用免疫层析技术检测小分子有机化合物的试纸条和方法
【专利摘要】本发明涉及用免疫层析技术检测小分子有机化合物的试纸条和方法，具体的，公开了一种用免疫层析技术检测小分子有机化合物的试纸条，包括：含光致发光微球标记的小分子有机化合物检测抗体的标记物垫、含小分子有机化合物抗原的捕获膜。本发明还公开了一种用免疫层析技术检测小分子有机化合物的方法，包括：将含小分子有机化合物的溶液滴加到前述试纸条的样品垫上，反应一段时间后用检测仪检测光信号。
【专利说明】用免疫层析技术检测小分子有机化合物的试纸条和方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明涉及纳米材料技术、免疫学技术、侧流层析技术等领域。更具体的，本发明涉及一种用免疫层析技术检测小分子有机化合物的试纸条；此外，本发明还涉及一种用免疫层析技术来检测小分子有机化合物的方法。
[0003]
【背景技术】
[0004]由于动物饲料中常含三聚氰胺，各种瘦肉精如盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等，各种抗生素如氯霉素、链霉素、四环素、青霉素、红霉素等，各种类固醇激素如己烯雌酚、甲孕酮、雌二醇、甲睾酮等，以及真菌毒素如黄曲霉毒素(主要有BI和Ml两类)、玉米赤霉烯酮等小分子有机化合物，所以动物奶、动物肉或内脏都有可能含这些小分子有机化合物，人食用这些动物奶、动物肉或动物内脏后就会对人体产生危害。三聚氰胺在体内积累到一定量后，会引起肾结石甚至肾衰竭，严重危害身体健康，对婴幼儿的危害尤其严重。瘦肉精如盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇属于b-兴奋剂，在人体内积累到一定量后会损伤心血管系统。而抗生素在人体的积累则会导致抗生素耐药性，链霉素、庆大霉素还会损害听力。类固醇激素中的雌激素、孕激素或雄激素在体内积累会影响青少年的性发育，在育龄妇女体内积累甚至会影响下一代的性发育。食物中含真菌毒素如黄曲霉毒素或玉米赤霉烯酮会使人致癌或不孕、流产。此外，可卡因、海洛因、吗啡、氯胺酮及美沙酮等毒品小分子有机化合物也严重危害人类的身心健康。运动员为提高成绩使用的兴奋剂如苯丙胺、麻黄碱、氯三苯乙烯及皮质类固醇等小分子有机化合物也会对身体造成严重伤害。
[0005]因此，有必要对饲料、奶、肉的原料和加工产品都进行这些小分子有机化合物的监测，也需要对吸毒者、运动员的体液进行检测。
[0006]目前检测小分子有机化合物的方法主要有色谱法、质谱法、酶联免疫分析法(ELISA)以及胶体金免疫层析法。其中色谱法、质谱法、ELISA都要用到昂贵的设备，需要专业技术人员在实验室中操作，而且操作步骤多，耗时长。胶体金免疫层析法则操作简单、方便、快速且便宜，但是其灵敏度较低，而且不能定量检测。因此有必要提供一种快速、方便、简单且高灵敏度的小分子有机化合物定量检测方法。
[0007]
【发明内容】
[0008]本发明旨在解决本领域中的上述各种问题和实现以下目标。具体地，本发明的目的就是要提供一种方便、快速而且高灵敏度地检测样品中的小分子有机化合物的试纸条和方法。
[0009]具体的，本发明提供了一种用免疫层析技术检测样品中的小分子有机化合物的试纸条。
[0010]在一种实施方式中，本发明提供了一种用免疫层析技术检测小分子有机化合物的试纸条，包括标记物垫和捕获膜，其特征在于，所述标记物垫含有光致发光微球标记的小分子有机化合物检测抗体，所述捕获膜含有小分子有机化合物抗原。
[0011]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述小分子有机化合物是三聚氰胺。
[0012]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述小分子有机化合物是瘦肉精。
[0013]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述瘦肉精是盐酸克伦特罗。
[0014]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述瘦肉精是莱克多巴胺。
[0015]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述小分子有机化合物是抗生素。
[0016]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述抗生素是氯霉素。
