专利名称：一种红茶的质量分析评价方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种红茶的质量分析评价方法，特别涉及采用中药指纹图谱分析方法对红茶样品进行成分分析。本发明的质量分析评价方法可以用于红茶或由红茶加工制成的产品的质量分析。
背景技术：
随着各种分析鉴定方法和仪器的发展，茶叶化学成分系统研究逐步深入，虽然中药指纹图谱的研究已经非常普遍，但将其移植到茶叶的研究和质量控制上比较鲜见。根据相关文献的检索发现，茶叶的指纹图谱研究主要集中在绿茶和普洱茶上，主要针对红茶成分分析的指纹图谱研究较少，乌龙茶和其他茶类的研究也未见报道。现有茶叶指纹图谱主要是多酚类的单体和咖啡碱的基础研究，并没有对整体的分析和应用于现实生产和质量控制等方面。专门以红茶为研究对象的全面反映物质成分组成及比例的指纹图谱分析和应用并未见有相关研究和报道。目前红茶的质量标准主要以国家标准为主，其中的质量分析主要侧重于传统的感官鉴别、评价以及卫生指标等项目，不足以说明红茶的内在品质。并且各类茶叶的标准特征性不强，较大的区别特征仅仅在于外观等主观的感官性状鉴别。虽然相关的国家标准中涉及茶叶中儿茶素、咖啡因成分的检测方法，但目前没有产品标准对其限量等进行规定，也不能对茶叶质量从整体上进行分析和评价。所以目前各类茶叶的质量分析评价标准普遍存在主观检验项目为主、客观检验项目专属性不强、成分测定无限量要求、质量评价无全面分析方法等缺陷。
发明内容
在目前茶叶的检验标准以及研究现状基础上，总体考虑茶叶质量分析评价的方法，本发明力争解决质量分析评价不够全面且没有专属性的技术缺陷，建立一种以高效液相色谱为检验基础，应用指纹图谱技术对红茶及其产品进行整体的成分分析和评价方法。本发明涉及一种以红茶为研究对象，采用高效液相色谱分析的方法对红茶样品的成分进行整体的分析，本发明方法主要基于中药指纹图谱分析方法，红茶特征图谱的质量分析评价方法及其应用，对红茶样品进行成分分析。本发明方法可以用于红茶产品或由红茶加工制成的产品的质量分析。通过对多批红茶成分的分析比对总结出了本发明用于评价红茶相对质量的方法，本方法采用高效液相色谱法进行，固定相以十八烷基键合硅胶做填充剂，流动相由有机溶剂、水及调节剂组成，检测波长210nm至540nm，以咖啡因为参照峰，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。红茶的样本图谱中应呈现9个特征峰，以咖啡因为参照峰，相对保留时间以1. OOOmin计算，分别计算各个特征峰的相对保留时间。—种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，是采用高效液相色谱法对茶叶样品进行分析检测，通过计算特征峰的相对保留时间进行质量评价，其步骤如下
a.高效液相的色谱条件，固定相为十八烷基键合硅胶，流动相由有机相、水相、调节剂相中的一种或几种，检测波长210nm-540nm ；
b.采集50分钟之内的色谱峰，呈现9个特征峰，并以咖啡因作为参照峰，即峰S，规定值1. 000，计算9个特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±5%之内；9个特征峰的规定值分别为特征峰I规定值O. 493、特征峰2规定值O. 808、特征峰3规定值1. 000、特征峰4规定值1. 115、特征峰5规定值1. 166、特征峰6规定值1. 283、特征峰7规定值1. 359、特征峰8规定值1. 915、特征峰9规定值3. 371。即规定值为峰I为O. 493、峰 2 为 O. 808、峰 3 为1. 000、峰 4 为1. 115、峰 5 为1. 166、峰 6 为1. 283、峰 7 为1. 359、峰8 为1. 915、峰 9 为 3. 371。本发明的一种红茶的质量分析评价方法，其中所述的高效液相分析检测方法特征在于的色谱条件固定相为十八烷基键合硅胶，流动相中的有机相为甲醇、乙腈、丙酮中的一种或几种、调节剂相为甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或几种，检测波长210nm-540nm。其特征进一步为方法中高效液相的色谱条件采用十八烷基键合硅胶反相色谱柱，流动相中的有机相为甲醇、乙腈的一种或二种、调节剂为乙酸、三氟乙酸中的一种或二种。本发明方法中的高效液相色谱分析检测方法中的流动相可以为以下几种
1、高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱0-15min，流动相为含5-20%乙腈的1_3%乙酸水溶液；15-35min，流动相为含12-40%乙腈的1_3%乙酸水溶液；
