专利名称：一种白芷提取物及质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种白芷提取物及质量检测方法，属药物领域。
背景技术：
白芷始载于《神农本草经》，为常用的解表、止痛药。白芷为白芷商品药材的 主流品种，约占全国商品白芷产量的70%。目前报道利用白芷的文献较多，如申请号 200710111315. 3，发明名称白芷总香豆素提取物及其制备方法，该发明公开了一种从中药 白芷中提取得到的总香豆素提取物及其制备方法。该提取物包括的选择性基本成分为欧前 胡素、异欧前胡素、5-羟基-8-甲氧基补骨脂内酯、佛手柑内酯，或其任何一种或数种的组 合。该提取物还包括白芷素、水合氧化前胡素、异氧化前胡素、5-甲氧基-8-羟基补骨脂内 酯、花椒毒酚等成分中的任何一种或数种的组合。该提取物可由溶剂提取法、溶剂萃取法、 大孔吸附树脂法、铅盐沉淀法、柱色谱法、液-液逆流分配色谱法等任意一种方法，或这些 方法的任意组合制备获得。所制得的白芷总香豆素提取物中各种香豆素类成分百分含量的 总和为5 100% (w/w)，其中欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯三种成分的含量占全部总 香豆素含量的5 100% (w/w)。白芷的产地加工方法对白芷质量影响较大，目前主要采用硫磺烟熏法，但是，大量 实验证实熏硫后其香豆素及挥发油类成分大大降低，白芷的药效不稳定，因此控制白芷药 材质量至关紧要。关于白芷质量控制方法的报道有《中国药典》2000年版对白芷药材的 质量控制只限于原植物品种、药材性状和简单的理化鉴别，缺乏一套行之有效的内在质量 控制方法和量化指标。高颖，等，白芷中欧前胡素含量测定方法的比较，成都中医药大学学 报，2006年12月第四卷第4期，公开了另一种欧前胡素含量测定方法，其中，以甲醇水 (70 30)为流动相、流速lml/min、柱温25°C、检测波长300nm，理论板数按欧前胡素峰计 算不低于3000。该方法可同时测定三种主要香豆素类成分的含量。钟世红，等，白芷HPLC 指纹图谱研究，世界科学技术一中医药现代化标准与规范，2005，第七卷第六期。对样品进 行HPLC测定，采用主成分分析、聚类分析及相似度评价等多种方法进行评价，并对白芷规 范化种植中不同试验项目样品进行了指纹图谱的比较。结果熏硫和未熏硫样品的指纹图 谱存在较大差异，分别建立了熏硫和未熏硫白芷药材的指纹图谱。目前报道的上述定量或 定性的方法还不能有效的控制白芷的质量。
发明内容
本发明的技术方案是提供了 一种白芷提取物，本发明的另一技术方案是提供了白 芷药材及白芷提取物的质量检测方法。本发明提供了一种白芷提取物，它含有氧化前胡素9. 50-14. 24mg/go它还含有欧 前胡素 5. 52-8. 28mg/go本发明白芷提取物是白芷药材的水或有机溶剂提取物。它是由下述方法制备而 成取白芷药材粗粉，加50-95%乙醇提取；提取液经60-70°C减压浓缩干燥，即得白芷提取物。其中，所述的乙醇提取方法是渗漉法或超声提取法。所述的白芷提取物的HPLC指纹图谱如图2所示，色谱条件为色谱柱 DiamonsiItmC18 HPLC色谱柱Q50X4. 6mm，5 μ m)；流动相甲醇-四氢呋喃-水 (56 9 35)；流速1. Oml/min ；柱温:30°C ；进样量:10μ 1 ；检测波长:305nm ；理论板数 以氧化前胡素、欧前胡素计应不低于4000。本发明所述的白芷或白芷提取物，是指未经熏硫的白芷，其中，白芷为伞形科当归 属植物白 ￡ Angelica dahurica (Fisch. Ex Hoffm.)或杭白 Angelica dahurica (Fisch. Ex Hoffm. )Benth. et Hook. f. var. formosana(Boiss. )Shan et Yuan 的根。本发明还提供了一种药物组合物，它是以含有所述的白芷提取物为活性成分，加 上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。其中，所述的药剂是胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液、软胶囊剂或滴丸剂。