心达康制剂的鉴别方法

专利名称：心达康制剂的鉴别方法
技术领域：
本发明涉及一种心达康制剂的鉴别方法，属于对药品进行质量控制的技术领域。
背景技术：
心达康制剂是从植物沙棘(Hippophae L.)中提取的有效部位沙棘总黄酮与辅料 制备而成。沙棘总黄酮用于治疗心脑血管疾病已得到了世界公认，现代药理学研究和临床 应用表明沙棘总黄酮具有扩张冠状动脉，增加心脑组织供血量，降低心脏负荷，抑制血小 板聚集，改善微循环，防止血栓形成及动脉粥样硬化的发生，抑制脂质过氧化反应，延缓衰 老等作用。其中的“心达康片”和“心达康胶囊”分别刊登在中国部颁标准中药成方制剂第 十四册和新药转正标准33册上，并已在临床上应用多年，在治疗心脑血管疾病方面取得了 较满意的治疗效果。但经研究发现，现有心达康制剂存在着质量控制方法不合理的缺点，如 现在市场上的心达康片，包括糖衣片和薄膜衣片，由于其制法、处方实际上一样，只是包衣 不同，而却实行两个标准(一个是WS3-B-2666-97，一个是WS3 — B — 2666-2002)，浪费了 标准资源；另外在2005年版中国药典附录XVG对照品、对照药材、对照提取物中已没有收载 现标准中的仍在使用的标准品异鼠李素葡萄糖苷，这给产品的质量控制带来一定的难度； 现有心达康制剂存在质量控制标准简单，产品质量不易控制的缺点，体现在因醋柳黄酮是 一类黄酮物质的总称，而对其的鉴别和含量控制均以单一的异鼠李素来进行衡量，故不能 有效控制该制剂的质量，从而影响其临床疗效。

发明内容
本发明的目的，是提供一种心达康制剂的鉴别方法。本发明针对原有心达康制剂 质量控制标准简单，产品质量不易控制的缺点，对本制剂的质量控制方法进行了研究，拟订 了制剂中槲皮素、异鼠李素的薄层色谱鉴别，提高了心达康制剂的质量控制标准，该质量标 准中的控制方法可有效地控制心达康制剂的质量，从而保证了该制剂的临床疗效。本发明所述的心达康制剂是由沙棘总黄酮(醋柳黄酮)与辅料制备而成。其制法 为沙棘经提取得醋柳黄酮，取醋柳黄酮50g(含总黄酮以异鼠李素计5g)，粉碎成细粉，加入 适量辅料按照常规方法制成包括片剂(包括含片、分散片、咀嚼片)、胶囊剂、软胶囊剂、滴 丸剂在内的不同制剂。本心达康制剂的鉴别方法，所述制剂包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂，所述鉴 别包括以槲皮素对照品、异鼠李素对照品为对照鉴别制剂中黄酮苷元的薄层色谱鉴别。槲 皮素、异鼠李素的鉴别方法是分别以槲皮素对照品和异鼠李素对照品为对照，以甲苯乙 酸乙酯甲酸=2 10 1 8 0. 1 1. 5的溶液为展开剂的薄层色谱法。所述鉴别方法包括以下
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取本制剂或其内容物，研细，加乙醇使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取槲 皮素和异鼠李素对照品，加乙醇制成混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法 试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙 酯甲酸=2 10 1 8 0.1 1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1 5%三氯化 铝乙醇溶液，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜 色的荧光斑点。更具体的鉴别方法包括以下取本制剂或其内容物，研细，取细粉2 20mg，加无水乙醇2 20ml，超声处理 1 15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取槲皮素和异鼠李素对照品，加无水乙醇制成 每Iml各含Img IOmg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱 法试验，吸取上述两种溶液各1 20ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=2 10 1 8 0. 1 1. 5为展开剂，展开，取 出，晾干，喷以1 5%的三氯化铝乙醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在 与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。本心达康制剂的含量测定，包括制剂中总黄酮测定。本心达康制剂的含量测定，还包括对制剂中槲皮素、异鼠李素、山柰素总量的测 定，该测定方法是以异鼠李素、槲皮素、山柰素对照品为对照，以甲醇0.4%磷酸=30 60 30 60为流动相的高效液相色谱法。经研究申请人发现，采用以下质量控制方法将更容易控制这种制剂的质量，更有 利于保证制剂的临床疗效性状对于片剂内容物为棕黄色至棕色，味微苦；对于胶囊剂内容物为浅黄褐色至灰褐色的颗粒及粉末；气微，味微苦；对于软胶囊剂内容物为含有少量悬浮固体浸膏的黄色油状液体；气微，味微苦；对于滴丸剂本品为棕色的滴丸；气微，味微苦；鉴别取本制剂1片或1粒，研细，加乙醇5ml或10ml，超声处理5分钟，制成lmg/ml的 溶液，滤过，滤液作为供试品溶液；另取槲皮素和异鼠李素对照品，加乙醇制成每Iml各含 Img的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两 种溶液各1 2ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯 乙酸乙酯甲酸=5 4 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1 3%三氯化铝乙醇溶 液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色 的荧光斑点。检查应符合中国药典一部附录中片剂、胶囊剂、软胶囊剂或滴丸剂项下各有关规定。含量测定(1)总黄酮对照品溶液的制备精密称取采用P2O5干燥12小时以上的异鼠李素对照品，加无 水乙醇制成每Iml含异鼠李素20ug的溶液，即得；