2、高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱0-15min，流动相为含5-20%甲醇的1_3%三氟乙酸水溶液；15-35min，流动相为含20-50%甲醇的1_3%三氟乙酸水溶液。3、高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由5-20%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、77-94%水组成、B相由70-95%乙腈或甲醇、1_3%乙酸或三氟乙酸、7-29%水组成，梯度洗脱条件为0-15min，A相体积百分比由100%降至90% ；15-30min, A相体积百分比由90%降至70% ；30-50min, A相体积百分比为70%。4、高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由5-15%乙臆或甲醇、1_3%乙酸或二氟乙酸、82-94%水组成、B相由75-85%乙臆或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、12-24%水组成，梯度洗脱条件为0-15min，A相体积百分比由100%降至90% ；15-30min, A相体积百分比由90%降至70% ；30-50min, A相体积百分比为70%。5、高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由8-10%乙腈、1-3%乙酸、87-91%水组成、B相由78-80%乙腈、1_3%乙酸、17-21%水组成，梯度洗脱条件为0-15min, A相体积百分比由100%降至90% ；15-30min, A相体积百分比由90%降至70% ；30-50min, A相体积百分比为70%。本发明方法主要通过以下操作实现
一、高效液相分析检测1、供试品的前处理方法取茶叶样品过40目筛的粉末加入10-25倍量的溶剂于60-90°C水浴浸提5-30分钟，浸提1-3次，离心或过滤，合并上清液或滤液于60-90°C水浴上蒸干，残渣用甲醇定容至IOml即得供试品待测液。其中所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、水中的一种或几种。2、参照物的处理方法取咖啡因对照品适量，精密成定，加甲醇制成每Iml含咖啡因O. 2mg的溶液，即得。3、色谱条件与系统适用性以十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相分成A、B两个部分，按下述方法中规定的时间和体积比进行梯度洗脱；检测波长为210nm-540nm ;柱温350C ;流速lml/min。理论板数按咖啡因计算应不低于3500。本发明方法色谱条件的流动相按以下两种方式组合而成流动相分成A、B两部分，A部分可以是有机相或者是有机相、水相与调节剂组成；B部分可以是水相与调节剂组成或者是有机相、水相与调节剂组成。1)、A为有机相、B为水相与调节剂组成；
其中A可以是甲醇、乙腈、丙酮中的一种或几种；B可以是甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或几种配制成的含酸1-3%的水溶液，当调节剂的组成由两种或两种以上构成时，各种酸的比例为1:1。2)、A、B均为有机相、水相与调节剂组成。其中A、B分别是含有不同浓度有机溶剂及调节剂的水溶液，其中有机溶剂可以是甲醇、乙腈、丙酮中的一种或几种，调节剂为甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或几种。A中有机溶剂的浓度为5-20%、B中有机溶剂的浓度为70-90% 'K、B中含调节剂酸的浓度为1-3%，当调节剂的组成由两种或两种以上构成时，各种酸的比例为1:1。具体的流动相及梯度洗脱的比例可以为
①、方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱0-15min，流动相为含5-20%乙腈的1-3%乙酸水溶液；15-35min，流动相为含12-40%乙腈的1_3%乙酸水溶液。②、方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱0-15min，流动相为含5_20%甲醇的1-3%三氟乙酸水溶液；15-35min，流动相为含20-50%甲醇的1_3%三氟乙酸水溶液。③、方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由5-20%乙臆或甲醇、1-3%乙酸或二氣乙酸、77-94%水组成、B相由70-90%乙臆或甲醇、1-3%乙酸或二氟乙酸、7_29%水组成,梯度洗脱条件为0_15min,A相体积百分比由100%降至90% ；15-30min, A相体积百分比由90%降至70% ；30-50min, A相体积百分比为70%。