[0017]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述抗生素是链霉素。
[0018]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述小分子有机化合物是类固醇激素。
[0019]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述类固醇激素是己烯雌酚。
[0020]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述类固醇激素是甲孕酮。
[0021]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述小分子有机化合物是真菌毒素。
[0022]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述真菌毒素是黄曲霉毒素。
[0023]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述真菌毒素是玉米赤霉烯酮。
[0024]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述光致发光微球是突光微球。
[0025]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述光致发光微球是时间分辨突光微球。
[0026]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述时间分辨荧光微球是含铕复合物的荧光微球。
[0027]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述光致发光微球是磷光微球。
[0028]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述磷光微球是含钼复合物的磷光微球。
[0029]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述光致发光微球是二氧化娃微球。
[0030]在进一步的实施方式中，其特征在于，所述光致发光微球是聚苯乙烯微球。
[0031]在另一种实施方式中，本发明提供了一种用免疫层析技术检测小分子有机化合物的方法，其特征在于，在权利要求1所述的试纸条样品垫上滴加含小分子有机化合物的样品，反应后检测光信号。
[0032]详细说明
用免疫层析技术检测样品中小分子有机化合物的试纸条如图1示，包括样品垫1，标记物垫2，捕获膜3，吸水垫4，支撑底板5。捕获膜3上含有C线6和T线7。
[0033]其中样品垫一般为玻璃纤维、滤纸或滤血膜。标记物垫可为玻璃纤维、滤纸或聚酯膜。当样品垫和标记物垫材质相同时可整合在一起，用一条玻璃纤维、滤纸或聚酯膜来完成样品垫和标记物垫的功能。所述标记物垫含有光致发光微球标记的小分子有机化合物检测抗体，还可以含有光致发光微球标记的对照蛋白或抗体，如链亲和素或兔抗体。
[0034]捕获膜可以是硝酸纤维素膜(NC膜)、尼龙膜等，所述捕获膜的T线含有小分子有机化合物抗原，C线为阳性对照，C线可含有能结合小分子有机化合物检测抗体的二抗，也可含有其他可做阳性对照的蛋白或抗体，如生物素标记的牛血清白蛋白或卵清蛋白(标记物垫上含链亲和素)，或者羊抗兔抗体(标记物垫上含兔抗体)。
[0035]用免疫层析技术检测样品中小分子有机化合物的方法，如图1示，当样品溶液滴加到试纸条的样品垫I上后，液体将沿水平箭头方向移动，先到达标记物垫2，样品中的小分子有机化合物将与标记物垫2中光致发光微球标记的小分子有机化合物检测抗体结合形成复合物，即‘小分子有机化合物-小分子有机化合物检测抗体?光致发光微球’，除此之外，溶液中还含有未与小分子有机化合物结合的‘小分子有机化合物检测抗体?光致发光微球’，当溶液继续移动到达捕获膜的T线时，溶液中的‘小分子有机化合物检测抗体?光致发光微球’将与此处的小分子有机化合物抗原形成‘小分子有机化合物抗原-小分子有机化合物检测抗体?光致发光微球’复合物并被固定在T线上，而在到达T线前形成的‘小分子有机化合物-小分子有机化合物检测抗体?光致发光微球’则继续移动，可被C线处能结合小分子有机化合物检测抗体的二抗结合。随后用检测仪来检测T线上的荧光/磷光信号，并与光信号-小分子有机化合物浓度标准曲线比较计算出待测样品中小分子有机化合物的浓度。