本发明提供了一种检测白芷药材、白芷提取物或含有白芷提取物的药物组合物的 质量的方法，其特征在于它同时以氧化前胡素、欧前胡素为指标成分进行质量控制，它包 括如下步骤a、通过高效液相色谱法测定，紫外检测波长为305nm ；b、取氧化前胡素、欧前胡素对照品，加甲醇制成对照品溶液；C、供试品溶液制备取白芷药材、提取物或制剂，加甲醇，功率300W，频率50kHz的 超声提取0. 5-1. 5小时，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得；d、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，测定，即得。其中，a步骤所述的色谱条件为色谱柱=Diamonsir C18HPLC色谱柱 O50X4.6mm，5ym)；流动相甲醇-四氢呋喃-水(56 9 35)；流速1. Oml/min ；柱 温30°C ；进样量10μ 1 ；检测波长305nm ；理论板数以氧化前胡素、欧前胡素计应不低于 4000。所述的白芷药材中含有氧化前胡素0. 12-0. 23% w/w、欧前胡素0. 11-0. 22% Wi本发明通过同时检测氧化前胡素、欧前胡素的含量，可有效的控制了白芷药材及 提取物的质量，本发明白芷药材的质量控制方法可用于监测药材的质量，用于检测、分辨熏 硫和未熏硫白芷，能够有效地监控白芷药品的质量，本发明药物的药效明确，可控性更强。
图1本发明白芷提取工艺流程2供试品溶液色谱图(流动相为甲醇水65 35)图3对照品色谱图(6. OOmin为氧化前胡素、8. 42min为欧前胡素)图4供试品溶液色谱图(原料药未熏硫，批号091001)图5供试品色谱图(原料药熏硫，批号091011)图6氧化前胡素标准曲线7欧前胡素标准曲线8氧化前胡素对照品色谱9氧化前胡素对照品吸收曲线图10欧前胡素对照品吸收曲线
图11供试品溶液色谱图(流动相为甲醇-水70 30)图12供试品溶液色谱图(未熏硫白芷)图13供试品溶液色谱图(熏硫白芷)图14欧前胡素对照品色谱15供试品溶液60min色谱图
具体实施例方式实施例1白芷提取物的制备方法白芷药材打成粗粉，50%乙醇溶液浸泡24h后以2. 5ml/min -kg的速度渗漉，收集 6倍量的药液，在60 70°C的温度下进行减压浓缩成型，干燥，得本发明白芷提取物。实施例2本发明白芷提取物的制备白芷药材粗粉加12倍量的70%乙醇，功率80W，55°C温度下超声提取50min，提取 3次，浓缩方法同实施例1，干燥即得本发明白芷提取物。实施例3本发明白芷提取物的制备取白芷药材，按实施例1方法进行提取、浓缩，所得的药液，进行喷雾干燥。喷雾干燥的条件为进液物料温度70 80 °C ；浸膏相对密度1. 08 1. 10 (600C )；进液速度60 70ml/min ；进风温度138 140°C;出风温度83 85°C。得 白芷提取物。实施例4本发明药物的制备按照实施例3的方法制备，在进行喷雾干燥时，加入40%干膏重量的糊精，得颗粒 剂。实施例5本发明药物的制备取实施例1制备得到的白芷提取物，加入药学上可接受的辅料，制备得到片剂。实施例6本发明药物的制备取实施例1减压浓缩得到的药液，除杂后，加入药学上可接受的辅料，制备得到口 服液。实施例1-6对本发明白芷提取物及药物的制备方法，不应理解为是对本发明保护 范围的限制，凡基于上述技术思想，利用本领域普通技术知识和惯用手段所做的修改、替 换、变更均属于本发明的范围。实施例7本发明白芷提取物提取工艺参数筛选试验一、建立了指标考察方法白芷中香豆素类成分为其主要活性成分，现代药理实验表明白芷中所含的呋喃香 豆素具有解热镇痛、抗炎、平喘、降压、抗菌、解痉、光敏、活化交感系激素等多种药理作用。 此外，欧前胡素为其主要有效成分之一。故确定以总香豆素、欧前胡素为化学指标。为兼顾 成型，以干膏率作为工艺研究的参考指标。1.干膏率的测定分别精密移取各提取液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，残渣 于烘箱中105°C干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，精密称定重量，计算干膏率(％ )。2.总香豆素含量的测定