标准曲线的制备精密量取对照品溶液l、2、3、4、5、6ml，分别置IOml量瓶中，加 1 3%三氯化铝无水乙醇溶液1. 0ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，放置10分钟，以相应 的试剂为空白，照紫外_可见分光光度法(中国药典一部附录VA)，在430nm的波长处测定 吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法本制剂取片剂20片、取10 20粒胶囊剂、滴丸剂内容物，精密称定，研细 混勻，取约0. lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加无水乙醇适量，于80°C水浴中加热回流15 分钟，放冷，移置IOOml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取 续滤液10ml，置25ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，精密量取3ml，置IOml量瓶中， 加1 ％三氯化铝无水乙醇溶液1. 0ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液 ’另 取未加显色剂的同样量供试品溶液作空白，照上述标准曲线制备项下的方法，自“放置10 分钟”起，照紫外_可见分光光度法(中国药典一部附录VA)，在430nm的波长处测定吸光 度，从标准曲线中读出供试品中异鼠李素的重量(ug)，计算，即得；本制剂含总黄酮(以异鼠李素计)为5mg时，含醋柳黄酮以异鼠李素(C16H12O7) 计，片剂每片应为标示量的90. 0 110. 0%、胶囊剂和软胶囊剂每粒应为标示量的90. 0 110. 0%、滴丸剂每丸应为标示量的90. 0 110. 0%。本制剂含总黄酮(以异鼠李素计)为IOmg时，含醋柳黄酮以异鼠李素(C16H12O7) 计，片剂每片应为标示量的90. 0 110. 0%、胶囊剂和软胶囊剂每粒应为标示量的90. 0 110. 0%、滴丸剂每丸应为标示量的90. 0 110. 0%、(2)槲皮素、异鼠李素、山柰素采用高效液相色谱法测定色谱柱为C18柱；以甲 醇0.4%磷酸=50 50为流动相；检测波长为370nm;理论塔板数按异鼠李素峰计算应 不低于3000 ；精密称取以P2O5为干燥剂减压干燥12小时以上异鼠李素、山柰素、120°C干 燥4小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每Iml分别含异鼠李素20ug、山柰素2ug、槲皮 素25ug的混合溶液，即得对照品溶液；本制剂取片剂20片除去包衣、取10粒胶囊剂、滴丸 剂内容物，精密称定，研细混勻，取相当于总黄酮10mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加 入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率135W，频率59kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲 醇补足减失的重量，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇 15ml，盐酸(1 — 2) 5ml，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用甲醇 稀释至刻度，摇勻，用0. 45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对 照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本制剂含总黄酮(以异鼠李素计)为5mg时，各剂型含槲皮素(C15HltlO7)、异鼠李 素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的总量片剂每片应不少于标示量的80%、胶囊剂和软胶囊 剂每粒每粒应不少于标示量的80%、滴丸剂每丸应不少于标示量的80%。本制剂含总黄酮(以异鼠李素计)为IOmg时，各剂型含槲皮素(C15HltlO7)、异鼠李 素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的总量片剂每片应不少于标示量的80%、胶囊剂和软胶囊 剂每粒每粒应不少于标示量的80%、滴丸剂每丸应不少于标示量的80%。本质量控制方法是对现有心达康制剂产品的质量控制方法进行的改进，其改进方 法包括将现有心达康片糖衣片和薄膜衣片两种产品标准合并；对合并产品标准性状进行 调整；对原鉴别项的总黄酮的化学反应显色鉴别删除代之以醋柳黄酮中槲皮素、异鼠李素 的专属性鉴别；含量测定项中对照品异鼠李素按药典新要求采用P2O5干燥法；增加用高效液相色谱法测定槲皮素、异鼠李素、山柰素总含量。