专利名称：一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法
技术领域：
本发明涉及一种测定还原糖浓度的方法，特别涉及一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法。
背景技术：
在食品原料特别是植物性原料中，糖类分布十分广泛。糖类是大多数食品的主要成分之一，是食品工业的主要原料和辅助原料。测定食品中还原糖的方法很多，常用的方法有物理法、化学法、比色法和色谱法等。化学法是应用的最为广泛的常规分析方法。在国家标准《GB/T 5009. 7-2008食品中还原糖的测定》中采用直接滴定法和高锰酸钾滴定法来测定还原糖的浓度，这两种方法都属于化学法，该方法操作复杂、繁琐，测定速度慢，试剂消耗量大，采用滴定的测试方法人为误差较大，尤其对于大批量样品的检测，不能及时地指导生产。二硝基水杨酸比色法，用于测定还原糖的浓度，由于该方法是在水浴后比色，测定时间长，而且水浴时间的长短对结果的影响很大，造成人为误差大，导致数据重复性差。现有技术(“用流动化学分析仪测定烟用香料中的还原糖”，彭军仓、张迎新、胡喜怀，《烟草科技》， 2003年第5期，总第190期，第M-25，42页)公开了一种用流动分析仪测定烟用香料中的还原糖的方法，它是根据在碱性环境中，香料中的还原糖的羟基被铜-新亚铜试剂还原为黄色的亚铜-新亚铜复合物的原理，在温度78°C和波长460nm处测定此种复合物的吸光度从而计算出香料中的含糖量。该方法使用的显色剂是新亚铜试剂，该试剂价格高，在大批量样品的测定过程中消耗大，成本高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法，克服现有测定方法中存在的测量速度慢，操作繁琐，人为误差大，价格昂贵等缺点。为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是这样的一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法，包括了以下步骤(1)配制浓度为1000、1500、2000、2500和3000mg/ L的葡萄糖标准溶液，使标准溶液与显色剂3，5- 二硝基水杨酸在流动化学分析仪中反应； (2)记录流动化学分析仪测出的标准溶液在540nm波长下的吸光值，将标准溶液的吸光值同其中还原糖的浓度绘制还原糖标准工作曲线，进行回归分析，得到还原糖回归方程；(3) 将待测样品溶液与显色剂混合加热，混合加热温度为95 99°C，在流动化学分析仪内反应，记录测得的吸光值。作为优选，所述的显色剂的配制步骤为将3，5- 二硝基水杨酸溶于NaOH溶液中，加入酒石酸钾钠溶液，混合均勻，加入结晶酚和亚硫酸钠，溶解定容。所述的待测样品为可溶性固体，配置待测样品溶液步骤为称取Ig固体样品溶于 IOOml水中，在冰浴中IOOOOrpm勻质5min，用滤纸过滤。所述的待测样品为液体，配置待测样品溶液步骤为吸取样品Iml用水定容至 100ml，混合均勻后用滤纸过滤。
用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法所测的还原糖的浓度范围在1000 3000mg/L。与现有技术相比，本发明的优点在于本发明采用3，5- 二硝基水杨酸作为显色剂并与流动化学分析仪结合来测定还原糖的浓度，试剂价格便宜，配制程序简单，实验过程温度和时间由仪器控制，精度高，重复性好，无人为误差，测定结果准确可靠适于批量产品快速准确检验。
图1为本发明用流动化学分析仪测定还原糖浓度的还原糖标准工作曲线图。
具体实施例方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，本发明进一步用以下具体实施例进行说明，但本发明绝非限于这些例子。实施例1 (用流动化学分析仪测定液体样品中还原糖浓度) 1、仪器、试剂
1. 1、仪器API公司生产的AAS系列流动化学分析仪(311型自动取样器、302D型泵系统、303A型反应系统、305D检测器、FASPac-II系列检测软件)。1.2、试剂葡萄糖、3，5-二硝基水杨酸、NaOH、酒石酸钾钠、结晶酚、亚硫酸钠、 Bri j、去离子水。2、仪器参数设定
