专利名称：三臣散质量检验方法
技术领域：
本发明涉及中药质量检验技术领域，特别涉及一种三臣散质量检验方法。
背景技术：
三臣散来源于我国藏医古验方，始载于藏医巨著《蓝塔布》中。本方性凉，为小儿各种热病，尤其是小儿肺热、肝热之主方。方中以清肺止咳良药天竺黄为主，以清热、解毒、镇静药牛黄和凉血清肝良药红花为辅佐，故具备了清热、解毒、镇静功效，对肺热、肝热等各种瘟热病均有良效。用于小儿肺热及一切热症。临床上用于小儿肺热而见的肺热喘咳，吐痰黄稠，高热烦渴；小儿肝热而见的小儿急惊风；小儿支气管炎及支气管哮喘中的热痰壅肺症状；流感和感冒引起的小儿肺炎，支气管炎，发热咳嗽，心慌气短，精神不振等症。处方中的主要药材天竺黄为禾本科植物青皮竹Bambusa textiles McClure或华思劳竹Schizostachyum chinense Rendle等杆内的分泌物干燥后的块状物。味甘、性凉。具有清热豁痰、凉心定惊的功能，用于热病神昏，中风痰迷，小儿痰若惊痫、抽搐、夜啼。红花为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花。具有活血通经、散瘀止痛的功能，用于经闭，痛经，恶露不行，跌扑损伤等。《札拉嘎》中说“梵天的药方有一千二十二方，红花、石榴二品为本”，治一切寒症药石榴为本，治一切热症病之药红花为本。西红花味甘、性凉。清肝热，敛血，补血。治肝病、血病培元健身。有兴奋呼吸的作用；对离体蟾蜍心脏有较强的抑制作用；藏红花能加强冠状动脉血流量，改善微循环，提高耐缺氧能力；红花黄素有较强持久的镇痛作用，又有抗炎症与中枢抑制作用；对垂体后叶素诱发的大鼠心肌缺血有保护作用，说明对血管收缩有解痉作用；又能兴奋小肠、支气管等平滑肌。牛黄为牛科动物牛Bos Taurus domesticus Gmelin的干燥胆结石。具有清心,豁痰，开窍，凉肝，息风，解毒的功能。用于热病神昏，中风痰迷，惊厥抽搐，癫痫发狂，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿丁疮等。牛黄含18种人体所需氨基酸及多种矿物质，其中甘氨酸含量最高.治疗流感、肝病、清腑热，热病神昏、谵语，癫痫发狂，小儿惊风抽搐，牙疳，喉肿，口舌生疮，炭疽，疔毒。内服可用治热毒风痰，蒙蔽清窍之高热神昏，惊悸抽搐等症。牛黄中含牛黄酸N 二硫代氨基甲酸钠，有改善肝功能，促进蛋白质合成的作用，有利胆保肝作用。牛黄能帮助脂肪消化，使胰酶素活化，并可与多种有机物结合成稳定的化合物，而起到解毒作用。关于三臣散质量标准收载于1995年版的《卫生部药品标准》藏药分册第一册，由于传统藏药基础研究比较薄弱，标准中只有制剂性状鉴别，没有制剂定性及定量指标的检测，不能完全有效的控制三臣散制剂的质量。
发明内容
有鉴于此，有必要提供一种三臣散质量检验方法，以通过该三臣散质量检验方法来有效的控制三臣散制剂的质量。一种三臣散质量检验方法，其特征在于包括以下步骤
三臣散的羟基红花黄色素A检测
取预定量羟基红花黄色素A并加入预定量有机溶剂作为羟基红花黄色素A对照品溶液；
取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后进行萃取以获得羟基红花黄色素A供试品溶液；
采用高效液相色谱法将羟基红花黄色素A对照品溶液与羟基红花黄色素A供试品溶液进行对比，以测定三臣散中羟基红花黄色素A的含量，其中色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0. 7%磷酸溶液为流动相，甲醇、乙腈、0. 7%磷酸溶液的体积比为26 2 72 ;检测波长为403nm ;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ；三臣散中的红花药材、人工牛黄药材的药效鉴别
取预定量红花对照药材并加入预定量有机溶剂后获得红花对照药材溶液；
取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后获得红花药材供试品溶液；
采用薄层色谱法将红花对照药材溶液与红花药材供试品溶液进行对比，以测定三臣散中红花药材药效成份的存在；
取预定量胆酸、去氧胆酸并加入预定量的有机溶剂制得人工牛黄药材对照溶液；
取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后进行萃取以获得人工牛黄药材供试品溶
液；
采用薄层色谱法将人工牛黄药材对照溶液与人工牛黄药材供试品溶液进行对比，以测定三臣散中人工牛黄药材供药效成份的存在。上述方法通过薄层色谱法与高效液相色谱法相结合来测定三臣散制剂的药效成分，实现了对三臣散制剂定性及定量的产品检测，确保药效成分的稳定性，并有利于生产过程的质量控制。
具体实施例方式 发明人在大量试验的基础上，参考2002年14 (6) . 18 “红花活性成分的研究”车庆明等、2010年4月《陕西中医学院学报》“红花中羟基红花黄色素A含量测定方法的改进”(王小平、刘峰等)文献，结合试验研究，最终获得采用薄层色谱法和高效液相色谱法测定三臣散制剂的药效成分的三臣散质量检验方法，通过该三臣散质量检验方法实现了对三臣散制剂定性及定量的产品检测，确保药效成分的稳定性，并有利于生产过程的质量控制，为少儿患者提供安全、有效的临床用药。上述三臣散质量检验方法，包括以下步骤
1.三臣散的羟基红花黄色素A检测
取预定量羟基红花黄色素A并加入预定量有机溶剂作为羟基红花黄色素A对照品溶
液；
取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后进行萃取以获得羟基红花黄色素A供试品溶液；
