专利名称：测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷d的方法
技术领域：
本发明涉及测定卷烟及主流烟气粒相物中中药有效成分的方法，具体涉及一种测定卷烟及主流烟气粒相物中中药桔梗提取物有效成分的方法。
背景技术：
随着全球性控烟运动的不断推进，社会公众对于吸烟与健康问题日益关注。桔梗具有宣肺、祛痰、利咽、排脓的作用，目前，部分卷烟已通过添加中药桔梗提取物来降低吸烟引起的危害。而中药功效与其主要的有效成分密切相关，中药桔梗的有效成分是桔梗皂苷D，该有效成分的含量很低，尤其是在燃烧之后，这些有效成分可能经热裂解、化学反应等产生变化，使卷烟主流烟气中的含量更低，故对中药材有效成分的进行检测有一定意义。现有的桔梗皂苷D的分析方法主要是高效液相色谱法，高效液相色谱法检测器灵敏度低、自身抗干扰能力弱，在分析低含量样品时，易出现定量不准确或无法定量的问题，人们希望能有一种灵敏度高、抗干扰能力强的测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的方法。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中存在的不足之处，提供一种灵敏度高、抗干扰能力强，能快速、准确定量分析桔梗皂苷D的测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的方法。本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的。一种测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:包括以下步骤:
(1)对于卷烟:将卷烟在22±1°C、相对湿度60±2%的条件下平衡48小时后，测定50支经过平衡卷烟的平均质量和平均吸阻，按照平均质量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑选烟支；
(2)卷烟烟丝中桔梗皂苷D的提取:取按步骤(I)挑选出的5-20支卷烟烟丝于玻璃容器中，加入50ml-150ml的醇作为提取溶剂，对整个容器称重，提取出桔梗皂苷D，用醇补足重量，过滤后即可进样分析；
(3)卷烟主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的提取:在吸烟机上，使用92mm的玻璃纤维滤片，捕集按步骤(I)挑选出的10-20支卷烟主流烟气的粒相物，放置3-5min后取出滤片，将滤片置于玻璃容器中，加入50-150ml的醇作为提取溶剂，对整个容器称重，提取出桔梗皂苷D，用醇补足重量，过滤后即可进样分析；
(4)对步骤(2)和步骤(3)所得样品进行超高效液相色谱-串联质谱分析。步骤(4)所述超高效液相色谱-串联质谱分析中，色谱条件:分析柱=WatersAcquity UPLC BEH C18 (1.7um,2.1 X 100mm);流动相:A 相为添加了 0.1%-0.3% 有机酸 I的水溶液，B相为乙腈，梯度洗脱；流速:0.25ml/min ;柱温30°C ；
质谱条件:根据桔梗皂苷D的质谱碎裂规律，选择串联质谱的特定扫描模式进行分析，具体参数如下:气帘气:10ml/min ;碰撞气:中；离子源气1:60ml/min ;离子源气2:50ml/min ;接口加热器:开；温度:6000C ;离子喷雾电压:_4200V。步骤(2)和步骤(3)所述提取过程为超声波提取，震荡提取或浸泡提取。步骤(2)和步骤(3)所述提取溶剂中的醇为包括一个、二个或三个碳原子的一元
醇或多元醇。所述色谱条件中流动相所用的有机酸I为包括一个、二个或三个碳原子的一元有机酸或多元有机酸；所述的质谱条件中特定扫描模式为全扫描模式、中性丢失扫描模式、多反应监测扫描模式。本发明的有益效果是:本发明能够有效地将卷烟烟丝及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D完全提取，然后经过超高效液相色谱分析，串联质谱的特定扫描模式分析，从而实现桔梗皂苷D的快速、准确定量分析。本发明的方法不仅可以测定诸如卷烟烟丝及主流烟气粒相物这样的复杂体系中桔梗皂苷D含量，而且灵敏度高、选择性强、准确性好、操作简便快速。
具体实施例方式以下将结合具体的优选实施例对本发明作进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下做出若干替代或明显变型，而且性能或用途相同，都应当视为属于本发明的保护范围。实施例1。a、对于卷烟:将卷烟在(22±1) °C、相对湿度(60±2)%的条件下平衡48小时后，测定50支经过平衡卷烟的平均质量和平均吸阻，按照平均质量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑选烟支。b、卷烟烟丝中桔梗皂苷D的提取:取10支卷烟烟丝于250ml的具塞锥形瓶中，用移液管准确加入IOOml甲醇，对整个容器称重，在常温下，在超声功率350W和超声波频率为70KHz下超声30min，静置5min，用甲醇补足重量，摇匀后过滤待测。C、对所得样品进行超高效液相色谱-串联质谱分析:
1.色谱条件:分析柱:ffaters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 u m, 2.1 X 100mm);流动相:A相为0.2%的乙酸水溶液，B相为乙腈，梯度条件:0min，A: B (85%: 15%) ；4min, A: B(75%: 25%) ；10min, A: B (60%: 40%) ；10.lmin, A: B (0%: 100%) ；12min, A: B(0%: 100%)； 12.lmin,A: B (85%: 15%)；15min,A: B (85%: 15%);流速:0.25ml/min ;柱温30°C。2.质谱条件:采用多反应监测扫描模式进行定量分析，具体参数如下:气帘气:10ml/min ;碰撞气:中；离子源气1:60ml/min ;离子源气2:50ml/min ;接口加热器:开；温度:600°C ;离子喷雾电压:-4200V。桔梗皂苷D的特征母离子-子离子对如表I所示。实施例2。a、对于卷烟:将卷烟在(22±1) °C、相对湿度(60±2)%的条件下平衡48小时后，测定50支经过平衡卷烟的平均质量和平均吸阻，按照平均质量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑选烟支。b、卷烟及主流烟气粒相物的捕集与处理:使用一张92mm的玻璃纤维滤片，在(22±1) °C、相对湿度(60±2)%条件下，用RM200 二十孔道转盘式吸烟机捕集20支卷烟主流烟气。抽吸结束后，空吸2 口，取出捕集器，放置3min后取出滤片，移至250ml锥形瓶中，用移液管准确加入IOOml甲醇溶液，对整个容器称重，超声萃取30min，静置2min，用甲醇补
足重量。C、对所得样品进行超高效液相色谱-串联质谱分析。1.色谱条件:分析柱:Waters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 U m, 2.1 X 100mm);流动相:A相为0.2%乙酸水溶液，B相为乙腈，梯度条件:0min，A: B (85%: 15%) ；4min,A: B (75%: 25%)；10min,A: B (60%: 40%)；10.lmin,A: B (0%: 100%)；12min,A: B(0%: 100%)； 12.lmin,A: B (85%: 15%)；15min,A: B (85%: 15%);流速:0.25ml/min ;柱温30°C ；
2.质谱条件:采用多反应监测扫描模式进行定量分析，具体参数如下:气帘气:10ml/min ;碰撞气:中；离子源气1:60ml/min ;离子源气2:50ml/min ;接口加热器:开；温度:6000C ;离子喷雾电压:-4200V。桔梗皂苷D的特征母离子-子离子对如表I所示。实施例3。a、对于卷烟:将卷烟在(22±1) °C、相对湿度(60±2)%的条件下平衡48小时后，测定50支经过平衡卷烟的平均质量和平均吸阻，按照平均质量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑选烟支。b、卷烟烟丝中桔梗皂苷D的提取:取10支卷烟烟丝于250ml的具塞锥形瓶中，用移液管准确加入IOOml异丙醇，以150转/分震荡30分钟，静置5min后取续滤液待测。C、对所得样品进行超高效液相色谱-串联质谱分析:
1.色谱条件:分析柱:ffaters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 u m, 2.1 X 100mm);流动相:A相为0.2%的乙酸水溶液，B相为乙腈，梯度条件:0min，A: B (85%: 15%) ；4min, A: B(75%: 25%) ；10min, A: B (60%: 40%) ; 10.lmin, A: B (0%: 100%) ；12min, A: B(0%: 100%)； 12.lmin,A: B (85%: 15%)；15min,A: B (85%: 15%);流速:0.25ml/min ;柱温30°C。2.质谱条件:采用多反应监测扫描模式进行定量分析，具体参数如下:气帘气:10ml/min ;碰撞气:中；离子源气1:60ml/min ;离子源气2:50ml/min ;接口加热器:开；温度:600°C ;离子喷雾电压:-4200V。桔梗皂苷D的特征母离子-子离子对如表I所示。实施例4。a、对于卷烟:将卷烟在(22±1) °C、相对湿度(60±2)%的条件下平衡48小时后，测定50支经过平衡卷烟的平均质量和平均吸阻，按照平均质量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑选烟支。b、卷烟及主流烟气粒相物的捕集与处理:使用一张92mm的玻璃纤维滤片，在(22±1) °C、相对湿度(60±2)%条件下，用RM200 二十孔道转盘式吸烟机捕集20支卷烟主流烟气。抽吸结束后，空吸2 口，取出捕集器，放置3min后取出滤片，移至250ml锥形瓶中，用移液管准确加入IOOml异丙醇，以150转/分震荡30分钟，静置2min后取续滤液待测。