[0036]由于T线处小分子有机化合物抗原捕获的光致发光微球包含有很多光致发光分子(荧光分子或磷光分子)，所以T线处可以检测到很强的光信号，从而使这种免疫层析技术检测小分子有机化合物的方法有很高的灵敏度。当光致发光分子是时间分辨荧光复合物或磷光复合物时，由于发射光有数百微秒到数毫秒的突光寿命，可以在激发光撤掉后数十微秒到数百微秒检测发射光信号，此时激发光和背景荧光都已经消失，只有光致发光分子特异的荧光或磷光信号，所以检测的特异性和灵敏度都大大提高。
[0037]本发明中的‘小分子有机化合物’指分子量在1000道尔顿以下主要由碳、氢、氧组成的化合物，包括但不限于:三聚氰胺，各种瘦肉精如盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等，各种抗生素如氯霉素、链霉素、四环素、青霉素、红霉素等，各种类固醇激素如己烯雌酚、甲孕酮、雌二醇、甲睾酮等，各种真菌毒素如黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮等，各种毒品如可卡因、海洛因、吗啡、氯胺酮、美沙酮等以及各种兴奋剂如苯丙胺、麻黄碱、氯三苯乙烯及皮质类固醇等。
[0038]本发明中的‘微球’可以是二氧化硅微球、聚苯乙烯微球或其他高分子微球，微球直径在1nm到10 μ m之间,其表面可带有羧基、氨基或酮基等官能团。
[0039]本发明中的‘光致发光微球’指球体中包埋了光致发光分子的微球。所述‘光致发光分子’包括荧光素、罗丹明等荧光分子或其衍生物、铕复合物、钐复合物、铽复合物等镧系元素复合物荧光分子以及钼复合物、钯复合物等磷光分子，其中铕复合物为铕与配体螯合后再与其他有机分子形成的复合物，钼复合物为钼与配体(包括卟啉、叶吩、吡啶及其衍生物)螯合形成的复合物，其中铕复合物又为时间分辨荧光复合物，钼复合物又为磷光复合物。
[0040]本发明中的‘光致发光微球标记的小分子有机化合物检测抗体’指跟光致发光微球耦联的小分子有机化合物抗体。更具体的，小分子有机化合物抗体为用跟牛血清白蛋白(BSA )、卵清蛋白或其他蛋白耦联的小分子有机化合物免疫动物后动物血液中出现的能跟小分子有机化合物特异性结合的抗体。
[0041]本发明中的‘小分子有机化合物抗原’指结合在试纸条捕获膜上的小分子有机化合物抗原。该小分子有机化合物抗原为小分子有机化合物与蛋白或核酸片段的耦合物，该蛋白可以是BSA、卵清蛋白或其他蛋白，该核酸片段可以是包含10到1000个核苷酸的片段，核酸在紫外光作用下可与捕获膜结合。
[0042]本发明中试纸条捕获膜上的‘T线’指小分子有机化合物抗原所在的区域，也就是光致发光微球标记的小分子有机化合物抗体与小分子有机化合物抗原结合的区域。
[0043]本发明中试纸条捕获膜上的‘C线’指光致发光微球标记的小分子有机化合物检测抗体与其二抗结合的区域，或者其他作为阳性对照的抗体或抗原所在的区域。
[0044]因为小分子有机化合物可以在动物体内累积，所以食品中即使含少量的小分子有机化合物，长期食用也会对身体产生伤害。而本发明可以通过免疫层析法方便、简单、快速并且高灵敏度地检测样品中的小分子有机化合物，避免含小分子有机化合物的食物被人或动物食用而对身体产生伤害。
[0045]
【专利附图】
【附图说明】
[0046]根据一个或多个不同的实施方式，参考下列附图对本发明进行了详细描述。附图仅为示例目的而提供，并且仅描述本发明典型或示例性的实施方式。这些附图被提供以促进读者对本发明的理解，将不被认为限制本发明的宽度、范围或应用性。
[0047]图1是本发明中免疫层析检测小分子有机化合物的试纸条示意图。图1中，附图标记1-7说明:1_样品垫；2_标记物垫；3_捕获膜；4_吸水垫；5_支撑底板；6-C线；7_T线。
[0048]图2是实施例中用免疫层析法所得荧光强度与三聚氰胺浓度的关系曲线。
[0049]
【具体实施方式】
[0050]实施例1，用免疫层析检测样品中三聚氰胺的试纸条的制备图1所示的用免疫层析检测三聚氰胺的试纸条准备方法如下:
1，羧基修饰的含铕复合物的S12微球由长春志昂生物科技有限公司提供，三聚氰胺抗体以及三聚氰胺抗原由北京为康惠华生物技术有限公司提供。
[0051]2,突光微球与三聚氰胺抗体的f禹联