进样时间60 s ；冲洗时间90 s ；系统稳定时间15 min ；测定波长:540 nm ；反应器温度96°C ；每隔10个样品做两次自动清洗和一次基线校正。取样器清洗液5-10滴Brij和IOOml去离子水混合，摇勻即得。3、制备标准溶液
准确称取5 g经过98 100°C干燥2 h的葡萄糖，用去离子水溶解后定容至500 mL, 即配成浓度为10，000 mg/L的葡萄糖标准储备液；再移取标准储备液各50、75、100、125和 150ml，用去离子水定容至500ml，即得到浓度分别为1000、1500、2000、2500和3000 mg/L的标准溶液。4、制备显色剂
将5g 3，5-二硝基水杨酸溶于200mL摩尔浓度为2mol/L的NaOH溶液中，接着加入 500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，混勻后加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，溶解后定容至 IOOOmL,暗处保藏。5、制备待测样品溶液
分别精确吸取待测麦汁样品1#、2#各1 mL用水定容至IOOmL,混勻后用滤纸过滤，滤液即可进行分析。6、样品测定
将取样器清洗液、显色剂、标准溶液和待测样品溶液分别倒入测定管并放在自动取样器的相应位置，设置反应池加热温度为96°C，待系统稳定后在波长MOnm下测定吸光值，并设定对1000 mg/L,2000 mg/L及待测样品1#、2#分别进行10次重复测定。
7、绘制还原糖标准工作曲线，得到还原糖浓度和吸光值的线性回归方程为 y=0. 0004180x+0. 2370，其中χ为还原糖浓度(mg/L)，变化范围为0-3000，y为吸光值，变化范围为0-7. 2。标准工作曲线参见附图1。8、方法精密度试验
对1000 mg/L和2000 mg/L的标准样品及待测样品1#和2#分别进行10次测定。结果表明，精密度在0. 72 0. 89%之间，使用本发明方法测定还原糖含量具有较好的精密度。9、方法空白加标回收率试验
由已知还原糖含量的标准样品和待测样品的空白加标回收率测定结果可知还原糖空白加标回收率在98. 24 101. 98%之间，平均加标回收率在99. 37 101. 1 之间，说明该方法是可行的。10、方法检出限试验
使用浓度为1000mg/L的葡萄糖溶液作为标准样品，重复测定10次，测定结果的标准偏差 STD=8. 040，方法检出限 MDL=8. 040X2. 821=22. 680mg/L。实施例2 (用流动化学分析仪测定固体样品中还原糖浓度) 1、仪器、试剂
1. 1、仪器API公司生产的AAS系列流动化学分析仪(311型自动取样器、302D型泵系统、303A型反应系统、305D检测器、FASPac-II系列检测软件)。1.2、试剂葡萄糖、3，5-二硝基水杨酸、NaOH、酒石酸钾钠、结晶酚、亚硫酸钠、 Bri j、去离子水。2、仪器参数设定
进样时间60 s ；冲洗时间90 s ；系统稳定时间15 min ；测定波长:540 nm ；反应器温度96°C ；每隔10个样品做两次自动清洗和一次基线校正。取样器清洗液5-10滴Brij和IOOml去离子水混合，摇勻即得。3、制备标准溶液
准确称取5 g经过98 100°C干燥2 h的葡萄糖，用去离子水溶解后定容至500 mL, 即配成浓度为10，000 mg/L的葡萄糖标准储备液；再移取标准储备液各50、75、100、125和 150ml，用去离子水定容至500ml，即得到浓度分别为1000、1500、2000、2500和3000 mg/L的标准溶液。4、制备显色剂
将5g 3，5-二硝基水杨酸溶于200mL摩尔浓度为2mol/L的NaOH溶液中，接着加入 500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，混勻后加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，溶解后定容至 IOOOmL,暗处保藏。5、制备待测样品溶液
