一种灰毡毛忍冬花蕾药材储藏条件的检测方法
【专利摘要】本发明开创性地提出了一种灰毡毛忍冬花蕾药材储藏条件的检测方法：分别在储藏前后测定灰毡毛忍冬花蕾的颜色以及山银花中绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙六种成分的含量，结合储藏前后外观颜色变化的程度和六种成分含量变化的程度，来评价灰毡毛忍冬花蕾所经历的储藏条件是否适宜。该方法科学、简便，有利于药材质量的保障，填补了目前对于灰毡毛忍冬花蕾的储藏条件没有合适的检测评价方法的空白。
【专利说明】一种灰毡毛忍冬花蕾药材储藏条件的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药山银花的储藏，特别是对山银花中的储藏条件进行检测的方法。【背景技术】
[0002]山银花是一种常用中药材，可用于清热解毒、凉散风热。《中国药典》中，山银花的来源为:忍冬科植物灰租毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.)、红腺忍冬、华南忍冬或黄褐毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花。
[0003]山银花具有质轻、易碎、易霉变和虫蛀等特点，如何进行储藏是十分重要的问题。现有技术中报道有多种方法。如:
[0004]CN201110175699.1公开了一种山银花茶的储藏方法:将山银花茶包装后，放入专用保质冷库中进行保质储藏，保质冷库的温度为0-5°C，湿度为40%-60%。
[0005]而对于与山银花基源相近的药材金银花(忍冬科植物园忍冬的干燥花蕾或带初开的花)，其储藏方法也有一些报道，如:
[0006]CN201110041809.5公开了一种金银花的保藏方法:包装前，将金银花的含水量降低到8%-14%;包装材料的颜色选择黑色、藏青色或深绿色，材质选择铁质、纸质或塑料，厚度为0.10至I毫米；包装形式为密封；储藏养护方式为覆盖或包裹一种能够避光和/或恒温的材料。
[0007]CN201310030915.2公开了一种金银花储藏保鲜方法:将干燥后的金银花装入包装袋，通过管路向包装袋内分别充入氮气、二氧化碳或两种混合气体进行气调；气调处理后将包装袋封口，置于温度在0-6 °C的冷库中储藏。
[0008]CN201110312031.7公开了一种金银花茶的储藏方法:金银花茶摊晾后放入药品级塑料袋，外套编织袋，放入专用温控储藏室进行保质储藏，储藏室温度18-26°C，湿度为45%-65%。
[0009]《中国药典》中则规定了山银花的储藏条件为“置阴凉干燥处、防潮，防蛀”。
[0010]然而，中国药典只记载“阴凉处”为不超过20°C，对于“阴凉干燥处”这一要求则较为模糊。而且，实践中受生产、经营、使用单位仓储条件、管理措施及人员素质等因素制约，对光照、温度、湿度、氧气、时间等储藏影响因素并未一一进行研究和控制；另外，储藏之后药材的质量到底如何，储藏条件是否恰当等等均没有进行研究。综上，目前的现状导致山银花的储藏条件差别较大，药材质量参差不齐。
[0011]因此，有必要对山银花的储藏条件进行研究，提供一种检测其储藏条件优劣的方法。
【发明内容】
[0012]本发明的目的是提供一种检测山银花储藏条件的方法，特别是以有效成分含量和药材颜色来评价药材储藏条件的适应性。
[0013]发明人对山银花储藏中的光照、温度、湿度、氧气、时间等条件进行了研究，发现这几个因素在整个储藏过程中所起的作用具有较大的差别。在研究过程中，发明人意外地发现:将山银花中几种特定有效成分的含量变化，与药材的颜色变化相结合，可以作为表征药材储藏条件的因素。发明人从而得到一种检测山银花储藏过程是否得当的方法。其技术方案是:
[0014]一种山银花储藏条件的检测方法，分别在储藏前和储藏后测定山银花的颜色以及山银花中绿原酸、咖啡酸、3，5- 二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙六种成分的含量；再计算出在储藏前后所述山银花颜色变化的程度以及所述六种成分含量变化的程度，以此得出所述山银花所经历的储藏条件。
[0015]上述山银花储藏条件的检测方法，具体来说，包括以下步骤:
[0016]I)测定山银花的颜色，得到颜色值L、A和B;再测定山银花中绿原酸、咖啡酸、3，5- 二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰租毛忍冬阜苷乙和川续断阜苷乙六种成分的含量,对应得到六个含量值:C1、C2、C3、C4、C5和C6 ； [0017]2)将I)中的山银花 置于一定条件下储藏之后，测定其颜色，得到颜色值L’、A’和B’;再测定步骤I)中六种成分的含量，对应得到六个含量值:C1’、C2’、C3’、C4’、C5’和C6’；
[0018]3)根据公式 AL=| 1-L，/L|、ΛΑ=| 1_A，/Α|、ΛΒ=| 1_B，/B |、AC1=1_C1，/Cl、AC2=1-C2/C2，、AC3=1-C3，/C3、AC4=1_C4，/C4、AC5=1_C5，/C5 和 AC6=1_C6，/C6，计算得到 AL、ΛΑ、Λ B、Λ Cl、AC2、AC3、AC4、Λ C5 和 Λ C6 九个评价值；
[0019]4)评价:若ACl > 0.15或AC2 > 0.20，则所述山银花的储藏条件为不合格；若ACl < 0.15且AC2 < 0.20，则所述山银花的储藏条件达到合格；若ACl < 0.15、AC2<0.20且AC6<0.15，则所述山银花的储藏条件达到良好；若Λ L≤0.2、Λ A≤0.2、ΔΒ ≤ 0.2、ACl ≤ 0.15、Δ C2 ^ 0.20、Δ C3 ^ 0.15、Δ C4 ^ 0.20、AC5 ≤ 0.15 且AC6 < 0.1，则所述山银花的储藏条件达到优秀。
[0020]中国药典中对山银花质量的规定为:绿原酸含量不小于2%，灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总量不小于5%。而现有技术中对山银花或金银花等忍冬属中药的储藏方法也有报道，如阴凉干燥处、防潮，防蛀等。本发明所提供的方法不是单纯地测定金银花中有效成分的含量，而是通过其含量的变化以及颜色的变化来表征储藏条件，进而评价储藏条件是否适宜。现有技术中，还未见到一种对山银花储藏条件进行检测和科学评价的方法。
[0021]上述山银花储藏条件的检测方法，所述不合格是指在非阴凉干燥处；所述合格是指在阴凉干燥处；所述良好是指在阴凉干燥处避光储藏少于两年；所述优秀是指在阴凉干燥处和真空包装中避光储藏少于一年。
[0022]其中，“达到”某级别是指属于该级别或该级别以上。如达到合格是指为合格或合格以上的级别(如合格、良好或优秀)，达到良好是指为良好或良好以上的级别(如良好或优秀)。公式中计算AL、ΛΑ、Λ B所得的值均为绝对值。
[0023]发明人通过大量实验，摸索出了山银花的颜色变化以及其中特定成分的含量变化与储藏条件之间的关系:
[0024]绿原酸在储藏过程中的含量会降低，其对湿度尤其敏感，当绿原酸含量的变化值不大于15%时(即ACl < 0.15)，可表明药材处于“干燥处”储藏。
[0025]咖啡酸在储藏过程中含量会升高，其对温度尤其敏感，当咖啡酸含量的变化值不大于20%时(B卩AC2 < 0.20)，可表明药材是处于“阴凉处”储藏。[0026]因此，Λ Cl和Λ C2两个值基本能够作为山银花储藏条件的评价值，当ACl < 0.15且AC2 < 0.20时，可以认为药材所经历的储藏条件达到药典要求的合格，即“阴凉干燥处”，例如在温度20°C以下且相对湿度50%以下的环境中储藏；当ACl >0.15或AC2 > 0.20时，则储藏条件不符合药典的要求，为不合格。
[0027]川续断皂苷乙在储藏过程中含量会降低，其对储藏时间非常敏感，当川续断皂苷乙的含量变化值不大于15%时(AC6 ( 0.15)，可以认为储藏的时间在两年之内；当川续断皂苷乙的含量变化值不大于10%时(AC6 ( 0.1)，可以认为储藏的时间在一年之内。
[0028]因此，Λ Cl、Λ C2、Λ C6三个值相结合可以评价出山银花的储藏条件达到良好。当ACl ^ 0.15、AC2 < 0.20且AC6 < 0.15时，可以认为药材所经历的储藏条件达到良好，即:在阴凉干燥处储藏小于两年，例如在温度20°C以下且相对湿度50%以下的环境中储藏少于两年。
[0029]3，5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙对空气中的氧气较为敏感。当3，5-二咖啡酰奎宁酸的含量变化值不大于15%( AC3 ( 0.15)，木犀草苷的含量变化值不大于20%( AC4 ( 0.20)，以及灰毡毛忍冬皂苷乙的含量变化值不大于15%时(AC5 ( 0.15)，可以认为药材与氧气基本没有接触，如处于真空包装中储藏。