由于本发明与现有技术相比，增加了槲皮素、异鼠李素的薄层色谱鉴别和采用高 效液相色谱法测定制剂中槲皮素、异鼠李素、山柰素的总含量，所采用的方法专属于性强、 精密度高，重现性好，回收率高，提高了原心达康制剂的质量控制标准，从而保证了该制剂 的质量和临床疗效。为了确保本发明的质量控制方法科学、合理、可行，本申请人对方法中的鉴别和含 量测定方法进行了研究，具体试验资料如下鉴别经试验，采用槲皮素和异鼠李素作对照鉴别心达康制剂，其阴性无干扰，斑 点清晰。点样量采用10ul，斑点有点拖尾，调整点样量为1 2ul。采用不同生产厂家的硅胶G薄层板，以上述薄层色谱条件展开，均可得到满意的 分离结果。检查应符合中国药典片剂(中国药典一部附录ID)、胶囊剂、软胶囊剂(中国药 典一部附录IL)或滴丸剂(中国药典一部附录IK)项下有关规定。含量测定总黄酮同原标准方法，仅对异鼠李素对照品的干燥方式进行了研究， 结果见表1。表 1 (心达康片样品批号060301，规格5mg/片)以上结果表明采用两种方式干燥异鼠李素对照品后，测总黄酮的含量无明显差 异，故异鼠李素对照品改为采用P2O5干燥12h以上，以更符合药典对对照品干燥条件的要 求。槲皮素、异鼠李素、山柰素新增加的采用高效液相色谱法测定心达康片中的槲皮 素、异鼠李素、山柰素总量的含量测定方法。方法参照中国药典一部沙棘项下收载的高效液 相色谱法测定异鼠李素的方法，对心达康制剂中槲皮素、异鼠李素、山柰素进行含量测定。1.最大吸收波长选择取槲皮素、异鼠李素、山柰素对照品，分别用甲醇制成对照品溶液，于200-600nm 波长范围内扫描，槲皮素在371nm处有最大吸收波长，异鼠李素在369. 5nm处有最大吸收波 长，山柰素在366. 5nm处有最大吸收波长。参照中国药典2005年版一部沙棘项下异鼠李素 的检测波长，故将槲皮素、异鼠李素、山奈素检测波长选择为370nm。2.流动相的选择中国药典2005年版一部沙棘项下异鼠李素的含量测定项下流动相为甲 醇0.4%磷酸=58 42，银杏叶片中槲皮素、异鼠李素、山柰素的含量测定项下流动相为甲醇0.4%磷酸=50 50，本品为单味药制剂，故参照中国药典，确定流动相最佳为甲 醇0. 4%磷酸=50 50。3.色谱条件及系统适用性试验流动相甲醇0.4%磷酸=50 50色谱柱迪马公司DiamonsilC18(5um 250X4. 6mm)流速lml/s，柱温35°C ；此条件下样品中槲皮素、异鼠李素、山柰素能与其它组分达到基线分离，与相邻的 色谱峰分离度符合要求。理论塔板数按异鼠李素峰计算应不低于3000。4.供试品溶液的制备方法研究心达康制剂的主要成分为沙棘总黄酮，是由异鼠李素-3-芸香糖苷、异鼠李 素-3-鼠李糖苷、槲皮素-3-葡萄糖苷、山柰素-3-葡萄糖苷等多种黄酮苷类化合物组成， 所述成份较难直接测定，而其苷元主要为槲皮素、异鼠李素、山柰素，故采用加酸水解使黄 酮苷转化成黄酮苷元后进行含量测定。由于槲皮素、异鼠李素、山柰素均能溶解于甲醇，参照心达康胶囊质量标准中供试 品溶液的制备方法，以甲醇25ml为提取溶剂进行提取。取本品20片，除去包衣，精密称定， 研细，取适量(相当于总黄酮IOmg)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定 重量，超声处理(功率135W，频率59kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻， 滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇15ml，盐酸，置水浴中加 热回流，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0.45um)滤 过，取续滤液，即得。采用上述色谱条件，进行测定。4. 1提取时间研究20 (30或40)分钟。4. 2加酸量的研究加盐酸(1 — 2) 3 (5或7)ml。4. 3水解时间的考察水浴中加热回流20 (30或40)分钟。实验结果见表2。表2 结果通过试验比较，确定供试液制备方法为取本品20片，除去包衣，精密称 定，研细，取适量(相当于总黄酮10mg)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml， 称定重量，超声处理(功率135W，频率59kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失 的重量，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇15ml，盐酸 (1 — 2) 5ml，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻 度，摇勻，用微孔滤膜(0. 45um)滤过，取续滤液，即得。5.专属性试验用缺醋柳黄酮的心达康片阴性样品，按供试品处理方法处理后，进行测定，结果在 槲皮素、异鼠李素、山柰素峰的位置上无干扰。
