专利名称：全血乳酸浓度检测试纸条的制作方法
技术领域：
本发明涉及利用显色反应检测全血中乳酸浓度的试纸条，用于定量快速测量血液乳酸水平。
背景技术：
乳酸(Lactic acid，LA)为体内糖酵解的最终产物。代谢性酸中毒最常见的一种类型就是乳酸升高性酸中毒。如呼吸衰竭、组织缺氧、败血症、恶性肿瘤导致组织耗氧量增加，糖乳病酮症都可引起乳酸浓度升高。肝病、多种药物反应及中毒等情况下，也可有乳酸浓度增加。
近年来，在诊断中，血液乳酸浓度的含量得到越来越多的重视。以往，血液乳酸主要在大型血液生化分析仪上进行测试。但该方法存在的问题是需要使用特殊装置，测定所需血量较多、时间较长，价格昂贵，适合在大型医院中能够进行。本发明的目的在于为病人家庭和小型诊所提供一种能够方便快速测量血液乳酸含量的试纸，这种试纸与微型仪器联用可以快速方便地测试全血中的乳酸浓度，无需依赖大型血液生化分析仪。该发明只需微量血液便可在一分钟内测出血液乳酸的含量。
技术内容本发明的目的在于提供一种能够在各种场所方便快速测量血液乳酸含量的试纸条。并且本发明只需微量血液便可在短时间内测出血液乳酸的含量。
本发明的全血乳酸浓度检测试纸条，包括用于做试纸条支架的疏水基底，疏水基底上开有通孔，通孔内放有相同形状、大小的血细胞阻隔膜，通孔外一侧对应位置覆有酶膜。通孔的大小为允许所加血液样本从该通孔流入血细胞阻隔膜和酶膜内。
所述的酶膜包括基材，基材上固定有乳酸氧化酶和过氧化物酶、显色剂。基材为具有一定孔径的尼龙膜、醋酸纤维素膜、纤维素膜、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜等，优选为尼龙膜。乳酸氧化酶的含量为每平方厘米0.01-200μ活性单位，优选为每平方厘米0.5-10μ活性单位；过氧化物酶的含量为每平方厘米0.01-200μ活性单位，优选为每平方厘米0.2-15μ活性单位。显色剂可以是单一组分的显色剂或双组分的显色剂，其中单一组分的显色剂包括芳香醇、芳香胺、联苯胺等，如邻-联(二)茴香胺；双组分的显色剂典型的有3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐(MBTH-DMAB)、3，5-二氯-2-羧基苯磺酸(DCHBS)和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐(MBTH)等，优选为3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐(MBTH-DMAB)。
所述的疏水基底为聚氯乙烯材料。所述的血细胞阻隔膜由高分子材料制成，有一定的过滤孔径，可以将血液中的血细胞与血浆有效分离，保证全血样品经过血细胞阻隔膜后，带有颜色的血细胞被截留在细胞阻隔膜之上，只有血浆到达酶膜，参与反应。
这样，当酶膜上的试剂与血液样品发生反应时，生成的颜色物质在590nm处被检测时，不会受到血细胞颜色的干扰。
在本发明中，制作该检测试纸条的方法包括以下步骤(1)准备一个尼龙膜，该尼龙膜的带电性可以根据溶液pH的改变而改变；(2)配置包含显色剂3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐的溶液，将尼龙膜浸渍在配好的上述溶液中一段时间，取出干燥；(3)配置包含乳酸氧化酶和过氧化物酶的酶液，将(2)干燥好的尼龙膜再浸入酶液中一段时间，取出干燥；
(4)将制好的酶膜粘贴在一个疏水基底1的开口处；(5)将裁好的与疏水基底1开口同样大小的血细胞阻隔膜放入开口，与酶膜相接触；(6)依照上述方法制好检测试纸条后，将血液样品滴在试纸条的开口处，样品中的待测物乳酸通过血细胞阻隔膜后到达酶膜，与酶膜上的试剂反应，生成颜色物质，颜色物质渗透到酶膜的背面，形成颜色区；(7)用波长为590nm的光源照射颜色区，用光电转换器接收来自颜色区的反射光，反射光的强度与颜色的深浅成反比，而颜色的深浅反应被测血液样品中乳酸的浓度。
本发明所描述的构建试纸条的方法并不限于本发明，该方法除可用于本发明外，还可用于构建用于测量其它血液参数的试纸条，例如葡萄糖、尿酸、血酮、胆固醇等。