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以欧前胡素为对照品，采用分光光度法在300nm处测定。标准曲线为A = 48. 998C-0. 0012，(R2 = 0. 9999，η = 6)在 5. 15 18. 025 μ g/ml 范围内线性关系良好；方 法精密度RSD = 0. 16% ；方法稳定性样品供试液在他内稳定，RSD = 2. 19%。方法回收 率为 98. 25%, RSD = 1. 70%。3.欧前胡素含量的测定采用高效液相色谱法测定。色谱条件用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇水 (70 30)为流动相；检测波长为300匪。柱温:30°C，流速为1. Oml/min，进样量=IOyL0标准曲线为=Y = 7Ε+06Χ+21286，R = 0. 9999，在103 927 μ g范围内线性关系良 好；方法精密度RSD = 2. 12% ；方法稳定性样品供试溶液在120h内稳定，RSD = 2. 35% ； 方法回收率为98. 68%, RSD = 1. 96%。二、本发明白芷提取物制备工艺研究1.提取工艺考察预实验中对白芷渗漉法提取工艺进行了正交设计实验考察，结果显示无统计学意 义，分析原因是由于装筒过程中如装筒的松紧度、新鲜药液的加入量、棉花的厚薄等不确定 因素造成的，最终选择单因素考察。(1)提取溶媒考察称取IOOg白芷粗粉两份，分别用水和95%乙醇进行提取，提取液浓缩并定容至一 定体积，按含量测定方法计算水提液和醇提液中总香豆素及欧前胡素的含量。表1提取溶 媒的考察结果
提取溶媒香豆素(mg/g)欧前胡素(mg/g)水2.03160.015895%乙醇7.09621.0614(2)药材粒度的考察称取白芷药材最粗粉、粗粉、中粉各3份，每份100g，以50%的乙醇溶胀1小时后， 装筒，浸渍4小时后，以0. 25ml/min的速度渗漉提取，收集渗漉液600ml取样，分别测定香 豆素、欧前胡素、干膏率，结果见表2 :表2药材粒度的考察结果
药材粒径总香豆素(mg/g)欧前胡素(mg/g)干膏率(％)最粗粉10.15411.348815.14粗粉11.25601.445315.17中粉9.81171.433015.08结果表明药材以粗粉渗漉的效果最好，药粉过粗，有效成分不容易浸出，药材粉 碎得太细，药液不易流出，放大实验中往往发生堵塞现象。由此确定了以粗粉为最佳粉碎粒度。(3)不同提取方法提取结果比较取白芷粗粉3份，每份约100g，称定，一份以50%乙醇溶胀1小时后浸泡4小时， 以0. 25ml/min的速度渗漉提取，收集渗漉液至600ml ；—份用50%的乙醇回流提取3次，每次600ml，1小时；另一份以6倍量50%乙醇室温超声提取30min，2次，各收集6倍量药液。表3提取方法的考察结果
提取方法总香豆素(mg/g)欧前胡素(mg/g)干膏率(％)渗漉法10.44151.235615.98回流提取法9.95061.061714.20超声法7.65350.953411.53由表可知渗漉法对指标成分的提取效果优于其它提取方法，而且故选择渗漉法 进行提取。综合以上考察结果，确定以乙醇渗漉提取的工艺路线。(4)溶媒浓度的考察称取白芷药材最粗粉5份，每份100g，分别以不同浓度的乙醇溶胀1小时后，装筒， 浸渍4小时后，以0. 25ml/min的速度渗漉，收集渗漉液至600ml。表4溶媒浓度的考察结果
乙醇浓度总香豆素(mg/g)欧前胡素(mg/g)_干膏率(％)
50%10.77921.1854 14.77
65%9.48601.0871 11.86
75%8.75321.0493 8.65
85%6.45310.8045 7.74
95%5.96590.8027 6.33结果表明50^^65^^75%乙醇对总香豆素的提取效果相当，干膏率依次减小，但 是随着醇浓度的降低，提取的杂质就越多。后期通过对50%和70%乙醇的比较，结合成本 考虑，暂定50%乙醇渗漉。(5)渗漉速度的考察称取白芷药材最粗粉4份，每份100g，以50%的乙醇溶胀1小时后，装筒，浸渍4 小时后，分别以0. 25ml/min，0. 5ml/min, 1. 0ml/min，2. Oml/min的速度渗漉提取(鉴于中试 放大实验节约时间的考虑)，收集渗漉液600ml。表5渗漉速度的考察结果