将200 μ I 20mM PBS, pH7.4，固含量1%的荧光微球与6毫克碳化二亚胺混合，室温振荡30分钟，12，OOOrpm离心10分钟，用硼酸盐缓冲液清洗2次，将活化的荧光微球重悬于300 μ I硼酸盐缓冲液中。在微球悬液中加入200 μ I lmg/ml的三聚氰胺抗体，在室温下振荡反应2.5小时。将反应后的溶液于12，OOOrpm离心10分钟，加入400 μ I 0.25Μ乙醇胺在室温再振荡30分钟。将反应后的溶液离心后再用PBS缓冲液洗2次。离心沉淀后加Λ 300 μ I 2mg/ml的BSA重悬，常温振荡30分钟后用PBS洗3次，再用200 μ I 50mM PBS,pH7.4, 0.1% Tween 20, 5%蔗糖重悬荧光微球标记的三聚氰胺抗体。
[0052]3，荧光微球标记的三聚氰胺抗体处理标记物垫，三聚氰胺抗原以及羊抗鼠抗体(美国Sigma公司)处理捕获膜
将荧光微球标记的三聚氰胺抗体溶液用B1Dot喷膜仪喷到标记物垫(Millipore公司)上，喷速为10 μ 1/cm。将lmg/ml三聚氰胺抗原以及lmg/ml羊抗鼠抗体用B1Dot公司喷膜仪划线捕获膜(Millipore公司NC膜)，划线速度为3 μ Ι/cm。然后将喷好的标记物垫和捕获膜置于37° C恒温箱中干燥I小时，再将标记物垫上含有荧光微球标记的三聚氰胺抗体的部分切割下来，得到5mm宽,30cm长的条带。
[0053]4，试纸条大卡的组装与切割
按照图1中试纸条的结构所示，将捕获膜首先粘贴在支撑底板(Millipore公司)上，在靠T线一侧先后粘贴标记物垫以及样品垫(Millipore公司)，在靠C线一侧粘贴吸水垫(Millipore公司),然后用B1Dot公司切割机切割成5mm宽的试纸条,于招箔袋中封闭保存备用。
[0054]实施例2，用免疫层析法检测样品中的三聚氰胺
将 100 μ I 含 Omg/L, 0.05mg/L, 0.lmg/L, 0.2mg/L, 0.5mg/L, lmg/L, 2mg/L,I Omg/L, 20mg/L, 50mg/L, lOOmg/L的三聚氰胺溶液分别滴加到免疫层析试纸条上,反应15分钟后用荧光检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测荧光信号，然后用荧光强度相对三聚氰胺浓度作图得荧光强度对三聚氰胺浓度的标准曲线如图2。
[0055]将100 μ I含三聚氰胺的牛奶滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测荧光信号，将荧光强度结合标准曲线计算得三聚氰胺浓度为0.15mg/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测三聚氰胺的方法是可靠的。
[0056]实施例3，用免疫层析法检测样品中的盐酸克伦特罗
检测盐酸克伦特罗的试纸条制备方法同实施例1，其中的三聚氰胺抗体更换为盐酸克伦特罗抗体，三聚氰胺抗原更换为盐酸克伦特罗抗原，盐酸克伦特罗的抗原和抗体同样由北京为康惠华生物技术有限公司提供。
[0057]将100 μ I 含 O μ g/L, 0.1 μ g/L, 0.2 μ g/L, I μ g/L, 2 μ g/L, 10 μ g/L,20 μ g/L, 100 μ g/L的盐酸克伦特罗溶液分别滴加到免疫层析试纸条上，反应15分钟后用荧光检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测荧光信号，然后用荧光强度相对盐酸克伦特罗浓度作图得荧光强度对盐酸克伦特罗浓度的标准曲线。
[0058]取100 μ I含盐酸克伦特罗的动物尿液滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测荧光信号，将荧光强度结合标准曲线计算得盐酸克伦特罗浓度为2.5μ g/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测盐酸克伦特罗的方法是可靠的。
[0059]实施例4，用免疫层析法检测样品中的莱克多巴胺
检测莱克多巴胺的试纸条制备方法同实施例1，其中的三聚氰胺抗体更换为莱克多巴胺抗体，三聚氰胺抗原更换为莱克多巴胺抗原，莱克多巴胺的抗原和抗体也由北京为康惠华生物技术有限公司提供。
[0060]将100 μ I 含 0yg/L，0.1 μ g/L, 0.2 μ g/L, I μ g/L, 2 μ g/L, 10 μ g/L,20 μ g/L, 100 μ g/L的莱克多巴胺溶液分别滴加到免疫层析试纸条上，反应15分钟后用荧光检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测荧光信号，然后用荧光强度相对莱克多巴胺浓度作图得荧光强度对莱克多巴胺浓度的标准曲线。
