减少结 果判定的干扰。
所述血型检测卡外设有包装材料，选自塑料薄膜、铝箔或纸中的一种 或几种。所述的塑料薄膜、铝箔或纸都是在药品包装中通常使用的包装材 料。可以使用单一材料包装，例如只是使用塑料薄膜包装或使用铝箔包装， 也可以使用多种材料包装，例如先使用铝箔包装，再在其外面用纸包装。
一种血型检测卡的生产方法，在用抗体固定剂预处理的清洁载体的表 面喷涂或印染血型检测用抗体，制成具有字母形状的抗体印迹的抗体层， 使用緩冲液除去未与载体结合的多余抗体，干燥，包装。
所述抗体印迹的字母形状为与该抗体印迹产生抗原抗体反应的血型相应的字母。
所述清洁载体的方法包括但不限于如下方法使用纸载体时，可以先
使用吸尘器清除灰尘，然后喷洒杀菌剂、消毒剂等进行清洁；使用玻璃片、塑料板或树脂板时，可以先用洗液浸泡12-24h,然后用自来水冲洗，再用蒸馏水清洗；滤干后，可以在室温下进行自然干燥，也可以在用绸布擦千后，再在干燥箱进行干燥。使用纤维膜时，可以喷洒目前在市场上销售的清洁剂，然后凉干或在干燥箱进行干燥。
所述预处理的清洁载体是指用抗体固定剂进行了预处理的载体，其表面可结合纟元体。
由于固相载体本身一般不具有直接与抗体和其他活性蛋白反应的能力，因此需要预先在固相载体表面引入活性基团，然后利用活性基团与抗体上的氨基、羧基或其他基团进行反应而使其固定在所述载体上。为此，清洁的载体需要用抗体固定剂进行处理。
在本发明中，抗体固定剂应该理解是能够往固相载体表面引入活性基团，并且这些活性基团与抗体的氨基、羧基等活性基团进行反应而其固定在所述载体上的任何物质。常用的固定剂可以是无才几固定剂或有机固定剂。
所述的无机固定剂例如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛、二氧化硅和锇酸等，它们都是目前市场上销售的产品。例如将二氧化硅喷涂在载体上，通过表面鞋基化、氨基硅烷化和对苯二甲醛组装，在二氧化硅表面衍生活泼的醛基基团，利用抗体的氨基和醛基发生还原胺化反应将抗体固定在二氧化硅表面上。
所述的有机固定剂例如是APES ( 3-氨丙基三乙氧基硅烷)、Polv-L-Lysine (多聚赖氨酸)或铬明胶溶液等，它们都是目前市场上销售的产品。例如使用丝素蛋白膜或聚乳酸膜时，使用含有氨基、羧基或其他基团的有机固定剂处理丝素蛋白膜或聚乳酸膜，使抗体的氨基和醛基与所述这些基团发生反应而将抗体固定在这些膜上。
所述固定剂的使用量没有特别限制，所述固定剂的使用量不能太少，如果使用量太少，所述的载体与抗体结合不牢，容易脱露，从而影响检测结果。如果固定剂使用量太多，会造成所述固定剂的浪费。 一般而言，所述固定剂的使用方法是在清洁的载体与固定抗体层的表面喷涂固定剂，
或将清洁载体置于固定剂溶液中使表面覆盖上固定剂，取出；干燥即可。
所述的固定剂选自曱醇、乙醇、丙酮、曱醛、戊二醛、二氧化硅、锇酸、3-氨丙基三乙氧基硅烷、多聚赖氨酸或铬明胶溶液中的一种。抗体与载体固定结合的方法为现有技术，本领域普通技术人员根据教科书、文献或固定剂的使用说明书的指导可方便地实施。
所述使用緩冲液除去未与载体结合的多余抗体是指检测用抗体与载体表面固定剂中的 一些活性基团进行反应而被固定在载体上之后，放置一段时间(0. 5 - 24小时)，待固定化过程结束后再用緩冲液除去未与载体结合的多余抗体，得到所述的血型检测卡。
ii所述的緩沖液为磷酸盐緩冲液、碳酸盐緩冲液或含甘油的缓冲液中的一种。所述的緩冲液为能够将没有与这种载体结合的多余抗体除去而又不损害其它结合抗体与血型检测卡其它部分的溶液。緩沖液使用量没有特别
