一种测定前白蛋白的试剂盒及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种测定前白蛋白的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液50~150 mmol/L、氯化钠、EDTA、聚乙二醇?8000、曲拉通X?100、叠氮钠，试剂R2：Tris缓冲液、氯化钠、甘油、曲拉通X?100、叠氮钠、抗前白蛋白抗体，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的前白蛋白的浓度。本发明具有准确度高、无污染等优点。
【专利说明】
一种测定前白蛋白的试剂盒及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定前白蛋白的试剂盒及 其制备方法。
【背景技术】
[0002] 前白蛋白（Prealbumin, PA)，又称转甲状腺素蛋白（transthyretin)，分子量5.4 万，由肝细胞合成，在电泳分离时，常显示在白蛋白的前方，其半衰期很短，仅约1.9天。因 此，测定其在血浆中的浓度对于了解蛋白质的营养不良、肝功能不全、比白蛋白和转铁蛋白 具有更高的敏感性。PA除了作为组织修补的材料外，还可视为一种运载蛋白，它结合T4与 T3，而对T3亲和力更大，PA与视黄醇结合蛋白形成复合物，具有运载维生素 A的作用。
[0003] 前白蛋白分子量小，半衰期短，升高和降低更为明显，可作为早期肝功能损伤的指 标，比白蛋白具有更高敏感性。前白蛋白的检测同时可用于判断患者的营养状况，例如肿瘤 术前和术后的，亦或者当下营养供应的情况。前白蛋白可作为实体瘤患者化疗后肝功能损 害的预见性指标。
[0004] 除了作为一种灵敏的营养蛋白质指标，前白蛋白（Prealbumin，PA)在急性炎症、 恶性肿瘤、肝硬化或肾炎时其血浓度下降。肝脏疾病时前白蛋白更敏感，有人认为有30%白 蛋白正常的肝病患者的前白蛋白减少，坏死后肝硬化几乎是零。肝硬化肝细胞坏死较轻，前 白蛋白变化不大，预后较好，当病情改善时，前白蛋白亦迅速升高。亚急性肝坏死前白蛋白 一直在低值，故前白蛋白可用作判断肝病预后指标。肝癌以及阻塞性黄疸患者均可降低，其 降低程度与病情有密切关系。肾病综合征前白蛋白不仅不减少，而且在饮食充分时还可以 升高。营养不良负氮平衡时前白蛋白减少。
[0005] 目前检测前白蛋白的方法有免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫法等，但其操作均 较为复杂，耗时长，对操作人员有一定专业技能要求，且有的方法还需要较昂贵的仪器，成 本均较高，而且存在准确度低的缺陷，另外由于放射免疫法存在放射性元素，因此存在放射 性污染。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术存在放射性污染、准确度低的缺 陷，而提供一种测定前白蛋白的试剂盒及其制备方法。
[0007] 本发明解决上述技术问题提供的技术方案是:本发明公开了一种测定前白蛋白的 试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量 为： 试剂R1: Tris缓冲液 5CK150 mmol/L 氯化钠 50~300 mmol/L EDTA 25~55 mmol/L 聚乙二醇-8000 10-44 g/L 曲拉通X-100 0.5-2.5 mL/L 叠氮钠 0.3~1.1 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: Tris缓冲液 30~90 mmol/L 氯化钠 50~110 mmol/L 甘油 20~60 mmol/L 曲拉通X-100 0.5~2.5 mL/L 叠氮钠 0.3~1.1 g/L 抗前白蛋白抗体 0.5~2.5 g/L 其溶剂为纯化水。
[0008] 作为优选，本发明公开了一种测定前白蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和 试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为： 试剂R1: Tris缓冲液 100 mmol/L 氯化钠 170mmol/L EDTA 40 mmol/L 聚乙二醇-8000 25 g/L 曲拉通X-100 1.5 mL/L 叠氮钠 0.7 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: Tris缓冲液 60 mmol/L 氯化钠 80 mmol/L 甘油 40 mmol/L 曲拉通X-100 1.5 mL/L 叠氮钠 0.7 g/L 抗前白蛋白抗体 1.5 g/L 其溶剂为纯化水。
[0009] 作为优选，本发明还公开了上述测定前白蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法， 包括以下步骤： (a)按照下列组分含量配制好试剂： 试剂R1: Tris缓冲液 50~150 mmol/L 氯化钠 50~300 mmol/L EDTA 25~55 mmol/L 聚乙二醇-8000 10-44 g/L 曲拉通X-100 0.5~2.5 mL/L 叠氮钠 0.3~1.1 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: Tris缓冲液 30~90 mmol/L 氯化钠 50~110 mmol/L 甘油 20~60 mmol/L 曲拉通X-100 0.5-2.5 mL/L 叠氮钠 0.3~1.1 g/L 抗前白蛋白抗体 0.5~2.5 g/L 其溶剂为纯化水； (b) 将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应； (c) 用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值； (d) 根据吸光度变化值计算出样本中的前白蛋白的浓度。