6.标准曲线的制备精密称取槲皮素对照品20. 69mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇 勻，作为对照品贮备液。精密称取山柰素对照品3. 23mg，置IOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释 至刻度，摇勻，作为对照品贮备液。精密称取异鼠李素对照品8. 46mg，置25ml量瓶中，加甲 醇溶解并稀释至刻度，摇勻，作为对照品贮备液。分别精密量取槲皮素对照品贮备液10ml、 山柰素对照品贮备液1ml、异鼠李素对照品贮备液IOml于同一 50ml量瓶中，用甲醇稀释 至刻度，摇勻，作为混合对照品溶液。再分别精密量取混合对照品溶液l、2、4、6、8、10ml于 IOml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，吸取IOul进样。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐 标绘制标准曲线。计算回归方程。槲皮素回归方程:A= 4636757. 285C-18655. 16986 (r2 = 0. 999989135)山柰素回归方程:A = 4025498. 961C-4063. 736986 (r2 = 0. 999377663)异鼠李素回归方程:A= 4551361C-22470. 2(r2 = 0. 999995)结果表明在上述色谱条件下，槲皮素在0.08276-0. 8276ug之间，样品进样量与 峰面积线性关系良好，山柰素在0. 00646-0. 0646ug之间，样品进样量与峰面积线性关系良 好，异鼠李素在0. 06768-0. 6768ug之间，样品进样量与峰面积线性关系良好。7.精密度试验7. 1仪器精密度精密吸取槲皮素、山柰素、异鼠李素混合对照品溶液各10ul，在上 述色谱条件下重复进样5次。结果见表3。表3仪器精密度试验 7. 2重复性试验平行取同批心达康片样品6份，按“含量测定”项下供试液制备方法试验，采用上 述色谱条件，测定槲皮素、山柰素、异鼠李素含量。结果见表4。表4重复性试验结果 以上结果表明槲皮素，山奈素，异鼠李素含量具有较好的重现性8、准确度(加样回收率试验)精密量取槲皮素对照品溶液(浓度0. 9348mg/ml) 3ml、山柰酚对照品溶液(浓度 0. 2196mg/ml) 1ml、异鼠李素对照品溶液(浓度0. 54mg/ml) 3ml，共6份，分别置6个具塞锥 形瓶中，水浴上蒸干溶剂，备用。取已知含槲皮素19.07mg/g、山柰素1.40mg/g、异鼠李素 11. 60mg/g的样品，精密称定，置上述具塞锥形瓶中，按拟定测定槲皮素、山柰素、异鼠李素 总量方法进行加样回收实验，结果见表5、表6、表7。表5槲皮素加样回收率试验结果 表6山柰素加样回收率试验结果 表7异鼠李素加样回收率试验结果 以上结果试验表明该方法具有较好的回收率，准确度好。9、耐用性实验9. 1稳定性试验取供试品溶液于制备后0、1、3、6、12、24小时后测定含量，其结果 见表8。表8稳定性试验结果 以上结果表明供试品在24小时内稳定性较好。9. 2流动相比例变化的试验取样品，按上述确定的供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，流动相分别 为①甲醇-0.4%磷酸(45 55))；②甲醇-0.4%磷酸(50 50)；③甲醇-0. 4%磷酸 (55 45)。在其他色谱条件不变，只改变流动相的情况下，对测定结果进行考察。按上述 色谱条件下进样测定，测定结果见表9。表9流动相比例变化的考察 根据以上测定结果，RSD为1. 3%，流动相比例的较小变化对测定结果无影响。9. 3不同品牌色谱柱的考察取同批样品，按上述确定的供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，色谱柱分 别 为(I)Kromasil. 200X4. 6mmID，5um ； (2)Dickma 250X4. mmID 5um ； (3)phenomemex 150X4. 6ID 5um。在流动相及其他色谱条件不变，只改变所使用的色谱柱，对测定结果进行考察。按上述色谱条件下进样测定，测定结果见表10。表10不同品牌色谱柱的考察 根据以上测定结果，RSD为1. 09%，不同品牌的色谱柱对测定结果无明显影响。根据以上的试验结果可知，该方法的耐用性较好。10、样品含量测定按拟定的心达康制剂槲皮素、山奈素、异鼠李素含量测定方法，对原长期留样的心 达康片和市售产品进行了含量测定，结果见表11、表12、表13。表11五批心达康片(规格5mg)含量测定结果 表12三批心达康片(规格10mg)含量测定结果 表13三批心达康片(规格5mg)含量测定结果 从以上结果可以看出，采用高效液相色谱法测定心达康片中槲皮素、山柰素、异鼠 李素总含量相当于其总黄酮标示量的81. 6% 98. 0%。考虑到本标准只是对已有产品进 行含量测定，因此暂以测得的最低数据为其限度标准。即采用高效液相色谱法测定心达康 片中槲皮素、山柰素、异鼠李素总量，应不低于标示量的80.0%。
具体实施例方式以下通过实施例进一步说明本发明，但并不作为对本发明的限制，本发明的质量 控制方法也可以用于以下其它心达康剂型药品的质量控制。实施例一所述片剂质量控制方法包括性状本品为糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后显棕黄色至棕色，味微苦。鉴别取本品1片，除去包衣，研细，加乙醇每5ml(5mg)或IOml (IOmg)，超声处理 5分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取槲皮素和异鼠李素对照品，加乙醇制成每Iml各含 Img的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典一部附录VIB)试验，吸取上 述两种溶液各1 2ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲 苯乙酸乙酯甲酸=5 4 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇溶 液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色 的荧光斑点。