专利名称：一种用于高效率洗脱口腔拭子中活性抗体的试剂和洗脱方法
技术领域：
本发明涉及抗体采集检验技术，具体地说是ー种用于高效率洗脱口腔拭子中活性抗体的试剂和洗脱方法。
背景技术：
口腔黏膜渗出液，是目前免疫检测的重要发展方向，以前进行抗体检测的过程中大多采用血清作为检测对象，而其采集过程造成创伤，不适合受检者自检同时也加大了受检者的痛苦。近年来，对口腔黏膜渗出液的检测日益发展起来，但是口腔黏膜渗出液中的抗 体浓度较低，特别是在拭子进行抗体洗脱的过程中会产生大量的损耗，其主要来源于两个方面，一、缓冲液中成分不当使得抗体大量吸附在拭子上，ニ、溶液中的成分降低抗体的活性。如果能够有高效率洗脱口腔拭子中活性抗体的方法将极大地加速口腔黏膜渗出液检测的抗体范围和灵敏度。
发明内容
针对口腔拭子，本发明克服了现有技术中的缺点，提供一种高效率洗脱口腔拭子中活性抗体的试剂配方和方法。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是配置溶液A和溶液B并采取以下方法洗脱。其中溶液A 的配方为 NaCl 8g/L，KCl O. 2g/L，Na2HPO4 I. 15g/L，KH2PO4O. 2g/L，吐温(tween) 20 O. 05ml/L，牛血清白蛋白(BSA) Ig/L，NaN3 O. 2g/L ；溶液B的配方为B液的配方为100 μ g/mL羊抗鼠IgG抗体溶液。操作过称为先将口腔拭子浸润于2mL A液中10分钟，再加入ImL B液，口腔拭子在上述溶液中充分震荡，震荡后所获得的溶液即为洗脱口腔拭子中活性抗体溶液。将上述活性抗体溶液使用人免疫球蛋白(IgG)ELISA检测试剂盒进行定量分析，分析结果同未使用该方法的拭子洗脱液进行比较，比较结果证明该方法能够提高洗脱效率5到10倍。检测方法如下分别取按照本发明配方和方法采集的口腔黏膜渗出液抗体样本和按照常规方法采集的口腔黏膜渗出液抗体样本各100 μし在冰箱中取出人免疫球蛋白(IgG)ELISA检测试剂盒，在室温中平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剰余板条用自封袋密封放回4で。设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μ L ;样本孔先加待测样本10 μ L，再加样本稀释液40 μ L ;空白孔不加。除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100 μ L,用封板膜封住反应孔，37°C水浴锅或恒温箱温育60min。
弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置lmin，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。每孔加入底物A、B各50iiL，37°C避光孵育15min。每孔加入终止液50 ii L, 15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断
绘制标准曲线，在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。将上述抗体样品进行分析，分析结果如下表一使用本发明和未使用本发明的所获得的样品中的抗体浓度单位(102iig/mL)
未使用本发明使用本发明~
~IL 363^2
~227363^7
3579728 9
图I使用本发明和未使用本发明的所获得的样品中的抗体浓度。
具体实施例方式下面结合附图和具体实施方式
对本发明作进一步详细说明本发明是通过以下技术方案实现的(I)配置溶液A和溶液B。其中溶液A 的配方为 NaCl 8g/L，KCl 0. 2g/L，Na2HPO4 I. 15g/L，KH2PO4O. 2g/L，吐温(tween) 20 0. 05ml/L，牛血清白蛋白(BSA) lg/L, NaN3 0. 2g/L ；溶液B的配方为B液的配方为100 u g/mL羊抗鼠IgG抗体溶液。(2)将采集的口腔黏膜渗出液的拭子放入一体积适合的容器中。(3)先将口腔拭子浸润于2mL A液中10分钟。(4)再加入ImL B液，口腔拭子在上述溶液中充分震荡，震荡后所获得的溶液即为洗脱口腔拭子中活性抗体溶液。(5)将上述样品溶液进行检测。(6)在冰箱中取出人免疫球蛋白(IgG)ELISA检测试剂盒，在室温中平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条。(7)设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50 y L ;样本孔先加待测样本10 ii L，再加样本稀释液40 ii L ;空白孔不加。(8)除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体IOOu L，用封板膜封住反应孔，37°C水浴锅或恒温箱温育60min。
(9)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置lmin，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。(10)每孔加入底物A、B各50 ii L，37°C避光孵育15min。(11)每孔加入终止液50 V- L, 15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。(12)绘制标准曲线，在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐 标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。经测定使用本方法采集的抗体浓度为3. lmg/mL。接近血清中的抗体含量。
权利要求
1.一种用于高效率洗脱口腔拭子中活性抗体的试剂配方，其配方中包括多个组分，包括 NaCl 8g/L，KCl O. 2g/L, Na2HPO4 I. 15g/L, KH2PO4 O. 2g/L，吐温(tween) 20 0. 05ml/L,牛血清白蛋白(BSA) lg/L，NaN3 O. 2g/L以及100 μ g/mL羊抗鼠IgG抗体。
2.根据权利要求I所述的一种用于高效率洗脱口腔拭子中活性抗体的试剂配方，特征在于口腔拭子的洗脱步骤如下 先将口腔拭子浸润于2mL A液中10分钟，A液的配方为NaCl 8g/L,KC10. 2g/L,Na2HPO4I.15g/L, KH2PO4 O. 2g/L,吐温(tween) 20 0. 05ml/L，牛血清白蛋白(BSA) lg/L, NaN3 0. 2g/L0 再加入ImL B液，B液的配方为100 μ g/mL羊抗鼠IgG抗体，上述溶液充分震荡，震荡后所获得的溶液即为洗脱口腔拭子中活性抗体溶液。
全文摘要
本发明公开了一种用于高效率洗脱口腔拭子中活性抗体的试剂配方和配套的洗脱方法，其配方中包括多个组分，包括NaCl 8g/L，KCl 0.2g/L，Na2HPO4 1.15g/L，KH2PO4 0.2g/L，吐温(tween)20 0.05ml/L，牛血清白蛋白(BSA)1g/L，NaN3 0.2g/L以及100μg/mL羊抗鼠IgG抗体。针对口腔拭子，本发明克服了现有技术中的缺点，提供一种高效率洗脱口腔拭子中活性抗体的试剂配方和方法。
文档编号G01N1/34GK102628763SQ201210065190
公开日2012年8月8日 申请日期2012年3月14日 优先权日2012年3月14日
发明者刘寅, 刘振宇, 刘智勇, 李秀平, 祁军 申请人:中华人民共和国天津出入境检验检疫局