[0061]取100 μ I含莱克多巴胺的动物尿液滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测荧光信号，将荧光强度结合标准曲线计算得莱克多巴胺浓度为4.5μ g/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测莱克多巴胺的方法是可靠的。
[0062]实施例5，用免疫层析法检测样品中的氯霉素
检测氯霉素的试纸条制备方法同实施例1，其中的三聚氰胺抗体更换为氯霉素抗体，三聚氰胺抗原更换为氯霉素抗原，氯霉素的抗原和抗体由北京为康惠华生物技术有限公司提供。
[0063]将100 μ I 含 O μ g/L, 0.05 μ g/L, 0.1 μ g/L, 0.5 μ g/L, I μ g/L, 5 μ g/L,10 μ g/L, 50 μ g/L的氯霉素溶液分别滴加到免疫层析试纸条上,反应15分钟后用荧光检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测荧光信号，然后用荧光强度相对氯霉素浓度作图得荧光强度对氯霉素浓度的标准曲线。
[0064]取100 μ I含氯霉素的牛奶滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测荧光信号，将荧光强度结合标准曲线计算得氯霉素浓度为1.5μ g/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测氯霉素的方法是可靠的。
[0065]实施例6，用免疫层析法检测样品中的链霉素
检测链霉素的试纸条制备方法同实施例1，其中的三聚氰胺抗体更换为链霉素抗体，三聚氰胺抗原更换为链霉素抗原，链霉素的抗原和抗体也由北京为康惠华生物技术有限公司提供。
[0066]将100 μ I 含 O μ g/L, 0.05 μ g/L, 0.1 μ g/L, 0.5 μ g/L, I μ g/L, 5 μ g/L,10 μ g/L, 50 μ g/L的链霉素溶液分别滴加到免疫层析试纸条上,反应15分钟后用荧光检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测荧光信号，然后用荧光强度相对链霉素浓度作图得荧光强度对链霉素浓度的标准曲线。
[0067]取100 μ I含链霉素的牛奶滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测荧光信号，将荧光强度结合标准曲线计算得链霉素浓度为2.5μ g/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测链霉素的方法是可靠的。
[0068]实施例7，用免疫层析检测样品中雌二醇的试纸条的制备用免疫层析检测雌二醇的试纸条准备方法如下:
羧基修饰的含钼复合物的聚苯乙烯微球由长春志昂生物科技有限公司提供，雌二醇抗体以及雌二醇抗原由广州健仑生物科技有限公司提供。
[0069]雌二醇抗体与磷光微球的耦联、标记物垫及捕获膜的处理、试纸条的组装同实施例I。
[0070]实施例8，用免疫层析法检测样品中的雌二醇
将 100 μ I 含 O μ g/L, 0.05 μ g/L, 0.1 μ g/L, 0.5 μ g/L, I μ g/L, 5 μ g/L, 10 μ g/L, 50 μ g/L的雌二醇溶液分别滴加到免疫层析试纸条上，反应15分钟后用检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测磷光信号，然后用磷光强度相对雌二醇浓度作图得磷光强度对雌二醇浓度的标准曲线。
[0071]取100 μ I含雌二醇的牛奶滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测磷光信号，将磷光强度结合标准曲线计算得雌二醇浓度为0.35μ g/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测雌二醇的方法是可靠的。
[0072]实施例9，用免疫层析法检测样品中的己烯雌酚
检测己烯雌酚的试纸条制备方法同实施例7，其中的雌二醇抗体更换为己烯雌酚抗体，雌二醇抗原更换为己烯雌酚抗原，己烯雌酚的抗原和抗体也由广州健仑生物科技有限公司提供。