[0010] 作为优选，步骤(b)中，所述的试剂R1与试剂R2的体积比为3:1。
[0011] 作为优选，步骤(b)中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1: 5到1:80之间。
[0012] 本发明的检测原理是:样品中前白蛋白（PA)可与试剂中相应的特异性抗前白蛋白 抗体结合形成抗原-抗体复合物，产生一定池度，该池度高低在一定抗体存在时与抗原的含 量成正比。在340nm波长下测定浊度并通过多点定标曲线可进行前白蛋白的定量测定。
式中：ΔΑυ以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值 Δ ΑΒ以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值 Cs校准液中ΡΑ的浓度。
[0014] 与现有技术相比，本发明具有以下有益优点： 本发明通过添加适当浓度的PEG-8000作为反应的加速促凝剂，以及表面活性剂曲拉通 X-100,加快了反应的速度，同时表面活性剂使得溶解度增加，以至于较小的抗原抗体反应 都可以在加速促凝剂的作用下，快速发生反应，大大提高了准确度，EDTA的添加螯合了部分 样品中金属离子的干扰，使得检测结果也更为准确。
【具体实施方式】
[0015] 以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
[0016] 实施例1 本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中： 试剂R1: Tris缓冲液 100 mmol/L 氯化钠 170mmol/L EDTA 40 mmol/L 聚乙二醇-8000 25 g/L 曲拉通X-100 1.5 mL/L 叠氮钠 0.7 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: Tris缓冲液 60 mmol/L 氯化钠 80 mmol/L 甘油 40 mmol/L 曲拉通X-100 1.5 mL/L 叠氮钠 0.7 g/L 抗前白蛋白抗体 1.5 g/L 其溶剂为纯化水。
[0017] 实施例2 本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中： 试剂R1: Tris缓冲液 150 mmol/L 氯化钠 50 mmol/L EDTA 55 mmol/L 聚乙二醇-8000 10 g/L 曲拉通X-100 2.5 mL/L 叠氮钠 〇.3g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: Tris缓冲液 30 mmol/L 氯化钠 110 mmol/L 甘油 20 mmol/L 曲拉通X-100 0.5 mL/L 叠氮钠 1.1 g/L 抗前白蛋白抗体 0.5 g/L 其溶剂为纯化水。
[0018] 实施例3 试剂盒的制备和使用方法 1、按照下列组分含量配制好试剂： 试剂R1: Tris缓冲液 100 mmol/L 氯化钠 170mmol/L EDTA 40 mmol/L 聚乙二醇-8000 25 g/L 曲拉通X-100 1.5 mL/L 叠氮钠 0.7 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: Tris缓冲液 60 mmol/L 氯化钠 80 mmol/L 甘油 40 mmol/L 曲拉通X-100 1.5 mL/L 叠氮钠 0.7 g/L 抗前白蛋白抗体 1.5 g/L 其溶剂为纯化水； 2、 全自动生化分析仪参数设置 (a) 检测温度:37°C; (b) 检测波长：主波长340nm、副波长700nm; (c) 反应时间：8min，其中，孵育时间5min，加入试剂R2后立即测定读取吸光度A1， 3min后读取吸光度A2,计算吸光度变化ΔΑ = A2-A1 ; (d) 反应方向：负方向； 3、 检测步骤 (a) 取180μ1试剂R1与4μ1待测样本混匀； (b) 将混匀后的溶液在37°C的条件下孵育5min;
(c) 加入60μ1试剂R2,立即测定读取吸光度Al，3min后读取吸光度A2,计算吸光度变化 ΔΑ = A2-A1 ； (d) 根据样本中前白蛋白（PA)的活性 1计算出样本中的前 白蛋白的浓度。
[0019] 实施例4 试剂盒的制备和使用方法 1、按照下列组分含量配制好试剂： 试剂R1: Tris缓冲液 150 mmol/L 氯化钠 50 mmol/L EDTA 55 mmol/L 聚乙二醇-8000 10 g/L 曲拉通X-100 2.5 mL/L 叠氮钠 〇.3g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: Tris缓冲液 30 mmol/L 氯化钠 110 mmol/L 甘油 20 mmol/L 曲拉通x-100 0.5 mL/L 叠氮钠 1.1 g/L 抗前白蛋白抗体 0.5g/L 其溶剂为纯化水； 2、 全自动生化分析仪参数设置 (a) 检测温度:37°C; (b) 检测波长：主波长340nm、副波长700nm; (c) 反应时间：8min，其中，孵育时间5min，加入试剂R2后立即测定读取吸光度A1， 3min后读取吸光度A2,计算吸光度变化ΔΑ = A2-A1 ; (d) 反应方向：负方向； 3、 检测步骤 (a) 取180μ1试剂R1与4μ1待测样本混匀； (b) 将混匀后的溶液在37°C的条件下孵育5min;
(c) 加入60μ1试剂R2,立即测定读取吸光度Al，3min后读取吸光度A2,计算吸光度变化 ΔΑ = A2-A1 ； (d) 根据样本中前白蛋白（PA)的活性 计算出样本中的前 白蛋白的浓度。
