专利名称：一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药的含量测定方法
技术领域：
本发明属于中药分析领域，涉及一种中成药的含量测定方法，具体涉及对一种由青蒿、金银花、桅子制成的中成药进行含量测定的方法。
背景技术：
本发明涉及的中成药的原药材组成为青蒿6 25重量份、金银花3 15重量份、桅子3 12重量份。本中成药功能主治为清热，疏风，解毒，用于上呼吸道感染(外感风热证)所致的高热、微恶风寒、头身痛、咳嗽、痰黄等症。该中成药已获得中国国家食品药品监督管理局批准上市销售，药品的通用名称为热毒宁注射液，药品批准文号为国药准字 Z20050217。由于该药物抗病毒、抗菌退热疗效显著，作用迅速，在临床上已逐渐得到了广大医生和患者的欢迎。现有技术中，在公开号为CN 1517124A，申请号为200410000134. X的中国专利中， 公开了一种对本中成药(在本发明中被命名为“热毒宁注射液”)中桅子苷和绿原酸进行含量测定的方法，但该方法对热毒宁注射液中主要成分含量的检测不够全面，本发明提供技术方案是在热毒宁注射液基础成分研究和现有含量测定方法的基础上，按照《中药注射液基本技术要求》及中药注射液再评价的相关规定，对其高效液相色谱指纹图谱及含量测定方法进行进一步优化，将高效液相色谱指纹图谱和已明确的9个成分含量测定相结合，建立更为全面的质量控制方法，以更为有效快捷的控制热毒宁注射液的产品内在质量，提高质量控制水平。
发明内容
本发明的目的是提供一种对由青蒿、金银花、桅子制成的中成药(在本发明中被命名为“热毒宁注射液”)进行含量测定的方法。本发明是通过以下技术方案来实现本发明目的的采用反相高效液相色谱法对热毒宁注射液中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、桅子苷、secoxyloganin (断氧化马钱子苷)、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C九种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定，测定的色谱条件为色谱柱为C18色谱柱，以甲醇或乙腈为流动相A，以0. 05% 1.0%磷酸或0. 05% 1.0%醋酸为流动相B，A+B = 100%，进行梯度洗脱，洗脱程序为以下三种程序中的任意一种(1)起始时，流动相A的百分比浓度为8 20%，流动相B的百分比浓度为92 80%，0至20min内，流动相A的百分比浓度线性上升至25 35%，流动相B的百分比浓度线性下降至75 65 %，21至60min内，流动相A的百分比浓度线性上升至45 55 %，流动相B的百分比浓度线性下降至55 45% ；艮口
权利要求
1.一种由青蒿、金银花、桅子制成的中成药的含量测定方法，其特征在于，采用反相高效液相色谱法对该药物中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、桅子苷、secoxyloganin, 异绿原酸B、异绿原酸Α、异绿原酸C九种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定， 测定的色谱条件为色谱柱为C18柱，以甲醇或乙腈为流动相A，以0. 05% 1. 0%磷酸或 0. 05% 1.0%醋酸为流动相B，A+B = 100%，进行梯度洗脱，洗脱程序为以下三种程序中的任意一种(1)起始时，流动相A的百分比浓度为8 20%，流动相B的百分比浓度为92 80%， 0至20min内，流动相A的百分比浓度线性上升至25 35%，流动相B的百分比浓度线性下降至75 65 %，21至60min内，流动相A的百分比浓度线性上升至45 55 %，流动相B 的百分比浓度线性下降至55 45% ；(2)起始时，流动相A的百分比浓度为15 25%，流动相B的百分比浓度为85 75%， 0至50min内，流动相A的百分比浓度线性上升至45 55%，流动相B的百分比浓度线性下降至55 45%，51至60min内，流动相A的百分比浓度线性上升至56 65%，流动相B 的百分比浓度线性下降至44 35% ；(3)起始时，流动相A的百分比浓度为10 22%，流动相B的百分比浓度为90 78%， 0至30min内，流动相A的百分比浓度线性上升至23 30%，流动相B的百分比浓度线性下降至70 77 %，31至60min内，流动相A的百分比浓度线性上升至55 65 %，流动相B 的百分比浓度线性下降至45 35%，61至70min内，流动相A的百分比浓度保持在55 65 %，流动相B的百分比浓度保持在45 35 %。
2.根据权利要求1所述的洗脱程序，其特征在于，选择以下三种程序中的任意一种(1)起始时，流动相A的百分比浓度为12%，流动相B的百分比浓度为88%，0至20min 内，流动相A的百分比浓度线性上升至30%，流动相B的百分比浓度线性下降至70%，21至 60min内，流动相A的百分比浓度从30 %线性上升至50%，流动相B的百分比浓度从70 % 线性下降至50% ；(2)起始时，流动相A的百分比浓度为20%，流动相B的百分比浓度为80%，0至50min 内，流动相A的百分比浓度线性上升至50%，流动相B的百分比浓度线性下降至50%，51至 60min内，流动相A的百分比浓度从50%线性上升至60%，流动相B的百分比浓度从50% 线性下降至40% ；(3)起始时，流动相A的百分比浓度为20%，流动相B的百分比浓度为80 %，0至30min 内，流动相A的百分比浓度线性上升至25%，流动相B的百分比浓度线性下降至75%，31至 60min内，流动相A的百分比浓度从25%线性上升至60%，流动相B的百分比浓度从75% 线性下降至40%，61至70min内，流动相A的百分比浓度保持在60%，流动相B的百分比浓度保持在40%。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C七种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，测定波长为320 330nm。
