专利名称：稳定的乳酸测定液体试剂盒的制作方法
稳定的乳酸测定液体试剂盒技术领域
本发明属于医学检验测定技术领域，具体涉及一种稳定的乳酸测定液体试剂盒。
技术背景
乳酸是糖代谢的中间产物，主要来源于骨骼肌、脑、皮肤、肾髓质和红细胞等，血液中乳酸浓度与这些组织产生乳酸的速率以及肝脏对乳酸的代谢速度有关，约65%的乳酸由肝脏利用，而肝外乳酸通过骨骼肌和肾皮质的氧化作用清除。一般认为乳酸浓度超过5 mmol/L以及pH值小于7. 25时提示有明显的乳酸中毒。乳酸中毒在下列两类临床情况下发生:A型(缺氧型)常见，与组织氧合作用降低有关，如休克、低血容量和左心室衰竭；B 型与某些疾病(如糖尿病、肿瘤、肝病)、药物或毒物如乙醇、甲醇、水杨酸或先天代谢紊乱 (如甲基丙二酸血症，丙酮酸血症和脂肪酸氧化缺陷)有关。乳酸中毒比较常见，住院患者发生率约1%。其所致死亡率超过60%，如同时存在低血压，则死亡率接近100%。
现在普遍使用的测定血液中乳酸的方法为比色法，该法是利用乳酸脱氢酶催化 L-乳酸和辅酶生成丙酮酸和还原型辅酶，并加入硫酸胼捕获丙酮酸使反应完成，生成的还原型辅酶与乳酸等摩尔，通过测定还原型辅酶来计算乳酸含量。由于胼易与空气中的二氧化碳发生反应生成胼基甲酸，因而此法试剂开瓶稳定性较差，试剂开瓶后由于吸收空气中的二氧化碳很快就会导致试剂pH值下降，影响测定的准确度及试剂的稳定性。发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种准确度、精密度均较好，开瓶稳定性好，2 8°C开瓶保存至少可稳定15天，能满足临床检验要求的开瓶稳定的乳酸测定液体试剂盒。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为一种稳定的乳酸测定液体试剂盒，该试剂盒为由试剂1和试剂2组成的液体型双试剂，其中试剂1各组分及浓度为缓冲液(pH 5. 5-6. 5)α/β-萘酚(α-萘酚或β-萘酚)辅酶防腐剂试剂2各组分及浓度为缓冲液(pH 8. 5-9. 5)乳酸脱氢酶稳定剂防腐剂0. 05 0. 5 M (mol/L) 20 200 mg/L 20 200 mg/L 0. ΓΙΟ g/L ；0. 05 0. 5 M 20 200 KU/L 0. Γ100 g/L 0. Γιο g/L。
本发明上述试剂1中的缓冲液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、咪唑缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液等中的一种，优选柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液。
本发明上述试剂1中的辅酶为NAD (烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)，NADP (烟酰胺腺嘌3呤二核苷酸磷酸，又称辅酶II)，thio-NAD (硫代氧化型辅酶I)等中的一种。本发明上述试剂2中的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸缓冲液、哌嗪-1，4- 二乙磺酸缓冲液等中的一种，优选三羟甲基氨基甲烷缓冲液。本发明上述试剂2中的稳定剂为乙二醇、丙三醇、牛血清白蛋白、海藻糖等中的一种。本发明的防腐剂为叠氮钠或proclin系列防腐剂(如PrOclin300)等。本发明试剂1和试剂2的配制方法为常规方法，即按照上述配方比例，分别将试剂 1和试剂2所述的各组分分别加入蒸馏水后各自混合搅勻即可。本发明试剂测定样本中乳酸的测试条件如下温度30-37 0C ；比色杯光径为1. 0 cm。检测主波长；340 nm,副波长405 nm。应用本发明乳酸测定试剂测定样本中乳酸的方法如下样品(校准管以校准品做样品)加试剂1混勻，30-37°C孵育3-5 min后读取吸光度AO，立即加入试剂2混勻，30-37°C 反应5 min后，读取吸光度Al，ΔΑ = Al-AO。其中样本用量3 μ ，试剂1用量200 μ ，试剂2用量50 μ 。
本发明试剂盒测定样本中LAC含量按以下公式进行计算
乳酸浓度kmoUL)=示准
* ΔΑ标准-M空白
本发明的优点和有益效果
本发明通过加入α / β -萘酚替代硫酸胼与丙酮酸反应，促进反应进行，同时发挥其他组分之间的协同作用，从而避免了 “由于胼易与空气中的二氧化碳发生反应生成胼基甲酸造成的试剂开瓶稳定性较差、试剂开瓶后由于吸收空气中的二氧化碳很快就会导致试剂PH 值下降，影响测定的准确度及试剂的稳定性”的缺陷。
具体实施例方式以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案作进一步描述，但本发明并不限于这些实施例。实施例权利要求
1. 一种稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于该试剂盒为由试剂1和试剂2组成的液体型双试剂，其中试剂1各组分及浓度为缓冲液(pH 5. 5-6. 5) α/β-萘酚辅酶防腐剂试剂2各组分及浓度为缓冲液(pH 8. 5-9. 5) 乳酸脱氢酶稳定剂防腐剂0. 05 0. 5 M 20 200 mg/L 20 200 mg/L 0. ΓΙΟ g/L ；0. 05 0· 5 M 20 200 KU/L 0. Γ100 g/L0.1 10 g/L。
2.根据权利要求1所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于所述试剂1中的缓冲液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、咪唑缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液中的一种。
3.根据权利要求2所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于所述试剂1中的缓冲液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液。
4.根据权利要求1所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于所述试剂1中的辅酶为 NAD、NADP, thio-NAD 中的一种。
5.根据权利要求1所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于所述试剂2中的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸缓冲液、哌嗪-1，4-二乙磺酸缓冲液中的一种。
6.根据权利要求5所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于所述试剂2中的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
7.根据权利要求1所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于所述试剂2中的稳定剂为乙二醇、丙三醇、牛血清白蛋白、海藻糖中的一种。
8.根据权利要求1所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于所述的防腐剂为叠氮钠或proclin系列防腐剂。
9.根据权利要求9所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于所述的proclin 系列防腐剂为ft~oclin300。
全文摘要
本发明公开一种稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于该试剂盒为由试剂1和试剂2组成的液体型双试剂，其中试剂1各组分及浓度为缓冲液(pH5.5-6.5)0.05~0.5M，α/β-萘酚 20~200mg/L，辅酶 20~200mg/L，防腐剂 0.1~10g/L；试剂2各组分及浓度为缓冲液(pH8.5-9.5) 0.05~0.5M，乳酸脱氢酶20~200KU/L，稳定剂0.1~100g/L，防腐剂0.1~10g/L。本发明具有准确度、精密度均较好，开瓶稳定性好，2～8℃开瓶保存至少可稳定15天，能满足临床检验要求的优点。
文档编号G01N33/52GK102507915SQ201110347210
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月7日 优先权日2011年11月7日
发明者沃燕波, 邹炳德 申请人:宁波美康生物科技股份有限公司