检查应符合片剂项下有关的各规定(中国药典一部附录ID)。含量测定(1)总黄酮对照品溶液的制备精密称取异鼠李素对照品，加无水乙醇制成每Iml含异鼠李 素20ug的溶液，即得。标准曲线的制备精密量取对照品溶液l、2、3、4、5、6ml，分别置IOml量瓶中，加 三氯化铝无水乙醇溶液1. 0ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，放置10分钟，以相应的试
剂为空白，照紫外_可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在430nm的波长处 测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法取本片剂20片，除去包衣，精密称定，研细，取0. lg，精密称定，置具塞锥 形瓶中，加无水乙醇适量，于800C水浴中加热回流15分钟，放冷，移置IOOml量瓶中，用无水
12乙醇稀释至刻度，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，置25ml量瓶中，用无水乙 醇稀释至刻度，摇勻，精密量取3ml，置IOml量瓶中，加1 %三氯化铝无水乙醇溶液1. Oml， 用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液；另取未加显色剂的同样量供试品溶液作空 白，照标准曲线制备项下的方法，自“放置10分钟”起，依法测定吸光度，从标准曲线中读出 供试品中异鼠李素的重量(ug)，计算，即得。本片剂每片含醋柳黄酮以异鼠李素(C16H12O7)计，应为标示量的90. 0 % 110. 0%。本片剂每片含总黄酮(以异鼠李素计)①5mg、②10mg。(2)槲皮素、异鼠李素、山柰素照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录 VID)测定色谱柱为C18柱，流速为lml/s，柱温为35°C，以甲醇0. 4%磷酸=50 50为流 动相；检测波长为370nm ；理论塔板数按异鼠李素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取以P2O5为干燥剂减压干燥12小时以上异鼠李素、山 柰素、120°C干燥4小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每Iml分别含异鼠李素20ug、山柰 素2ug、槲皮素25ug的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取适量(相当于总黄 酮IOmg)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率135W， 频率59kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，弃去初滤液， 精密量取续滤液5ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇15ml，盐酸(1 — 2) 5ml，置水浴中加热回流 30分钟，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0.45um)滤 过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定， 即得。本片剂每片含槲皮素(C15HltlO7)、异鼠李素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的总量不少 于总黄酮标示量的80.0% ；功能与主治补益心气，化瘀通脉，消痰运脾。用于心气虚弱，心脉瘀阻，痰湿困脾 所致心慌、心悸、心痛，气短胸闷，血脉不畅，咳累等症。用法与用量口服，一次10mg，一日3次，三个月为一疗程。规格每片含总黄酮(以异鼠李素计)①5mg②IOmg贮臧密封，置干燥处。实施例二 所述胶囊剂质量控制方法包括性状内容物为浅黄褐色至灰褐色的颗粒及粉末；气微，味微苦。鉴别取本胶囊剂内容物5mg或10mg，加乙醇5ml或10ml，超声处理5分钟，制成 lmg/ml的溶液，滤过，滤液作为供试品溶液；另取槲皮素和异鼠李素对照品，加乙醇制成每 Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱 法试验，吸取上述两种溶液各1 2ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=5 4 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3% 三氯化铝乙醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的荧光斑点。