渗漉速度(ml/min)总香豆素(mg/g)欧前胡素(mg/g)干膏率(％)0.2510.45801.087111.86%0.59.47861.061210.49%1.08.67971.00687.92%2.08.44610.98167.06%结果表明0. 25ml/min的渗漉速度提取效果优于其它渗速。故确定IOOg药材的 渗漉速度为0. 25ml/min,即渗漉速度为2. 5ml/min · kg。(6)浸泡时间的考察称取白芷药材最粗粉4份，每份100g，以50%的乙醇溶胀1小时后，装筒，分别浸 泡4h、8h、12h、24h后，以0. 25ml/min的速度渗漉提取，收集渗漉液600ml。表6浸泡时间的考察结果
权利要求
1.一种白芷提取物，其特征在于它含有氧化前胡素9. 50-14. 24mg/go
2.根据权利要求1所述的白芷提取物，其特征在于它还含有欧前胡素5.52-8. 28mg/
3.根据权利要求1或2所述的白芷提取物，其特征在于它是白芷药材的水或有机溶 剂提取物。
4.根据权利要求3所述的白芷提取物，其特征在于它是由下述方法制备而成取白芷 药材粗粉，加50-95%乙醇提取；提取液经60-70°C减压浓缩干燥，即得白芷提取物。
5.根据权利要求4所述的白芷提取物，其特征在于所述的乙醇提取方法是渗漉法或 超声提取法。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的白芷提取物，其特征在于所述的白芷提取 物的HPLC指纹图谱如图2所示，色谱条件为色谱柱Aiamonsil C18 HPLC色谱柱 (250X4. 6mm，5ym)；流动相甲醇-四氢呋喃-水(56 9 35)；流速1. Oml/min ；柱 温30°C ；进样量10μ 1 ；检测波长305nm ；理论板数以氧化前胡素、欧前胡素计应不低于 4000。
7.—种药物组合物，它是以含有权利要求1-6任一项所述的白芷提取物为活性成分， 加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于所述的药剂是胶囊剂、片剂、颗粒 剂、丸剂、口服液、软胶囊剂或滴丸剂。
9.一种检测白芷药材、权利要求1所述的白芷提取物或含有白芷提取物的药物组合物 的质量的方法，其特征在于它同时以氧化前胡素、欧前胡素为指标成分进行质量控制，它 包括如下步骤a、通过高效液相色谱法测定，紫外检测波长为305nm；b、取氧化前胡素、欧前胡素对照品，制备成对照品溶液；c、供试品溶液制备取白芷药材、提取物或制剂，加甲醇，功率300W，频率50kHz的超声 提取0. 5-1. 5小时，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得；d、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，测定，即得。
10.根据权利要求9所述的质量检测方法，其特征在于a步骤所述的色谱条件为 色谱柱Diamonsil C18 HPLC色谱柱(250X4. 6讓，5 μ m)；流动相甲醇-四氢呋喃-水 (56 9 35)；流速1. Oml/min ；柱温:30°C ；进样量:10μ 1 ；检测波长:305nm ；理论板数 以氧化前胡素、欧前胡素计应不低于4000。
11.根据权利要求9或10所述的质量检测方法，其特征在于所述的白芷药材中氧化 前胡素的含量不得低于0. 12% w/w，欧前胡素的含量不得低于0. w/w。
12.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于所述的白芷药材中含有氧化前 胡素 0. 12-0. 23% w/w、欧前胡素 0. 11-0. 22% w/w。
全文摘要
本发明提供了一种白芷提取物，它含有氧化前胡素9.50-14.24mg/g。本发明还提供了一种药物组合物，它是以含有该白芷提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。本发明还提供了一种检测白芷药材、白芷提取物或含有白芷提取物的药物组合物的质量的方法，是以氧化前胡素为指标成分进行质量控制。本发明通过控制氧化前胡素、欧前胡素的含量，检测白芷药材及提取物的质量，且质量检测方法可用于监测药材的质量，检测、分辨熏硫和未熏硫白芷，能够有效地监控白芷药品的质量，本发明药物的药效明确，可控性更强。
文档编号G01N30/02GK102058641SQ20101062273
公开日2011年5月18日 申请日期2010年12月28日 优先权日2009年12月29日
发明者卢晓琳, 肖丹, 董自亮, 蒋桂华, 钟世红, 马逾英, 高颖 申请人:成都中医药大学