限制，或多或少都可以，但以不损害其它结合抗体与血型^r测卡其它部分
为原则。
在使用所述的緩冲液处理后， 一般需要进行干燥处理(室温或真空干燥箱)。
本发明血型检测卡使用方法是在本发明血型检测卡上加入少量受检者的全血，通常是l-2滴全血，摇匀后根据本发明血型检测卡上显示的红色字母，就可以知道血型结果。例如本发明血型检测卡上显示的红色字母A表示受检者的血型为A型血，其它依此类推。
本发明的血型4全测卡可广泛应用于AB0、 Rh、 P、 MNSs、 Duffy等具有临床意义的主要血型系统。本发明的血型检测卡可应用于各血液中心，各级医院输血科、临床检验科，突发事件、战地医疗备用，边远地区救护所，非医疗专业人员家用，既可针对血液中心和医院设计成批量鉴定，又可针对家用设计成单人或十人以内的小量检测型卡片。
本发明的优点是本发明将抗体固定于载体之上，不必再使用现有技术中冷藏的抗体溶液，彻底解决了携带抗体溶液的运输和冷藏难题，并才及大地筒化了检测操作。本发明操作简单，只需将全血滴加在反应处，稍加摇动，即可根据红细胞聚集后显现的字母直接判读血型结果，仅需2个步骤便可直接知道结果，极大地缩短了检测时间，还能够避免人为因素造成的血型判断错误，例如在传统血型检测操作中可能发生的血型试剂加错、加反、血型结果读错等错误。本发明在血液中心、医院、突发事件、战地医疗、边远地区救护或家庭中作为检测血型具有广泛的应用前景。
下面结合附图和具体实施方式
对本发明作进一步说明，并非对发明的限定，依照本领域公知的现有技术，本发明的实施方式并不限于此，因此凡依照本文公开内容所做出的本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。


图1为本发明第一种结构示意图，载体为平面结构。
图2为本发明第一种结构的纵剖面图。
图3为本发明第二种结构示意图，载体具有凹面。
图4为本发明第二种结构的纵剖面图。
图5为本发明第三种结构示意图，载体具有凸面及凹槽。
图6为本发明第三种结构的纵剖面图。
图7为人次血型检测卡的示意图。
具体实施例方式
实施例1 载体为平面的单人份AB0血型检测卡
13ABO血型检测卡，由平面玻片载体1 (医用载玻片)和固定在玻片载体1上的检测用抗体层2组成，抗体层由两个抗体印迹组成。
抗体印迹的字母形状分别为字母A和字母B，字母A形状的抗体印迹为抗A抗体，字母B形状的抗体印迹为抗B抗体。
抗体层2通过载体表面的固定化试剂与玻片载体1固定连接。
实施例2 载体为凹面的单人份ABO血型检测卡
ABO血型检测卡，由纸板载体1和固定在纸板载体1上的净企测用抗体层2组成，抗体层由两个抗体印迹组成。
抗体印迹的字母形状分别为字母A和字母B，字母A形状的抗体印迹为抗A抗体，字母B形状的抗体印迹为抗B抗体。纸板载体l的检测区域具有凹面结构3, 4元体印迹4立于凹面结构3处。
抗体层2通过载体表面的固定化试剂与载体1固定连接。
实施例3 载体为凸面并具有凹槽的单人份ABO血型纟企测卡ABO血型检测卡，由纸板载体1和固定在纸板载体1上的才企测用抗体层2组成，抗体层由两个抗体印迹组成。
抗体印迹的字母形状分别为字母A和字母B,字母A形状的抗体印迹为抗A抗体，字母B形状的抗体印迹为抗B抗体。纸板载体l的检测区域具有凸面结构3,抗体层位于凸面结构3处，凸面结构3的外围环设有凹槽4，用于收集未反应的血液。
抗体层2通过载体表面的固定化试剂与载体1固定连接。
实施例4 载体为凸面并具有凹槽的多人份AB0血型^r测卡