检查应符合胶囊剂项下有关规定(中国药典2005年版一部附录IL)。。含量测定(1)总黄酮对照品溶液的制备精密称取异鼠李素对照品，加无水乙醇制成每Iml含异鼠李 素20ug的溶液，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液l、2、3、4、5、6ml，分别置IOml量瓶中，加 3%三氯化铝无水乙醇溶液1. 0ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，放置10分钟，以相应的试 剂为空白，照紫外_可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在430nm的波长处 测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法取本胶囊剂10 20粒内容物，精密称定，研细，混勻，取0. lg，精密称定， 置具塞锥形瓶中，加无水乙醇适量，于80°C水浴中加热回流15分钟，放冷，移置IOOml量瓶 中，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，置25ml量瓶 中，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，精密量取3ml，置IOml量瓶中，加3%三氯化铝无水乙醇 溶液1.0ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液；另取未加显色剂的同样量供 试品溶液作空白，照标准曲线制备项下的方法，自“放置10分钟”起，依法测定吸光度，从标 准曲线中读出供试品中异鼠李素的重量(ug)，计算，即得；本胶囊剂含醋柳黄酮以异鼠李素(C16H12O7)计，应为标示量的90. 0% 110. 0%。本胶囊剂每粒含黄酮(以异鼠李素计)①5mg、②10mg。(2)槲皮素、异鼠李素、山柰素照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录 VID)测定。色谱柱为C18柱，流速为lml/s，柱温为35°C，以甲醇0. 4%磷酸=50 50为流 动相；检测波长为370nm。理论塔板数按异鼠李素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取以P2O5为干燥剂减压干燥12小时以上异鼠李素、山 柰素、120°C干燥4小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每Iml分别含异鼠李素20ug、山柰 素2ug、槲皮素25ug的混合溶液，即得；供试品溶液的制备取总黄酮含量测定项下内容物适量(相当于总黄酮IOmg)， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率135W，频率 59kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量 取续滤液5ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇15ml，盐酸(1 — 2) 5ml，置水浴中加热回流30分钟， 迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0.45um)滤过，取续 滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本胶囊剂每粒含槲皮素(C15HltlO7)、异鼠李素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的总量不 少于总黄酮标示量的80. 0%。实施例三本软胶囊剂质量控制方法包括性状内容物为含有少量悬浮固体浸膏的黄色油状液体；气微，味微苦。鉴别取本胶囊剂内容物5mg或10mg，加乙醇5ml或10ml，超声处理5分钟，制成 lmg/ml的溶液，滤过，滤液作为供试品溶液；另取槲皮素和异鼠李素对照品，加乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱 法试验，吸取上述两种溶液各1 2ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=5 4 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3% 三氯化铝乙醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的荧光斑点。检查应符合胶囊剂项下有关规定(中国药典2005年版一部附录IL)。含量测定(1)总黄酮对照品溶液的制备精密称取异鼠李素对照品，加无水乙醇制成每Iml含异鼠李 素20ug的溶液，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液l、2、3、4、5、6ml，分别置IOml量瓶中，加 3%三氯化铝无水乙醇溶液1. 0ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，放置10分钟，以相应的试 剂为空白，照紫外_可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在430nm的波长处 测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法取本制剂10 20粒内容物，精密称定，混勻，取0. lg，精密称定，置具塞 锥形瓶中，加无水乙醇适量，于800C水浴中加热回流15分钟，放冷，移置IOOml量瓶中，用无 水乙醇稀释至刻度，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，置25ml量瓶中，用无水 乙醇稀释至刻度，摇勻，精密量取3ml，置IOml量瓶中，加3 %三氯化铝无水乙醇溶液1. Oml， 用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液；另取未加显色剂的同样量供试品溶液作空 白，照标准曲线制备项下的方法，自“放置10分钟”起，依法测定吸光度，从标准曲线中读出 供试品中异鼠李素的重量(ug)，计算，即得；本软胶囊剂含醋柳黄酮以异鼠李素(C16H12O7)计，应为标示量的90. 