4.根据权利要求3所述的测定波长，其特征在于，波长为3Mnm。
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对桅子苷、secoxyloganin两种成分中的任意一种或两种成分进行含量测定时，检测波长为230 MOnm。
6.根据权利要求5所述的测定波长，其特征在于，波长为237nm。
7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对照品溶液的制备方法为精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、桅子苷、secoxyloganin、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C对照品，加入40% 60%甲醇溶解并稀释制成混合对照品储备溶液。
8.根据权利要求7所述的混合对照品储备溶液，其特征在于，制备方法为精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、桅子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、 secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶解并稀释制成每Iml中含新绿原酸 0. 1 0. 4mg、绿原酸0. 5 1. 2mg、隐绿原酸0. 2 0. 7mg、桅子苷0. 5 1. 5mg、咖啡酸 0. 1 O.^ig、异绿原酸B 0. 2 0.8mg、异绿原酸A 0. 1 0. 6mg、异绿原酸C 0. 2 0. 9mg、 secoxyloganin 0. 1 0. 4mg的混合对照品储备溶液。
9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为精密称取待测药物置量瓶中，加40% 60%甲醇稀释，摇勻，即得。
10.根据权利要求9所述的供试品溶液的制备方法，其特征在于，精密吸取待测药物 lml，置IOml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得。
11.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、桅子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为精密称取待测药物置量瓶中，加40% 60%甲醇稀释，摇勻，即得。
12.根据权利要求11所述的供试品溶液的制备方法，其特征在于，精密吸取待测药物 lml，置100ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得。
13.根据权利要求1、7、8所述的测定方法，其特征在于，标准曲线的制作方法为精密吸取3 8份不同的剂量的混合对照品储备溶液，分别置容量瓶中，加40% 60%甲醇稀释，制成不同浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
14.根据权利要求13所述的标准曲线的制作方法，其特征在于，精密吸取6份不同剂量的混合对照品储备溶液，分别为0. 25ml,0. 5ml、l. 0ml,2. 0ml,4. 0ml,10. 0ml,分别置10ml 容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
15.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，取供试品溶液1 20μ 1，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
16.根据权利要求15所述的供试品溶液的进样量，其特征在于，进样量为10μ 1。
全文摘要
本发明属于中药分析领域，具体涉及一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药的含量测定方法。该方法采用反相高效液相色谱法对该中成药中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、secoxyloganin、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C九种成分进行含量测定，色谱条件为色谱柱为C18柱，以甲醇或乙腈为流动相A，以0.05％～1.0％磷酸或0.05％～1.0％醋酸为流动相B，A+B＝100％，进行梯度洗脱。该含量测定方法重现性良好，该方法分别从定性定量的角度全面的反映药物主要成分及其含量变化情况，提高了对药物的质量控制水平。
文档编号G01N30/02GK102233021SQ201010173578
公开日2011年11月9日 申请日期2010年4月30日 优先权日2010年4月30日
发明者付小环, 刘涛, 宋爱华, 毕宇安, 王振中, 章晨峰, 萧伟, 陈凤龙 申请人:江苏康缘药业股份有限公司