[0030]山银花的外观颜色在储藏过程中会逐渐变深，如从绿色到黄色再到褐色，而光照是影响山银花颜色的决定因素，用分光测色计可以测定山银花颜色的L、A、B值，表征药材所经历的光照条件:在避光的情况下储藏，L、A、B三个值的变化的绝对值一般不超过20%(即 AL < 0.2、ΔΑ ^ 0.2、ΔΒ ^ 0.2)。
[0031]因此，AL、ΛΑ、ΛΒ、ACUAC2、AC3、AC4、Λ C5 和 Δ C6 九个值相结合，可以反映出药材的储藏条件达到优秀，即:当AL≤0.2、ΔΑ ≤ 0.2、ΔΒ ≤ 0.2、ACl ≤ 0.15、AC2 ≤ 0.20、AC3 ≤ 0.15、Δ C4 ≤ 0.20、Λ C5 ≤ 0.15 且 Λ C6 ≤ 0.1 时，可以认为药材所经历的储藏条件为优秀，即:在阴凉干燥处和真空包装下避光储藏小于一年，例如在温度20°C以下且湿度50%以下的环境中，处于真空包装中避光储藏少于一年。
[0032]上述山银花储藏条件的检测方法，测定所述六种成分含量所用的方法为HPLC法。
[0033]具体来说，其中测定绿原酸、咖啡酸、木犀草苷和3，5- 二咖啡酰奎宁酸的HPLC色谱条件为:色谱柱均为C18柱，250X4.6mm，4ym;检测器均为紫外检测器；检测波长分别为:327nm、322nm、437nm和327nm (即绿原酸为327nm，咖啡酸为322nm，木犀草苷为437nm，3，5-二咖啡酰奎宁酸为327nm);流动相均为乙腈-0.4%磷酸水溶液，洗脱方法为梯度洗脱。具体的梯度洗脱条件见表1:
[0034]表1:绿原酸、咖啡酸、木犀草苷和3，5- 二咖啡酰奎宁酸的梯度洗脱条件
[0035]
【权利要求】
1.一种山银花储藏条件的检测方法，其特征是:分别在储藏前和储藏后测定山银花的颜色以及山银花中绿原酸、咖啡酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙六种成分的含量；再得出储藏前后所述山银花颜色变化情况以及所述六种成分含量变化情况，以此确定所述山银花所经历的储藏条件。
2.权利要求1所述的方法，其特征是包括以下步骤: 1)在储藏前，测定山银花的颜色，得到颜色值L、A和B;测定山银花中绿原酸、咖啡酸、3，5- 二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、灰租毛忍冬阜苷乙和川续断阜苷乙六种成分的含量,对应得到含量值Cl、C2、C3、C4、C5和C6 ； 2)将步骤I)中的山银花置于一定条件下储藏后，再测定其颜色，得到颜色值L’、A’和B’ ；再测定步骤I)中所述六种成分的含量，对应得到含量值C1’、C2’、C3’、C4’、C5’和C6’ ； 3)根据以下公式计算得出储藏条件的评价值:
3.权利要求2所述的方法，其特征是，所述阴凉干燥处是指温度20°C以下且相对湿度50%以下的环境中。
4.权利要求1~3中任一所述的方法，其特征是，测定所述六种成分的含量所用的方法为HPLC法。
5.权利要求4所述的方法，其特征是，测定绿原酸、咖啡酸、木犀草苷和3，5-二咖啡酰奎宁酸的HPLC色谱条件为:色谱柱均为C18柱，250 X 4.6mm，4 μ m ;检测器为紫外检测器；检测波长分别为:327nm、322nm、437nm和327nm ;流动相均为乙腈-0.4%磷酸水溶液，洗脱方法为梯度洗脱。
6.权利要求4所述的方法，其特征是，测定灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的HPLC色谱条件为:色谱柱均为C18柱，250X4.6_，4μπι;检测器为蒸发光散射检测器；流动相均为乙腈-0.4%乙酸水溶液，洗脱方法为梯度洗脱。
7.权利要求1~3中任一所述的方法，其特征是，测定所述山银花的颜色所用的仪器为分光测色计。
8.权利要求1~3中 任一所述的方法，其特征是，所述山银花为灰毡毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花。
【文档编号】G01N21/25GK103940749SQ201410107883
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年3月21日 优先权日:2014年3月21日
【发明者】马鹏, 李隆云, 谭军, 吴叶宽, 张应
申请人:重庆市中药研究院