一种用于检测尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒及其方法
【专利摘要】本发明提供了一种用于检测尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒，包括两种试剂，Ⅰ试剂由磷酸盐缓冲液组成，Ⅱ试剂是兔抗人纤维连接蛋白抗血清、或羊抗人纤维连接蛋白抗血清、或鼠抗人纤维连接蛋白抗血清、或鼠抗人纤维连接蛋白单克隆抗体交联在胶乳颗粒上构成的悬浊液。解决了现有技术采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定纤维连接蛋白浓度步骤复杂，准确性不高、重复性差问题。本发明还提供采用上述试剂盒检测人尿液中纤维连接蛋白浓度的方法，本发明的试剂盒和方法用于测定尿液中纤维连接蛋白浓度步骤简单，准确度高、重复性好，用于自动化分析仪。
【专利说明】一种用于检测尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒及其方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种检测试剂盒，特别是一种采用增强胶乳免疫比浊法检测人尿液中纤维连接蛋白又称纤维结合蛋白(FN)浓度的试剂盒及其方法。
【背景技术】
[0002]纤维连接蛋白又称纤维结合蛋白(Fibronectin,简称FN),有两条相类似的多肽链亚基组成，亚基的分子量为220-250KD。现有技术中采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定尿液中纤维连接蛋白(FN)浓度，其缺点为操作繁琐、工作强度大、保持时间长，一般需8-48小时、其定量的精确度差。
[0003]因尿液中纤维连接蛋白(FN)的浓度低，所以国内外至今未见有用本试剂盒及方法的报导。
【发明内容】
[0004]针对现有技术中存在的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种用于检测尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒及其方法，所述的这种用于检测尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒及其方法要解决现有技术中采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定尿纤维连接蛋白(FN)浓度过程复杂，准确性不高的技术问题。
[0005]本发明提供了一种用于检测尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒，包括两种试剂，I试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000-8000、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-NA2)和曲拉通100 (TX-100)组成，在所述的I试剂中，所述的磷酸氢二钠的质量百分比浓度为28.6g/L，所述的磷酸二氢钾的质量百分比浓度为2.7g/L，所述的PEG6000-8000的质量百分比浓度为50g/L，所述的EDTA-NA2的质量百分比浓度为lg/L，所述的TX-100的体积浓度为0.2ml/L, II试剂是兔抗人纤维连接蛋白抗血清、或羊抗人纤维连接蛋白抗血清、或鼠抗人纤维连接蛋白抗血清、或鼠抗人纤维连接蛋白单克隆抗体交联在胶乳颗粒上构成的悬浊液。
[0006]进一步的，所述的II试剂是利用碳二亚胺反应将兔抗人纤维连接蛋白抗血清、或羊抗人纤维连接蛋白抗血清、或鼠抗人纤维连接蛋白抗血清、或纯化后的鼠抗人纤维连接蛋白单克隆抗体IgG共价结合到胶乳颗粒上。
[0007]具体的，胶乳颗粒的直径为60 - 160nm，材料为聚苯乙烯。
[0008]具体的，上述的曲拉通100的纯度为100%。
[0009]进一步的，所述的兔抗人纤维连接蛋白抗血清、或羊抗人纤维连接蛋白抗血清、或鼠抗人纤维连接蛋白抗血清的效价为1:64。
[0010]本发明还提供了一种检测人尿液中纤维连接蛋白(FN)浓度的方法，采用上述的试剂盒，包括一个将尿样本采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将尿样本采用生化分析仪测定的步骤中，将尿样品加入第一种试剂Rl后，37°C孵育5min，读测第I点样本Al，加入第二种试剂R2，37°C孵育5min，读测第2点样本A2，样本A=样本A2-样本Al ;还包括一个将尿校准品采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将尿校准采用生化分析仪测定的步骤中，将尿校准品加入第一种试剂Rl后，37°C孵育5min，读测第I点校准Al，加入第二种试剂R2，37°C孵育5min，读测第2点校准A2，校准A=校准A2-校准Al ；
[0011]结果计算:
[0012]
【权利要求】
1.一种用于检测尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒，包括两种试剂，其特征在于:I试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000-8000、EDTA-NA2和TX-1OO组成，在所述的I试剂中，所述的磷酸氢二钠的质量百分比浓度为28.6g/L，所述的磷酸二氢钾的质量百分比浓度为2.7g/L，所述的PEG6000-8000的质量百分比浓度为50g/L，所述的EDTA-NA2的质量百分比浓度为lg/L，所述的TX-100的体积浓度为0.2ml/L, II试剂是兔抗人纤维连接蛋白抗血清、或羊抗人纤维连接蛋白抗血清、或鼠抗人纤维连接蛋白抗血清、或鼠抗人纤维连接蛋白单克隆抗体交联在胶乳颗粒上构成的悬浊液。
2.如权利要求1所述的一种用于检测尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒，其特征在于:所述的II试剂是利用碳二亚胺反应将兔抗人纤维连接蛋白抗血清、或羊抗人纤维连接蛋白抗血清、或鼠抗人纤维连接蛋白抗血清、或纯化后的鼠抗人纤维连接蛋白单克隆抗体IgG共价结合到胶乳颗粒上。
3.如权利要求1所述的一种用于检测尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒，其特征在于:所述的兔抗人纤维连接蛋白抗血清、或羊抗人纤维连接蛋白抗血清、或鼠抗人纤维连接蛋白抗血清的效价为1:64。
4.采用权利要求1的试剂盒检测尿液中纤维连接蛋白浓度的方法，其特征在于:包括一个将尿样本采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将尿样本采用生化分析仪测定的步骤中，将尿样品加入第一种试剂Rl后，37°C孵育5min，读测第I点样本Al，加入第二种试剂R2，37°C孵育5min，读测第2点样本A2，样本A=样本A2-样本Al ;还包括一个将校准品采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将校准品采用生化分析仪测定的步骤中，将校准品加入第一种试剂Rl后，37°C孵育5min，读测第I点校准Al，加入第二种试剂R2，37°C孵育5min，读测第2点校准A2，校准A=校准A2-校准Al ；
样木A2-样木ΛI 尿液纤维连接蛋G (FN )浓度(mg/L) = - X校准品浓度(mg/L)
—校准A2-校准Al—` 上述测定的参数为:温度37°C，主波长546nm或600nm、副波长700nm，样本或校准品3-4 μ !,R1:240 μ 1，R2:60 μ 1，反应时间为 10 分钟。
【文档编号】G01N21/31GK103675299SQ201310724601
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月24日 优先权日:2013年12月24日
【发明者】杨杰, 王泉龙, 朱晓敏, 刘颖冰 申请人:上海北加生化试剂有限公司