④、方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由5_15%乙臆或甲醇、1-3%乙酸或二氣乙酸、82_94%水组成、B相由75-85%乙臆或甲醇、1-3%乙酸或二氟乙酸、12-24%水组成,梯度洗脱条件为0_15min, A相体积百分比由100%降至90% ；15-30min, A相体积百分比由90%降至70% ；30-50min, A相体积百分比为70%。⑤、方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由8-10%乙腈、1-3%乙酸、87-91%水组成、B相由78-80%乙腈、1-3%乙酸、17-21%水组成，梯度洗脱条件为0-15min，A相体积百分比由100%降至90% ；15-30min, A相体积百分比由90%降至70% ；30-50min, A相体积百分比为70%。也即是说本发明所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱0-15min，流动相为含5-12%乙腈的2%乙酸水溶液；15-35min，流动相为含12-40%乙腈的2%乙酸水溶液。或者其特征在于方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱0-15min，流动相为含5-20%甲醇的1-3%三氟乙酸水溶液；15-35min，流动相为含20-60%甲醇的1_3%三氟乙酸水溶液。
或者其特征在于方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由5-20%乙臆或甲醇、1-3%乙酸或二氣乙酸、77-94%水组成、B相由70-90%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、7-29%水组成，梯度洗脱条件为0-15min，A相体积百分比由100%降至90% ;15-30min，A相体积百分比由90%降至70% ;30_50min，A相体积百分比为70%。或者其特征在于方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由5-15%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、82-94%水组成、B相由75-85%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、12-24%水组成，梯度洗脱条件为0-15min，A相体积百分比由100%降至90% ;15-30min，A相体积百分比由90%降至70% ;30_50min，A相体积百分比为 70%ο或者其特征在于方法中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由8-10%乙腈、1-3%乙酸、87-91%水组成、B相由78-80%乙腈、1-3%乙酸、17-21%水组成，梯度洗脱条件为0-15min，A相体积百分比由100%降至90% ;15_30min，A相体积百分比由90%降至70% ；30-50min, A相体积百分比为70%。检测波长进一步可以是210nm—366nm,更进一步可以是210nm—280nm。二、色谱中特征峰相对保留时间的计算
采集50分钟之内的色谱峰，呈现9个特征峰，并以咖啡因作为参照峰，即峰S，规定值1. 000，计算9个特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±5%之内；9个特征峰的规定值分别为特征峰I规定值O. 493、特征峰2规定值O. 808、特征峰3规定值1. 000、特征峰4规定值1. 115、特征峰5规定值1. 166、特征峰6规定值1. 283、特征峰7规定值1. 359、特征峰8规定值1. 915、特征峰9规定值3. 371。即规定值为峰I为O. 493、峰 2 为 O. 808、峰 3 为1. 000、峰 4 为1. 115、峰 5 为1. 166、峰 6 为1. 283、峰 7 为1. 359、峰8 为1. 915、峰 9 为 3. 371。本发明涉及一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于本分析方法可用于红茶及其加工品的质量分析评价方法。利用本发明方法分别就红茶、绿茶、乌龙茶、普洱茶的样品进行分析，以咖啡因作为参照峰，即峰S，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，可以明显看出绿茶、乌龙茶、普洱茶样品中没有第九个特征峰，规定保留时间3. 371，如
图1所示，所以此方法可作为专属性鉴别红茶的方法。不同红茶按此方法进行分析，按照中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照品指纹图谱的相似度不低于O. 90，如图2所示。
权利要求