0 % 110. 0%。本软胶囊剂每粒含黄酮(以异鼠李素计)①5mg、②10mg。(2)槲皮素、异鼠李素、山柰素照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录 VID)测定。色谱柱为C18柱，流速为lml/s，柱温为35°C，以甲醇0. 4%磷酸=50 50为流 动相；检测波长为370nm ；理论塔板数按异鼠李素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取以P2O5为干燥剂减压干燥12小时以上异鼠李素、山 柰素、120°C干燥4小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每Iml分别含异鼠李素20ug、山柰 素2ug、槲皮素25ug的混合溶液，即得；供试品溶液的制备取总黄酮测定项下内容物适量(相当于总黄酮IOmg)，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率135W，频率59kHz) 30 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液 5ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇15ml，盐酸(1 — 2) 5ml，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷 却，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0. 45um)滤过，取续滤液，即 得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定， 即得。
本软胶囊剂每粒含槲皮素(C15HltlO7)、异鼠李素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的总量 不少于总黄酮标示量的80. 0%。实施例四本滴丸剂质量控制方法包括性状内容物为浅黄褐色至灰褐色的颗粒及粉末；气微，味微苦。鉴别取本滴丸剂内容物5mg或10mg，加乙醇5ml或10ml，超声处理5分钟，制成 lmg/ml的溶液，滤过，滤液作为供试品溶液；另取槲皮素和异鼠李素对照品，加乙醇制成每 Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱 法试验，吸取上述两种溶液各1 2ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=5:4: 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
三氯化铝乙醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的荧光斑点。检查应符合滴丸剂项下有关规定(中国药典2005年版一部附录IK)。含量测定(1)总黄酮对照品溶液的制备精密称取异鼠李素对照品，加无水乙醇制成每Iml含异鼠李 素20ug的溶液，即得；标准曲线的制备精密量取对照品溶液l、2、3、4、5、6ml，分别置IOml量瓶中，加 三氯化铝无水乙醇溶液1. 0ml，用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，放置10分钟，以相应的试
剂为空白，照紫外_可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在430nm的波长处 测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法本制剂10 20粒内容物，精密称定，混勻，取0. lg，精密称定，置具塞锥 形瓶中，加无水乙醇适量，于80 V水浴中加热回流15分钟，放冷，移置IOOml量瓶中，用无水 乙醇稀释至刻度，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml，置25ml量瓶中，用无水乙 醇稀释至刻度，摇勻，精密量取3ml，置IOml量瓶中，加三氯化铝无水乙醇溶液1.0ml， 用无水乙醇稀释至刻度，摇勻，作为供试品溶液；另取未加显色剂的同样量供试品溶液作空 白，照标准曲线制备项下的方法，自“放置10分钟”起，依法测定吸光度，从标准曲线中读出 供试品中异鼠李素的重量(ug)，计算，即得；本滴丸剂含醋柳黄酮以异鼠李素(C16H12O7)计，应为标示量的90. 0% 110. 0%。本滴丸每丸含黄酮(以异鼠李素计)①5mg、②10mg。(2)槲皮素、异鼠李素、山柰素照高效液相色谱法(中国药典一部附录VID)测定。色谱柱为C18柱，流速为lml/s，柱温为35°C，以甲醇0. 4%磷酸=50 50为流 动相；检测波长为370nm。