采用高效液相色谱法将羟基红花黄色素A对照品溶液与羟基红花黄色素A供试品溶液进行对比，以测定三臣散中羟基红花黄色素A的含量，其中色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0. 7%磷酸溶液为流动相，甲醇、乙腈、0. 7%磷酸溶液的体积比为26 2 72 ;检测波长为403nm ;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ；
2.三臣散中的红花药材、人工牛黄药材的药效鉴别
取预定量红花对照药材并加入预定量有机溶剂后获得红花对照药材溶液； 取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后获得红花药材供试品溶液；
采用薄层色谱法将红花对照药材溶液与红花药材供试品溶液进行对比，以测定三臣散中红花药材药效成份的存在；
取预定量胆酸、去氧胆酸并加入预定量的有机溶剂制得人工牛黄药材对照溶液；
取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后进行萃取以获得人工牛黄药材供试品溶
液；
采用薄层色谱法将人工牛黄药材对照溶液与人工牛黄药材供试品溶液进行对比，以测定三臣散中人工牛黄药材供药效成份的存在。在本实施方式中，“取预定量羟基红花黄色素A并加入预定量有机溶剂作为羟基红花黄色素A对照品溶液”的步骤具体为取预定量的羟基红花黄色素A对照品，加25%甲醇制成每Iml含0. 13mg的溶液，即得羟基红花黄色素A对照品溶液；“取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后进行萃取以获得羟基红花黄色素A供试品溶液”的步骤具体为取重量差异项下的三臣散，研细，取约3. 0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率3000W，频率50kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得羟基红花黄色素A供试品溶液；“采用高效液相色谱法将羟基红花黄色素A对照品溶液与羟基红花黄色素A供试品溶液进行对比，以测定三臣散中羟基红花黄色素A的含量”具体步骤为分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 u 1，注入液相色谱仪，采用外标法测定，即得。本品每片含红花以羟基红花黄色素A(C27H30015)计不得少于0. 50mg。预定量是指根据实际实验中的实际需求来设定一个定量值。在本实施方式中，“取预定量红花对照药材并加入预定量有机溶剂后获得红花对照药材溶液”的具体步骤为取红花对照药材0. 5g，研细，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟，静置，吸取上清液，作为红花对照药材溶液；“取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后获得红花药材供试品溶液”的具体步骤为取三臣散1. 5g，研细，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟，静置，吸取上清液，作为红花药材供试品溶液；“采用薄层色谱法将红花对照药材溶液与红花药材供试品溶液进行对比，以测定三臣散中红花药材药效成份的存在”的具体步骤为吸取上述两种溶液各5iU，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙脂、甲酸、/K、甲醇为展开剂，乙酸乙脂、甲酸、/K、甲醇体积比为7 :2 :3 :0. 4，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，如显相同颜色的斑点，则制剂中红花药材药效成分存在取预定量胆酸、去氧胆酸并加入预定量的有机溶剂制得人工牛黄药材对照溶液”的具体步骤为取胆酸、去氧胆酸对照品，加乙醇制成每Iml各含2mg的混合溶液，作为人工牛黄药材对照溶液；“取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后进行萃取以获得人工牛黄药材供试品溶液”的具体步骤为取三臣散3. Og,研细，加三氯甲烷20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为人工牛黄药材供试品溶液；“采用薄层色谱法将人工牛黄药材对照溶液与人工牛黄药材供试品溶液进行对比，以测定三臣散中人工牛黄药材供药效成份的存在”的具体步骤为吸取上述两种溶液各2 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷、乙酸乙脂、冰醋酸为展开剂，异辛烷、乙酸乙脂、冰醋酸体积比为15 7 :5，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，如显相同颜色的荧光斑点，则制剂中人工牛黄药效成分存在。本发明的特点主要为通过对色谱条件的优选、供试品制备方法的优化，建立了制剂中主要药效成分羟基红花黄色素A含量的高效液相色谱分析方法，并通过方法学验证试验验证其检测方法的可行性，研究结果表明检测方法线性关系良好，专属性试验考察无阴性干扰。制剂中药材鉴别方法准确、快捷，具有可操作性及适用性，采用上述检验方法可以准确检测三臣散制剂质量，确保三臣散制剂临床用药的有效性及安全性。
权利要求
