一种食品中二噁英含量的检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种食品中二噁英含量的检测方法，其特征在于包括以下步骤：取待检畜、禽类产品油脂样品；将样品溶于戊烷中，得到混合溶液；将混合溶液加热，依次使混合液中的戊烷和大部分油脂挥发，得到高含量的二噁英油脂；采用淋洗法将高含量的二噁英油脂净化提纯；将通过净化提纯得到的二噁英进行荧光分析，得到畜、禽类产品中二噁英含量的结果。本发明的优点：使用本发明所提供的检测方法，不用再将样品送入实验室进行检测，而且检测省时、快速、便捷、便宜、操作容易，给检测机构减少了大量的人力、物力、财力，节约了检测成本，提高了检测效率。
【专利说明】—种食品中二噁英含量的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种食品质量检测方法，特别涉及一种肉类食品中二噁英含量的检测方法。
【背景技术】
[0002]随着社会的发展和人民生活水平的不断提高，食品安全越来越受到许多国家政府和民众广泛的关注，“民以食为天，食以安为先”的理念在消费者心里越来越强，特别是近年来发生的“禽流感”、“瘦肉精”、“人造蜂蜜”、“二噁英”等食品安全事件使人们愈发关注食品安全问题。随着时代的和经济的发展，人们不再担心食品短缺的问题，渐渐的对食品质量安全的要求越来越高，尤其是家禽肉类的食品安全，人们对家禽肉类产品的需求已开始从数量型向对质量安全型转变。
[0003]二噁英类广泛和持久地存在于环境中，并富集于食物链的污染物，其主要来源是火山爆发，森林火灾，化工生产，废物燃烧，金属冶炼和造纸等。二噁英类物质不仅存在于土壤，沉积物，水中，而且存在于野生动物，家畜，人体组织。食品中二噁英类物质不易被生物和化学降解，故具有生物富集和生物放大性，能在生物体内和环境中长期留存二噁英类物质还具有亲脂性，进入身体后，主要存积于脂肪内人和动物主要是通过食物接触二噁英类物质，其中很大部分是来自于动物食品！通过该装置可以快速的检测出家禽肉类中二噁英的含量，提高食品的安全质量，让人们吃上绿色无污染食品。
[0004]现阶段我国只有少数几个实验室具备要检测肉类食品中二噁英含量的能力，且检测价格昂贵、操作方法繁琐、耗时长，这远远不能满足对二噁英的检测需要。因此急需一种能够快速检测肉类食品中二噁英含量的方法，以实现在现场进行快速检测样品的目的，经过广泛检索，尚未发现较为理想的技术方案。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是为了解决现阶段对肉类食品中二噁英含量检测存在的价格昂贵、操作方法繁琐、耗时长等缺点，而提出的一种食品中二噁英含量的检测方法。
[0006]为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案:
一种食品中二噁英含量的检测方法，其特征在于包括以下步骤:
a、取待检畜、禽类产品的固态脂肪，加热熔解成液态油脂，从液态油脂中取样；
b、将所取样的液态油脂完全溶于戊烷中，得到混合溶液；
C、将混合溶液加热，加热的温度保持在戊烷的沸点和油脂沸点之间，并保持一段时间，使混合液中的戊烷全部挥发；
d、再将不含戊烷的溶液继续加热，加热的温度控制在油脂的沸点和二噁英的沸点之间，并保持一段时间，使溶液中大部分油脂挥发，得到高含量的二噁英油脂；
e、净化提纯:采用淋洗法将高含量的二噁英油脂，依次通过酸性硅胶柱和活性炭柱进行过滤提纯； f、将通过净化提纯得到的二噁英进行荧光分析，得到畜、禽类产品中二噁英含量的结果O
[0007]在上述技术方案的基础上，可以有以下进一步的技术方案:
所述淋洗法包括以下步骤，把酸性硅胶柱和活性炭柱放置在一个管道中，形成串联柱，先用正戊烷淋洗串联柱，再将酸性硅胶柱取出管道，使用甲苯单独淋洗活性炭柱，最后把酸性硅胶柱放回管道，通入高含量的二噁英油脂进行淋洗提纯。
[0008]所述酸性硅胶柱从下至上依次填充玻璃纤维、无水硫酸钠17份和33%的硫酸硅胶30份，填充好后通过正戊烷淋洗。