ABO血型4全测卡，由纸板载体1和固定在纸板载体1上的抗体层2组
成，抗体层2由若干个检测单元组成，每个检测单元由两个单字母形状的
抗体印迹组成。
每个检测单元内的抗体印迹的字母形状分別为字母A和字母B,字母A形状的抗体印迹为抗A抗体，字母B形状的抗体印迹为抗B抗体。
纸板载体1的检测区域具有凸面结构3,抗体层位于凸面结构3处，凸面结构3的外围环设有凹槽4，用于收集未反应的血液。
该ABO血型检测卡可实现同时对多人进行血型检测，边缘空白处可做4企测记录之用。
实施例5 采用医用玻璃载片作为载体的血型检测卡的生产方法
A、 选用医用玻璃载片(玻片)作为载体，其洗涤方法是用1°/。的HC1溶液浸泡一昼夜，再用市售洗涤剂洗刷，然后用清水反复冲洗，最后用蒸馏水冲洗1 2次。滤干后，再在干燥箱中在温度9(TC下进行干燥2h,然后冷却至室温。
B、 在清洁载体上用山东省曲阜市华荣化工新材料有限公司销售的3-氨丙基三乙氧基硅烷处理，用该试剂将玻片浸没后取出玻片，干燥，备用；
C、 在经过处理的载体上用相应抗体喷涂字母A和B形状的抗体印迹，字母A形状的抗体印迹采用抗A抗体喷涂，字母B形状的抗体印迹采用抗B抗体喷涂，过夜(放置0. 5-24小时)；(抗体购自上海血液生物医药有限责任公司，商品名为抗A、抗B血型定型试剂)
D、 用磷酸盐緩冲液除去未与载体结合的多余抗体，晾千。
E、 得到的血型检测卡用铝泊进行密封包装，多人份或单人份均可。
实施例6:采用纸板作为载体生产本发明血型检测卡本发明血型检测卡的生产，其生产步骤如下
A、选用一次性血型纸板作为载体，将纸板加工成每个检测单元直径为1. 2-2. 2cm的圓形凹槽，每个圆形凹槽的深度为0. 02-0. 2cm,中间为圆弧状。
B、 在经过处理的丝素蛋白膜/硝酸纤维膜上用相应抗体喷印字母A和B形状的抗体印迹，字母A形状的抗体印迹采用抗A抗体喷涂，字母B形状的抗体印迹采用抗B抗体喷涂，过夜(放置0. 5-24小时)，用磷酸盐緩冲液除去未与载体结合的多余抗体，晾干，制成检测单元的形状，备用；(抗体购自上海血液生物医药有限责任公司，商品名为抗A、抗B血型定型试剂)
C、 将每个检测单元中间涂上粘合剂，将涂有抗体的膜贴在检测单元内；
D、 得到本发明的血型检测卡；E、得到的血型卡进行密封包装。
使用实施例5的方法生产的实施例1所述的血型检测卡，进行了 100 人次检测，结果表明，非医疗专业人员使用本血型检测卡获得的检测结果 与目前医疗专业人员采用传统血型检测方法得到的々企测结果相同，非医疗 专业人员使用本血型检测卡检测速度快一倍，批量生产成本可低于现有传 统血型检测方法。因此，非常有利于广泛推广应用。
权利要求
1.一种血型检测卡，其特征在于由载体和固定在载体上的抗体层组成，抗体层含有至少一个字母形状的抗体印迹。
2. 根据权利要求1所述的一种血型检测卡，其特征在于所述抗体印迹由血型检测用抗体制成，其中的抗体选自抗A抗体、抗B抗体、抗Rh血型相关抗体、抗P血型相关抗体、抗MNSs血型相关抗体、抗Duffy血型相关抗体中的一种或几种。
3. 根据权利要求1所述的一种血型检测卡，其特征在于所述抗体印迹的字母形状为与该抗体印迹产生抗原抗体反应的血型相应的字母。
4. 根据权利要求1至3中任何一项所述的一种血型检测卡，其特征在于所述抗体印迹中的抗体为多克隆抗体、单克隆抗体或胶体金标记的金标抗体。
5. 根据权利要求1所述的一种血型检测卡，其特征在于所述载体选自纸板、玻璃片、塑料板、纤维膜或树脂板中的一种。