1.一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，是采用高效液相色谱法对茶叶样品进行分析检测，通过计算特征峰的相对保留时间进行质量评价，其步骤如下a.高效液相的色谱条件，固定相为十八烷基键合硅胶，流动相由有机相、水相、调节剂相中的一种或几种，检测波长210nm-540nm ；b.采集50分钟之内的色谱峰，呈现9个特征峰，并以咖啡因作为参照峰，即峰S，规定值1. 000，计算9个特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±5%之内；9个特征峰的规定值分别为特征峰I规定值O. 493、特征峰2规定值O. 808、特征峰3 规定值1. 000、特征峰4规定值1. 115、特征峰5规定值1. 166、特征峰6规定值1. 283、特征峰7规定值1. 359、特征峰8规定值1. 915、特征峰9规定值3. 371。
2.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱条件固定相为十八烷基键合硅胶，流动相中的有机相为甲醇、乙腈、丙酮中的一种或几种、调节剂相为甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或几种，检测波长210nm-540nm。
3.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱条件固定相为十八烷基键合硅胶，流动相中的有机相为甲醇、乙腈的一种或二种、调节剂为乙酸、三氟乙酸中的一种或二种。
4.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱0-15min，流动相为含5-20%乙腈的1_3%乙酸水溶液； 15-35min，流动相为含12-40%乙腈的1_3%乙酸水溶液。
5.如权利要求1所述的红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱0-15min，流动相为含5-20%甲醇的1_3%三氟乙酸水溶液； 15-35min，流动相为含20-50%甲醇的1_3%三氟乙酸水溶液。
6.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由5-20%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、77-94%水组成、B相由70-95%乙腈或甲醇、1_3%乙酸或三氟乙酸、7-29%水组成，梯度洗脱条件为0-15min，A相体积百分比由100%降至90% ;15_30min，A相体积百分比由90%降至70% ；30-50min, A相体积百分比为70%。
7.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由5-15%乙腈或甲醇、1-3%乙酸或三氟乙酸、82-94%水组成、B相由75-85%乙腈或甲醇、1_3%乙酸或三氟乙酸、12-24%水组成，梯度洗脱条件为0-15min，A相体积百分比由100%降至90% ;15_30min，A相体积百分比由90%降至70% ；30-50min, A相体积百分比为70%。
8.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于，步骤a中高效液相的色谱洗脱条件为梯度洗脱流动相由A相及B相组成，A相由8-10%乙腈、1-3%乙酸、 87-91%水组成、B相由78-80%乙腈、1-3%乙酸、17-21%水组成，梯度洗脱条件为0_15min， A相体积百分比由100%降至90% ；15-30min, A相体积百分比由90%降至70% ；30-50min, A 相体积百分比为70%。
9.如权利要求1所述的一种红茶的质量分析评价方法，其特征在于茶叶样品的前处理方法为取供试品过40目筛的粉末加入10-25倍量的溶剂于60-90°C水浴浸提5_30分钟，浸提1-3次，离心或过滤，合并上清液或滤液于60-90°C水浴上蒸干，残渣用甲醇定容至IOml即得供试品待测液， 其中所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、水中的一种或几种。
全文摘要
本发明涉及一种红茶特征图谱的质量分析评价方法及其应用，主要基于中药指纹图谱分析方法对红茶样品进行成分分析。本方法采用高效液相色谱法进行，固定相以十八烷基键合硅胶做填充剂，流动相由有机溶剂、水及调节剂组成，检测波长210nm至540nm，红茶特征图谱中应呈现9个特征峰，以咖啡因为参照峰，计算各特征峰与参照峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。本发明方法可以用于红茶产品或由红茶加工制成的产品的质量分析。
文档编号G01N30/88GK103018384SQ201210373189
公开日2013年4月3日 申请日期2012年9月29日 优先权日2012年9月29日
发明者王丽娜, 马银海, 韦建荣 申请人:云南白药天颐茶品有限公司