图1为本发明的纵向剖面结构示意图；图2为本发明的一平面结构示意图；图3为本发明的另一平面结构示意图；图4为本发明一实施例测量的乳酸试纸条吸光度-浓度曲线图。
具体实施例方式
一种用于测量全血中乳酸浓度的试纸条结构如图1、图2和图3所示，包括用于做试纸条支架的疏水基底1，疏水基底上开有通孔，通孔内设有相同形状、大小的血细胞阻隔膜3，通孔外一侧对应位置覆有酶膜2。通孔的大小为允许所加血液样本从该通孔流入血细胞阻隔膜和酶膜内。疏水基底1采用聚氯乙烯材料。血细胞阻隔膜3采用有一定过滤孔径的高分子材料。酶膜2包括基材，基材采用具有一定孔径的尼龙膜，上面固定有乳酸氧化酶和过氧化物酶、显色剂。
其中，显色剂溶液的配置在10ml 50％的乙醇溶液中加入20mg3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐和60mg 3-二甲氨基苯甲酸，完全溶解；酶溶液的配置在1ml磷酸盐缓冲液(pH为6.5)中加入10活性单位的乳酸氧化酶、20活性单位的过氧化物酶和8mg的混合蛋白(主要是牛血清白蛋白)，溶解均匀。
将10cm2孔径为的尼龙膜(孔径0.5um)先浸渍在显色剂溶液中，3分钟后取出干燥，其次将干燥好的带有显色剂成分的尼龙膜再放入酶溶液中浸渍1分钟，取出干燥。将最后干燥好的尼龙膜按一定的尺寸裁剪成小片粘贴到疏水基底支架上的开孔下方，然后将与疏水基底开孔大小一致的血细胞阻隔膜放入开口，与尼龙膜密切接触，用于测试全血中乳酸浓度的基于颜色反应的试纸条即制作完成。
将浓度分别为3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、20mg/dL的全血6微升分别滴加在上述方法制成的试纸条开孔反应区中，50秒后在试纸条反应区的下方通过检测仪器测试其590nm波长处的吸光度，结果图4所示。由此，由吸光度的大小即可反映出乳酸浓度。
权利要求
1.全血乳酸浓度检测试纸条，包括用于做试纸条支架的疏水基底(1)，其特征在于疏水基底(1)上开有通孔，通孔内放有相同形状、大小的血细胞阻隔膜(3)，通孔外一侧对应位置覆有酶膜(2)；所述的通孔的大小允许所加血液样本从该通孔流入血细胞阻隔膜(3)和酶膜(2)内；所述的酶膜(2)包括基材，基材上固定有乳酸氧化酶和过氧化物酶、显色剂。
2.如权利要求1所述的全血乳酸浓度检测试纸条，其特征在于所述的疏水基底(1)为聚氯乙烯材料。
3.如权利要求1所述的全血乳酸浓度检测试纸条，其特征在于所述的血细胞阻隔膜(3)由高分子材料制成，有一定的过滤孔径，可以将血液中的血细胞与血浆有效分离，保证全血样品经过血细胞阻隔膜(3)后，带有颜色的血细胞被截留在细胞阻隔膜(3)之上，只有血浆到达酶膜(2)，参与反应。
4.如权利要求1所述的全血乳酸浓度检测试纸条，其特征在于所述的乳酸氧化酶的含量为每平方厘米0.01-200μ活性单位，过氧化物酶的含量为每平方厘米0.01-200μ活性单位。
5.如权利要求1所述的全血乳酸浓度检测试纸条，其特征在于所述的乳酸氧化酶的含量为每平方厘米0.5-10μ活性单位，过氧化物酶的含量为每平方厘米0.2-15μ活性单位。
6.如权利要求1所述的全血乳酸浓度检测试纸条，其特征在于所述的显色剂为3-二甲氨基苯甲酸和3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐(MBTH-DMAB)。
7.如权利要求1所述的全血乳酸浓度检测试纸条，其特征在于所述的基材为具有一定孔径的尼龙膜。
全文摘要
本发明涉及一种利用显色反应检测血液中乳酸浓度的试纸条，该试纸条包括疏水基底，疏水基底上开有通孔，通孔内放有相同形状、大小的血细胞阻隔膜，通孔外一侧对应位置覆有酶膜。疏水基底采用聚氯乙烯材料。血细胞阻隔膜采用有一定过滤孔径的高分子材料。酶膜包括基材，上面固定有乳酸氧化酶和过氧化物酶、显色剂。本发明可以快速准确地测定全血中的乳酸浓度，并可有效去除血细胞颜色对检测的干扰。本发明使用简便，并且只需微量血液便可在短时间内测出血液乳酸的含量。
文档编号G01N33/66GK1456893SQ0312909
公开日2003年11月19日 申请日期2003年6月6日 优先权日2003年6月6日
发明者管文军, 李光, 潘敏, 陈裕泉 申请人:浙江大学