1.一种三臣散质量检验方法，其特征在于包括以下步骤三臣散的羟基红花黄色素A检测取预定量羟基红花黄色素A并加入预定量有机溶剂作为羟基红花黄色素A对照品溶液；取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后进行萃取以获得羟基红花黄色素A供试品溶液；采用高效液相色谱法将羟基红花黄色素A对照品溶液与羟基红花黄色素A供试品溶液进行对比，以测定三臣散中羟基红花黄色素A的含量，其中色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-O. 7%磷酸溶液为流动相，甲醇、乙腈、O. 7%磷酸溶液的体积比为26 2 72 ;检测波长为403nm ;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000 ； 三臣散中的红花药材、人工牛黄药材的药效鉴别取预定量红花对照药材并加入预定量有机溶剂后获得红花对照药材溶液；取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后获得红花药材供试品溶液；采用薄层色谱法将红花对照药材溶液与红花药材供试品溶液进行对比，以测定三臣散中红花药材药效成份的存在；取预定量胆酸、去氧胆酸并加入预定量的有机溶剂制得人工牛黄药材对照溶液；取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后进行萃取以获得人工牛黄药材供试品溶液；采用薄层色谱法将人工牛黄药材对照溶液与人工牛黄药材供试品溶液进行对比，以测定三臣散中人工牛黄药材供药效成份的存在。
2.如权利要求1所述的三臣散质量检验方法，其特征在于“取预定量羟基红花黄色素 A并加入预定量有机溶剂作为羟基红花黄色素A对照品溶液”的步骤具体为取预定量的羟基红花黄色素A对照品，加25%甲醇制成每Iml含O. 13mg的溶液，即得羟基红花黄色素A 对照品溶液。
3.如权利要求1所述的三臣散质量检验方法，其特征在于“取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后进行萃取以获得羟基红花黄色素A供试品溶液”的步骤具体为取重量差异项下的三臣散，研细，取约3. 0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得羟基红花黄色素A供试品溶液。
4.如权利要求1所述的三臣散质量检验方法，其特征在于“取预定量红花对照药材并加入预定量有机溶剂后获得红花对照药材溶液”的具体步骤为取红花对照药材O. 5g，研细，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟，静置，吸取上清液，作为红花对照药材溶液；“取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后获得红花药材供试品溶液”的具体步骤为 取三臣散1. 5g，研细，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟，静置，吸取上清液，作为红花药材供试品溶液；“采用薄层色谱法将红花对照药材溶液与红花药材供试品溶液进行对比，以测定三臣散中红花药材药效成份的存在”的具体步骤为吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙脂、甲酸、水、甲醇为展开剂，乙酸乙脂、甲酸、水、甲醇体积比为7 2 3 :0. 4，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，如显相同颜色的斑点，则制剂中红花药材药效成分存在。
5.如权利要求1所述三臣散质量检验方法，其特征在于“取预定量胆酸、去氧胆酸并加入预定量的有机溶剂制得人工牛黄药材对照溶液”的具体步骤为取胆酸、去氧胆酸对照品，加乙醇制成每Iml各含2mg的混合溶液，作为人工牛黄药材对照溶液；“取预定量三臣散并加入预定量有机溶剂后进行萃取以获得人工牛黄药材供试品溶液”的具体步骤为取三臣散3. 0g，研细，加三氯甲烷20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为人工牛黄药材供试品溶液；“采用薄层色谱法将人工牛黄药材对照溶液与人工牛黄药材供试品溶液进行对比，以测定三臣散中人工牛黄药材供药效成份的存在”的具体步骤为吸取上述两种溶液各2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷、乙酸乙脂、冰醋酸为展开剂，异辛烷、乙酸乙脂、冰醋酸体积比为15 :7 :5，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，如显相同颜色的荧光斑点，则制剂中人工牛黄药效成分存在。
全文摘要
一种三臣散质量检验方法，采用高效液相色谱法将羟基红花黄色素A对照品溶液与羟基红花黄色素A供试品溶液进行对比，以测定三臣散中羟基红花黄色素A的含量，其中色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇、乙腈、0.7％磷酸溶液为流动相，甲醇、乙腈、0.7％磷酸溶液的体积比为26272；检测波长为403nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；采用薄层色谱法测定三臣散中红花药材及人工牛黄药材药效成份的存在。上述方法通过薄层色谱法与高效液相色谱法相结合来测定三臣散制剂的药效成分，实现了对三臣散制剂定性及定量的产品检测，确保药效成分的稳定性，并有利于生产过程的质量控制。
文档编号G01N30/02GK102998391SQ20121050898
公开日2013年3月27日 申请日期2012年12月4日 优先权日2012年12月4日
发明者王景, 王帆, 段江英, 冯艳, 王春红, 董艳萍 申请人:宁夏多维药业有限公司