[0009]所述活性炭柱从下至上依次填充玻璃棉、无水硫酸钠5份、1%的X-CARB/硅藻土 3份和无水硫酸钠10份，填充好后依次通过I份的丙酮，4份的甲苯和2份的正戊烷淋洗。
[0010]所述荧光分析包括以下步骤:先向已经提纯的二噁英油脂加入400 μ LPMI1640浓缩至正戊烷完全挥发；再加入含有二噁英荧光酶细胞的培养液后混匀；第三把混合液均匀添加到放置有细胞H1L6.1c2的96孔的孔板上，培养20?24h ;最后把培养液通过红外线光照射，投影到荧光识别分析板，通过荧光分光光度计进行数据提取，并连接至计算机进行数据处理，获得二噁英含量结果，并显示在屏幕上。
[0011]在畜、禽等肉类食品中，由于其脂肪中二噁英含量相比其他组织较高，所以在检测肉类食品中二噁英含量时，取其油脂来做质量检测。
[0012]本发明采用的是CALUX法检测食品中二噁英污染物，本检测法的操作步骤主要有:样品收集、二噁英类物质提取、纯化、干燥、细胞处理、细胞裂解、荧光分光光度计分析及数据处理，具体操作方法因材料的不同而有所不同，不同样品之间的主要区别在对其所含二噁英类污染物的提取和纯化的操做上，不方法主要是畜、禽等肉类食品中二噁英含量的检测。
[0013]本发明的优点在于:使用本发明所提供的检测方法，不用再将样品送入实验室进行检测，而且检测省时、快速、便捷、便宜、操作容易，给检测机构减少了大量的人力、物力、财力，节约了检测成本，提高了检测效率。
【具体实施方式】
[0014]本发明提供的一种食品中二噁英含量的检测方法，其特征在于包括以下步骤:
一、加热得到含量较高的二噁英油脂，其步骤如下:
a、取待检的畜、禽等肉类食品的固态脂肪，加热熔解成液态油脂，从得到的液态油脂中取出50g作为样品。
[0015]b、先在加热装浓缩置中装入戊烷，将取得的50g的液态油脂加入加热装浓缩置中，其中戊烷与的液态油脂按10:1的比例混合，混合后将混合液摇匀，使得液态油脂完全溶于戊烷中，得到混合溶液。
[0016]C、加热装浓缩置将混合溶液加热，加热的温度保持在戊烷的沸点和油脂沸点之间，并保持一段时间，其中加热的温度优选40°C，保温时间优选5-10min，使混合液中的戊烷全部挥发。
[0017]d、再将不含戊烷的混合溶液继续加热，加热的温度控制在油脂的沸点和二噁英的沸点之间，并保持一段时间，其中加热的温度优选300°C，保温时间优选5-10min，使溶液中大部分油脂挥发，得到高含量的二噁英油脂。
[0018]二、将第一步中得到的高含量二噁英油脂采用淋洗法进行净化提纯，其步骤如下:
e、把第一步中得到的高含量二噁英油脂通过串联的1mL酸性硅胶柱和5mL活性炭柱进行净化。
[0019]所述1mL酸性硅胶柱的制作方法是，从下至上依次填充玻璃纤维、无水硫酸钠107g和33%的硫酸硅胶3.0g，填充好后用30ml的正戊烷淋洗一次。
[0020]所述5ml活性炭柱的制作方法是，从下至上依次填充玻璃棉、无水硫酸钠0.5g、1%的X-CARB/娃藻土 0.3g和无水硫酸钠1.0g,填充好后依次通过5ml的丙酮,20mL的甲苯和1mL的正戊烷淋洗。
[0021]1mL酸性硅胶柱和5mL活性炭柱制备好后，将它们串联在一个管道中，形成串联柱，先用正戊烷淋洗串联柱，将两柱中的杂质去除；再将酸性硅胶柱取出管道，使用甲苯单独淋洗活性炭柱，分离出PCDD/Fs，用甲苯淋洗活性炭柱使得在过滤二噁英时可增加其通过率；最后把酸性硅胶柱放回管道，通入高含量的二噁英油脂，将淋洗液旋转蒸发浓缩，再用正戊烷把浓缩液定容至4mL的样品。
[0022]三、把第二步中的净化得到的二噁英进行荧光分析
f、从定容至4mL的样品中取出ImL置于试管中，然后向试管中加入400μLPMI1640浓缩，等到样品中的正戊烷完全挥发后加入400 μ L 二噁英荧光酶细胞的培养液混匀得到混合液，所述η惡英突光酶细胞为现有技术采用1%的Penicilllin-Streptomycin +8%的FBS。
[0023]g、在已经放置有细胞H1L6.1c2的96孔的孔板上，每孔均加入190 μ L混合液培养20?24h，其中培养的温度设置在37°C，培养液中含有体积分数为5%的C02。