理论塔板数按异鼠李素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取以P2O5为干燥剂减压干燥12小时以上异鼠李素、山 柰素、120°C干燥4小时的槲皮素对照品适量，加甲醇制成每Iml分别含异鼠李素20ug、山柰 素2ug、槲皮素25ug的混合溶液，即得；供试品溶液的制备取总黄酮测定项下的内容物适量(相当于总黄酮IOmg)，精密 称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率135W，频率59kHz) 30 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液 5ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇15ml，盐酸(1 — 2) 5ml，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0. 45um)滤过，取续滤液，即得。 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即 得。本滴丸剂每丸含槲皮素(C15HltlO7)、异鼠李素(C16H12O7)、山柰素(C15HltlO6)的总量不少于 总黄酮标示量的80.0%。
权利要求
一种心达康制剂的鉴别方法，所述制剂包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂，其特征在于所述鉴别包括以槲皮素对照品、异鼠李素对照品为对照鉴别制剂中黄酮苷元的薄层色谱鉴别，鉴别方法是以槲皮素对照品和异鼠李素对照品为对照，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸＝2～10∶1～8∶0.1～1.5的溶液为展开剂的薄层色谱鉴别法。
2.根据权利要求1所述心达康制剂的鉴别方法，其特征在于所述鉴别方法包括以下取本制剂或其内容物，研细，加乙醇使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取槲皮素和异鼠李素对照品，加乙醇制成混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸 取上述供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸 =2 10 1 8 0.1 1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1 5%三氯化铝乙醇溶 液，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光 斑点。
3.根据权利要求2所述心达康制剂的鉴别方法，其特征在于更具体的鉴别方法包括 以下取本制剂或其内容物，研细，取细粉2 20mg，加无水乙醇2 20ml，超声处理1 15 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取槲皮素和异鼠李素对照品，加无水乙醇制成每Iml 各含Img IOmg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法试验， 吸取上述两种溶液各1 20ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板 上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=2 10 1 8 0.1 1.5为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以1 5%的三氯化铝乙醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品 色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.根据权利要求3所述心达康制剂的鉴别方法，其特征在于更进一步具体的鉴别方 法包括以下取本制剂1片或1粒，研细，加乙醇5ml或10ml，超声处理5分钟，制成lmg/ml的溶液， 滤过，滤液作为供试品溶液；另取槲皮素和异鼠李素对照品，加乙醇制成每Iml各含Img的 混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液 各1 2ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯乙酸乙 酯甲酸=5 4 0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1 3%三氯化铝乙醇溶液，置 365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光 斑点。
全文摘要
本发明是申请号为200610022691.0的发明专利申请的分案。是涉及一种心达康制剂的鉴别方法，所述鉴别方法包括对制剂中槲皮素、异鼠李素的薄层色谱鉴别。与现有技术相比，本发明增加了槲皮素、异鼠李素的薄层色谱鉴别，所采用的方法专属性强、精密度高，重现性好，回收率高，提高了原心达康制剂的质量标准，从而保证了该制剂的临床疗效。
文档编号G01N30/90GK101879198SQ20101014581
公开日2010年11月10日 申请日期2006年12月29日 优先权日2006年12月29日
发明者周娟, 朱林波, 李彦, 秦方云 申请人:四川美大康药业股份有限公司