[0073]将100 μ I 含 O μ g/L, 0.05 μ g/L, 0.1 μ g/L, 0.5 μ g/L, I μ g/L, 5 μ g/L,10 μ g/L, 50 μ g/L的己烯雌酚溶液分别滴加到免疫层析试纸条上，反应15分钟后用检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测磷光信号，然后用磷光强度相对己烯雌酚浓度作图得磷光强度对己烯雌酚浓度的标准曲线。
[0074]取100 μ I含己烯雌酚的牛奶滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测磷光信号，将磷光强度结合标准曲线计算得己烯雌酚浓度为0.25μ g/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测己烯雌酚的方法是可靠的。
[0075]实施例10，用免疫层析法检测样品中的甲孕酮
检测甲孕酮的试纸条制备方法同实施例7，其中的雌二醇抗体更换为甲孕酮抗体，雌二醇抗原更换为甲孕酮抗原，甲孕酮的抗原和抗体也由广州健仑生物科技有限公司提供。
[0076]将100 μ I 含 O μ g/L, 0.05 μ g/L, 0.1 μ g/L, 0.5 μ g/L, I μ g/L, 5 μ g/L,10 μ g/L, 50 μ g/L的甲孕酮溶液分别滴加到免疫层析试纸条上，反应15分钟后用检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测磷光信号，然后用磷光强度相对甲孕酮浓度作图得磷光强度对甲孕酮浓度的标准曲线。
[0077]取100 μ I含甲孕酮的牛奶滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测磷光信号，将磷光强度结合标准曲线计算得甲孕酮浓度为0.2μ g/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测甲孕酮的方法是可靠的。
[0078]实施例11，用免疫层析法检测样品中的甲睾酮
检测甲睾酮的试纸条制备方法同实施例7，其中的雌二醇抗体更换为甲睾酮抗体，雌二醇抗原更换为甲睾酮抗原，甲睾酮的抗原和抗体也由广州健仑生物科技有限公司提供。
[0079]将100 μ I 含 O μ g/L, 0.05 μ g/L, 0.1 μ g/L, 0.5 μ g/L, I μ g/L, 5 μ g/L,10 μ g/L, 50 μ g/L的甲睾酮溶液分别滴加到免疫层析试纸条上，反应15分钟后用检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测磷光信号，然后用磷光强度相对甲睾酮浓度作图得磷光强度对甲睾酮浓度的标准曲线。
[0080]取100 μ I含甲睾酮的牛奶滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测磷光信号，将磷光强度结合标准曲线计算得甲睾酮浓度为0.3μ g/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测甲睾酮的方法是可靠的。
[0081]实施例12，用免疫层析法检测样品中的黄曲霉毒素
用免疫层析检测黄曲霉毒素(此处检测Ml)的试纸条准备方法如下:
羧基修饰的含铕复合物的聚苯乙烯微球由长春志昂生物科技有限公司提供，黄曲霉毒素抗体以及黄曲霉毒素抗原由北京为康惠华生物技术有限公司提供。
[0082]黄曲霉毒素抗体与荧光微球的耦联、标记物垫及捕获膜的处理、试纸条的组装同实施例1。
[0083]将100 μ I 含 O μ g/L, 0.05 μ g/L, 0.1 μ g/L, 0.5 μ g/L, I μ g/L, 5 μ g/L,10 μ g/L, 50 μ g/L的黄曲霉毒素溶液分别滴加到免疫层析试纸条上，反应15分钟后用检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测荧光信号，然后用荧光强度相对黄曲霉毒素浓度作图得荧光强度对黄曲霉毒素浓度的标准曲线。
[0084]取100 μ I含黄曲霉毒素的牛奶滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测荧光信号，将荧光强度结合标准曲线计算得黄曲霉毒素浓度为0.45yg/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测黄曲霉毒素的方法是可靠的。