[0020] 表1为实施例1所制得的测定前白蛋白的试剂盒以及实施例2所制得的测定前白蛋 白的试剂盒分别对质控品1进行测定的结果，其中质控品1中的前白蛋白的浓度为147 mg/ L，测定结果见表1:
由表1可知，本发明所制得的测定前白蛋白的试剂盒对质控品1的测定结果偏差较小， 因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
[0021] 表2为实施例1所制得的测定前白蛋白的试剂盒以及实施例2所制得的测定前白蛋白的 试剂盒分别对质控品2进行测定的结果，其中质控品2中的前白蛋白的浓度为440 mg/L，测 定结果见表2:
由表2可知，本发明所制得的测定前白蛋白的试剂盒对质控品2的测定结果偏差较小， 因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
[0022]表3为实施例3所制得的测定前白蛋白的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复 测定以及实施例4所制得的测定前白蛋白的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定， 对所得的结果进行SD和CV的计算，结果如下： 表3
由表3可知本发明所制得的测定前白蛋白的试剂盒的精密度比较好，而且由表3可知， 实施例3为最优的选择。
[0023]上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟 悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因 此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完 成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
【主权项】
1. 一种测定前白蛋白的试剂盒，其特征在于:包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体 组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为： 试剂R1: Tris缓冲液 50~150 mmol/L 氯化钠 50~300 mmol/L EDTA 25~55 mmol/L 聚乙二醇-8000 10-44 g/L 曲拉通X-100 0.5-2.5 mL/L 叠氮钠 0.3~1.1 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: Tris缓冲液 30~90 mmol/L 氯化钠 50~110 mmol/L 甘油 20~60 mmol/L 曲拉通X-100 0.5~2.5 mL/L 叠氮钠 0.3~1.1 g/L 抗前白蛋白抗体 0.5~2.5 g/L 其溶剂为纯化水。2. 根据权利要求1所述的一种测定前白蛋白的试剂盒，其特征在于:包括彼此独立的试 剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为： 试剂R1: Tris缓冲液 100 mmol/L 氯化钠 170mmol/L EDTA 40 mmol/L 聚乙二醇-8000 25 g/L 曲拉通X-100 1.5 mL/L 叠氮钠 0.7 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: Tris缓冲液 60 mmol/L 氯化钠 80 mmol/L 甘油 40 mmol/L 曲拉通X-100 1.5 mL/L 叠氮钠 0.7 g/L 抗前白蛋白抗体 1.5 g/L 其溶剂为纯化水。3. 根据权利要求1或2所述的一种测定前白蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特 征在于:包括以下步骤： (a)按照下列组分含量配制好试剂： 试剂R1: Tris缓冲液 50~150 mmol/L 氯化钠 50~300 mmol/L EDTA 25~55 mmol/L 聚乙二醇-8000 10-44 g/L 曲拉通X-100 0.5-2.5 mL/L 叠氮钠 0.3~1.1 g/L 其溶剂为纯化水 试剂R2: Tris缓冲液 30~90 mmol/L 氯化钠 50~110 mmol/L 甘油 20~60 mmol/L 曲拉通X-100 0.5~2.5 mL/L 叠氮钠 0.3~1.1 g/L 抗前白蛋白抗体 0.5~2.5 g/L 其溶剂为纯化水； (b) 将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应； (c) 用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值； (d )根据吸光度变化值计算出样本中的前白蛋白的浓度。4. 根据权利要求3所述的一种测定前白蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征 在于:步骤(b)中，所述的试剂R1与试剂R2的体积比为3:1。5. 根据权利要求3所述的一种测定前白蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征 在于:步骤(b)中，所述的待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1:5到1:80之间。
【文档编号】G01N21/33GK106093424SQ201610376092
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年5月31日
【发明人】蔡晓辉, 庄庆华, 吴铮, 徐运
【申请人】安徽伊普诺康生物技术股份有限公司