C、对所得样品进行超高效液相色谱-串联质谱分析。1.色谱条件:分析柱:Waters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 U m, 2.1 X 100mm);流动相:A相为0.2%乙酸水溶液，B相为乙腈，梯度条件:0min，A: B (85%: 15%) ；4min,A: B (75%: 25%)；10min,A: B (60%: 40%)；10.lmin,A: B (0%: 100%)；12min,A: B(0%: 100%)； 12.lmin,A: B (85%: 15%)；15min,A: B (85%: 15%);流速:0.25ml/min ;柱温30°C ；
2.质谱条件:采用多反应监测扫描模式进行定量分析，具体参数如下:气帘气:10ml/min ;碰撞气:中；离子源气1:60ml/min ;离子源气2:50ml/min ;接口加热器:开；温度:6000C ;离子喷雾电压:-4200V。桔梗皂苷D的特征母离子-子离子对如表I所示。表1:桔梗皂苷D在MRM模式下质谱分析参数。
权利要求
1.一种测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)对于卷烟:将卷烟在22±1°C、相对湿度60±2%的条件下平衡48小时后，测定50支经过平衡卷烟的平均质量和平均吸阻，按照平均质量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑选烟支； (2)卷烟烟丝中桔梗皂苷D的提取:取按步骤(I)挑选出的5-20支卷烟烟丝于玻璃容器中，加入50ml-150ml的醇作为提取溶剂，对整个容器称重，提取出桔梗皂苷D，用醇补足重量，过滤后即可进样分析； (3)对步骤(2)所得样品进行超高效液相色谱-串联质谱分析。
2.根据权利要求1所述的一种测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:所述步骤(2)为卷烟主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的提取:在吸烟机上，使用92mm的玻璃纤维滤片，捕集按步骤(I)挑选出的10-20支卷烟主流烟气的粒相物，放置3-5min后取出滤片，将滤片置于玻璃容器中，加入50-150ml的醇作为提取溶剂，对整个容器称重，提取出桔梗皂苷D，用醇补足重量，过滤后即可进样分析。
3.根据权利要求1所述的一种测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:步骤(4)所述超高效液相色谱-串联质谱分析中，色谱条件:分析柱:WatersAcquity UPLC BEH C18 (1.7um,2.1 X 100mm);流动相:A 相为添加了 0.l%-0.3% 有机酸 I的水溶液，B相为乙腈，梯度洗脱；流速:0.25ml/min ;柱温30°C ； 质谱条件:根据桔梗皂苷D的质谱碎裂规律，选择串联质谱的特定扫描模式进行分析，具体参数如下:气帘气:10ml/min ;碰撞气:中；离子源气1:60ml/min ;离子源气2:50ml/min ;接口加热器:开；温度:6000C ;离子喷雾电压:_4200V。
4.根据权利要求1或2所述的一种测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:步骤(2)所述提取过程为超声波提取，震荡提取或浸泡提取。
5.根据权利要求1或2所述的一种测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:步骤(2)所述提取溶剂中的醇为包括一个、二个或三个碳原子的一元醇或多元醇。
6.根据权利要求3所述的一种测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:所述色谱条件中流动相所用的有机酸I为包括一个、二个或三个碳原子的一元有机酸或多元有机酸；所述的质谱条件中特定扫描模式为全扫描模式、中性丢失扫描模式、多反应监测扫描模式。
全文摘要
测定卷烟及主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的方法，涉及测定卷烟及主流烟气粒相物中中药有效成分的方法。包括以下步骤(1)按平均质量和平均吸阻挑选卷烟；(2)卷烟烟丝中桔梗皂苷D的提取；(3)卷烟主流烟气粒相物中桔梗皂苷D的提取；(4)对步骤(2)和步骤(3)所得样品进行超高效液相色谱-串联质谱分析。本发明的有益效果是本发明的方法不仅可以测定诸如卷烟烟丝及主流烟气粒相物这样的复杂体系中桔梗皂苷D含量，而且灵敏度高、选择性强、准确性好、操作简便快速。
文档编号G01N30/88GK103163262SQ20111042669
公开日2013年6月19日 申请日期2011年12月19日 优先权日2011年12月19日
发明者郭磊, 索卫国, 蔡继宝, 黄卫东, 李福龙 申请人:江西中烟工业有限责任公司