[0085]实施例13，用免疫层析法检测样品中的玉米赤霉烯酮检测玉米赤霉烯酮的试纸条制备方法同实施例12，其中的黄曲霉毒素抗体更换为玉米赤霉烯酮抗体，黄曲霉毒素抗原更换为玉米赤霉烯酮抗原，玉米赤霉烯酮的抗原和抗体也由北京为康惠华生物技术有限公司提供。
[0086]将100 μ I 含 O μ g/L, 0.05 μ g/L, 0.1 μ g/L, 0.5 μ g/L, I μ g/L, 5 μ g/L,10 μ g/L, 50 μ g/L的玉米赤霉烯酮溶液分别滴加到免疫层析试纸条上，反应15分钟后用检测仪(上海海跃塑模有限公司)检测荧光信号，然后用荧光强度相对玉米赤霉烯酮浓度作图得荧光强度对玉米赤霉烯酮浓度的标准曲线。
[0087]取100 μ I含玉米赤霉烯酮的尿液滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，反应15分钟后检测荧光信号，将荧光强度结合标准曲线计算得玉米赤霉烯酮浓度为0.4μ g/L，与用ELISA法检测的结果一致，说明免疫层析定量检测玉米赤霉烯酮的方法是可靠的。
[0088]虽然本申请详细描述了具体的实施例，但本申请不限于这些实施例，相反，其意图涵盖包括在实施例的精神和范围内的各种修改和等同方案，在一些具体情况下，可以缺少和增加某个或某些技术特征而不脱离本发明的精神和范围，本申请的范围仅由权利要求书限定。
【权利要求】
1.一种用免疫层析技术检测小分子有机化合物的试纸条，包括标记物垫和捕获膜，其特征在于，所述标记物垫含有光致发光微球标记的小分子有机化合物检测抗体，所述捕获膜含有小分子有机化合物抗原。
2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述小分子有机化合物是三聚氰胺。
3.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述小分子有机化合物是瘦肉精。
4.如权利要求3所述的试纸条，其特征在于，所述瘦肉精是盐酸克伦特罗。
5.如权利要求3所述的试纸条，其特征在于，所述瘦肉精是莱克多巴胺。
6.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述小分子有机化合物是抗生素。
7.如权利要求6所述的试纸条，其特征在于，所述抗生素是氯霉素。
8.如权利要求6所述的试纸条，其特征在于，所述抗生素是链霉素。
9.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述小分子有机化合物是类固醇激素。
10.如权利要求9所述的试纸条，其特征在于，所述类固醇激素是己烯雌酚。
11.如权利要求9所述的试纸条，其特征在于，所述类固醇激素是甲孕酮。
12.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述小分子有机化合物是真菌毒素。
13.如权利要求13所述的试纸条，其特征在于，所述真菌毒素是黄曲霉毒素。
14.如权利要求13所述的试纸条，其特征在于，所述真菌毒素是玉米赤霉烯酮。
15.如权利要求1-14任一项所述的试纸条,其特征在于,所述光致发光微球是突光微球。
16.如权利要求15所述的试纸条,其特征在于,所述突光微球是时间分辨突光微球。
17.如权利要求16所述的试纸条，其特征在于，所述时间分辨荧光微球是含铕复合物的突光微球。
18.如权利要求1-14任一项所述的试纸条，其特征在于，所述光致发光微球是磷光微球。
19.如权利要求18所述的试纸条，其特征在于，所述磷光微球是含钼复合物的磷光微球。
20.如权利要求1-14任一项所述的试纸条，其特征在于，所述光致发光微球是二氧化娃微球。
21.如权利要求1-14任一项所述的试纸条，其特征在于，所述光致发光微球是聚苯乙烯微球。
22.一种用免疫层析技术检测小分子有机化合物的方法，其特征在于，在权利要求1所述的试纸条样品垫上滴加含小分子有机化合物的样品，反应后检测光信号。
【文档编号】G01N33/558GK104345144SQ201310319225
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2013年7月28日 优先权日:2013年7月28日
【发明者】杨挥 申请人:嘉兴朝云帆生物科技有限公司