6. 根据权利要求5所述的一种血型检测卡，其特征在于所述的塑料板选自聚苯乙烯、聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯或聚碳酸酯等聚合物板中的一种。
7. 根据权利要求5所述的一种血型检测卡，其特征在于所述的纤维膜选自丝素蛋白膜、聚乳酸膜玻璃纤维膜、醋酸纤维素膜或硝酸纤维素膜中的一种。
8. 根据权利要求5所述的一种血型检测卡，其特征在于所述的树脂板选自PVC、 ABS、环氧树脂或酚醛树脂;tl中的一种。
9. 根据权利要求1所述的一种血型检测卡，其特征在于所述载体一侧表面或一侧的局部表面具有弧度。
10. 根据权利要求9所述的一种血型检测卡，其特征在于所述载体一侧表面或一侧的局部表面具有弧度，为凸面型或凹面型结构。
11. 根据权利要求10所述的一种血型检测卡，其特征在于所述凸面型结构的外围设有凹槽。
12. 根据权利要求1所述的一种血型检测卡，其特征在于所述血型检测卡外设有包装材料，选自塑料薄膜、铝箔或纸中的一种或几种。
13. —种血型检测卡的生产方法，其特征在于在用抗体固定剂预处理的清洁载体的表面喷涂或印染血型检测用抗体，制成具有字母形状的抗体印迹的抗体层，使用緩冲液除去未与载体结合的多余抗体，干燥，包装。
14. 根据权利要求13所述的 一种血型检测卡的生产方法，其特征在于所述抗体印迹的字母形状为与该抗体印迹产生抗原抗体反应的血型相应的字母。
15. 根据权利要求13所述的一种血型检测卡的生产方法，其特征在于所述清洁载体的方法为使用纸载体时，先清除灰尘，然后喷洒杀菌剂、消毒剂等进行清洁；使用玻璃片、塑料板或树脂板时，先用洗液浸泡12-24h,然后用水冲洗；滤干后，进行干燥；使用纤维膜时，喷洒清洁剂，然后进行干燥。
16. 根据权利要求13所述的一种血型检测卡的生产方法，其特征在于所述的固定剂为无才几固定剂或有才几固定剂。
17. 根据权利要求13所述的 一种血型检测卡的生产方法，其特征在于所述的无机固定剂选自曱醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛、二氧化硅或锇酸中的一种或几种。
18. 根据权利要求13所述的一种血型检测卡的生产方法，其特征在于所述的有机固定剂选自3-氨丙基三乙氧基硅烷、多聚赖氨酸或铬明胶溶液中的一种或几种。
19. 根据权利要求13所述的一种血型检测卡的生产方法，其特征在于所述使用緩冲液除去未与载体结合的多余抗体是指，检测用抗体与载体表面固定剂中的一些活性基团进行反应而被固定在载体上之后，放置一段时间(0. 5-24小时)，待固定化过程结束后再用緩冲液除去未与载体结合的多余抗体，得到所述的血型检测卡。
20. 根据权利要求13所述的一种血型检测卡的生产方法，其特征在于所述的緩冲液选自磷酸盐緩冲液、碳酸盐緩冲液或含甘油的緩冲液中的一种。
全文摘要
本发明涉及一种血型检测卡及其生产方法，属于血型检测技术领域。一种血型检测卡，由载体和固定在载体上的抗体层组成，抗体层含有至少一个字母形状的抗体印迹。本发明的血型检测卡可广泛应用于ABO、Rh、P、MNSs、Duffy等具有临床意义的主要血型系统，易于推广使用，操作简便，直接读出血型结果，还能够避免人为因素出现的错误。
文档编号G01N33/531GK101672852SQ20091009167
公开日2010年3月17日 申请日期2009年8月28日 优先权日2009年8月28日
发明者卉 李, 汪德清 申请人:中国人民解放军总医院