精确称取待测麦芽样品1#、2#各1 g分别溶于100 mL水中，在冰浴中10，000 rpm均质5 min，然后用滤纸过滤备用。6、样品测定
将取样器清洗液、显色剂、标准溶液和待测样品溶液分别倒入测定管并放在自动取样器的相应位置，设置反应池加热温度为95°C，待系统稳定后在波长MOnm下测定吸光值，并设定对1000 mg/L,2000 mg/L及待测样品1#、姊分别进行10次重复测定。
7、绘制还原糖标准工作曲线，得到还原糖浓度和吸光值的线性回归方程为 y=0. 0004180x+0. 2370，其中χ为还原糖浓度(mg/L)，变化范围为0-3000，y为吸光值，变化范围为0-7. 2。标准工作曲线参见附图1。8、方法精密度试验
对1000 mg/L和2000 mg/L的标准样品及待测样品1#和2#分别进行10次测定。结果表明，精密度在0. 67 0. 80%之间，使用本发明方法测定还原糖含量具有较好的精密度。9、方法空白加标回收率试验
由已知还原糖含量的标准样品和待测样品的空白加标回收率测定结果可知还原糖空白加标回收率在98. 24 101. 98%之间，平均加标回收率在99. 37 101. 1 之间，说明该方法是可行的。10、方法检出限试验
使用浓度为1000mg/L的葡萄糖溶液作为标准样品，重复测定10次，测定结果的标准偏差 STD=8. 040，方法检出限 MDL=8. 040X2. 821=22. 680mg/L。
权利要求
1.一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法，包括了以下步骤(1)配制不同浓度的葡萄糖标准溶液，使标准溶液与显色剂在流动化学分析仪中反应；(2)将标准溶液与显色剂混合加热，在流动化学分析仪内反应，记录一定波长下流动化学分析仪测定的吸光值，将其同还原糖的浓度绘制还原糖标准工作曲线，并进行回归分析，得到还原糖回归方程；(3)记录测定待测样品溶液的吸光值，并计算出其中还原糖浓度，其特征在于所述的显色剂为3，5- 二硝基水杨酸，流动化学分析仪测定波长为540nm，待测样品溶液与显色剂的混合加热温度为95 99°C。
2.根据权利要求1所述的一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法，其特征在于所述步骤(1)中标准溶液的配制浓度为1000、1500、2000、2500和3000mg/L。
3.根据权利要求1所述的一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法，其特征在于所述的显色剂的配制步骤为将3，5-二硝基水杨酸溶于NaOH溶液中，加入酒石酸钾钠溶液，混合均勻，加入结晶酚和亚硫酸钠，溶解定容。
4.根据权利要求1所述的一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法，其特征在于所述的待测样品为可溶性固体，配置待测样品溶液步骤为称取Ig固体样品溶于IOOml 水中，在冰浴中IOOOOrpm勻质5min，用滤纸过滤。
5.根据权利要求1所述的一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法，其特征在于所述的待测样品为液体，配置待测样品溶液步骤为吸取样品Iml用水定容至100ml，混合均勻后用滤纸过滤。
6.根据权利要求1所述的一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法，其特征在于该方法所测还原糖的浓度范围在1000 3000mg/L。
全文摘要
本发明公开了一种用流动化学分析仪测定还原糖浓度的方法，它采用3,5-二硝基水杨酸作为显色剂并与流动化学分析仪结合来测定还原糖的浓度，试剂价格便宜，配制程序简单，实验过程温度和时间由仪器控制，精度高，重复性好，无人为误差，测定结果准确可靠，适于批量产品快速准确检验。
文档编号G01N21/75GK102288596SQ20111018821
公开日2011年12月21日 申请日期2011年7月6日 优先权日2011年7月6日
发明者卫春会, 宗绪岩, 江文涛, 罗惠波, 黄治国 申请人:四川理工学院