[0024]h、培养后把每孔内的培养液收集到试管中，通过红外线光照射试管，照射后将光线投影到荧光识别分析板，通过荧光分光光度计进行数据提取，并连接至计算机进行数据处理，获得二噁英含量结果，并显示在屏幕上。其中采用化学发光酶标仪测量发光度，通过发光度计算PCDD浓度。
[0025]检测原理
本发明的采用CALUX法检测食品中二噁英类物质的原理是建立在二噁英类物质进入生物机体后所产生的生物作用的原理的基础上的。二噁英进入细胞后，首先与细胞质中的芳香烃受体AhR结合,形成d1xin-AhR结合物,该结合物再转入细胞核,在核中，芳香烃受体先后与其结合的2个热休克蛋白亚基Hsp90，I个p23和I个XAP2蛋白配体脱离，并在细胞核中聚集，然后D1xin-AhR混合物又与细胞核中的芳香烃受体核转位子蛋白结合形成与DNA有高度结合力的d1xin-AhR-AR NT蛋白二聚体，该二聚体再特异性地结合在二噁英反应基因的上游增强子中的二噁英反应元件DREs上，从而启动这些靶基因的转录表达，并导致一系列与这些基因表达有关的生物化学变化和毒性作用。
[0026]CALUX法是一种用含荧光素酶报告基因的重组细胞来检测食品中二噁英类物质生物学分析方法。使用这种方法时首先是要构建含荧光素酶报告基因的重组质粒，再将重组质粒转染到动物细胞中制成稳定转染的重组细胞系，最后用重组细胞来检测食品提取物中的二噁英类物质。从理论上来讲，CALUX法检测可用很多不同的细胞系，只要这些细胞内含有功能健全的芳香烃受体信号传导系统，但实际上不同细胞系对各种二噁英类物质的反应会有所不同。目前，常用的细胞株有大鼠肝癌细胞株，小鼠肝癌细胞株和人类肝癌细胞株。
[0027]构建质粒时，先将不同数目的二噁英反应元件DREs插入含荧光素酶报告基因的质粒中受MMTV启动子调控的区域制成重组质粒,再将重组质粒转入动物细胞制成稳定转染细胞系。检测时，用含二噁英类物质的食品提取物处理重组细胞，当细胞接触到二噁英类物质后，细胞中的芳香烃受体会被激活，进一步会导致荧光素酶报告基因的表达。荧光素酶基因的表达所产生的荧光则可用荧光分光光度计来检测。因重组细胞接触到二噁英类物质后所表达的荧光素酶的荧光量在一定范围内与二噁英类物质的含量成正比，因此通过可通过检测荧光量来计算二噁英类化合物的量。
[0028]此外，也可用重组质粒对细胞进行瞬时转染来检测食品提取物中的二噁英类物质，这样可以节省制作稳定转染细胞所需的时间。不过瞬时转染的试验重复性不如稳定转染细胞系检测的好，且瞬时转入细胞的基因在72h后通常会丢失，故只适合用于短期研究用。
【权利要求】
1.一种食品中二噁英含量的检测方法，其特征在于包括以下步骤: a、取待检畜、禽类产品的固态脂肪，加热熔解成液态油脂，从液态油脂中取样； b、将所取样的液态油脂完全溶于戊烷中，得到混合溶液； C、将混合溶液加热，加热的温度保持在戊烷的沸点和油脂沸点之间，并保持一段时间，使混合液中的戊烷全部挥发； d、再将不含戊烷的溶液继续加热，加热的温度控制在油脂的沸点和二噁英的沸点之间，并保持一段时间，使溶液中大部分油脂挥发，得到高含量的二噁英油脂； e、净化提纯:采用淋洗法将高含量的二噁英油脂，依次通过酸性硅胶柱和活性炭柱进行过滤提纯； f、将通过净化提纯得到的二噁英进行荧光分析，得到畜、禽类产品中二噁英含量的结果O
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述淋洗法包括以下步骤，把酸性硅胶柱和活性炭柱放置在一个管道中，形成串联柱，先用正戊烷淋洗串联柱，再将酸性硅胶柱取出管道，使用甲苯单独淋洗活性炭柱，最后把酸性硅胶柱放回管道，通入高含量的二噁英油脂进行淋洗提纯。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于:所述酸性硅胶柱从下至上依次填充玻璃纤维、无水硫酸钠17份和33%的硫酸硅胶30份，填充好后通过正戊烷淋洗。
4.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于:所述活性炭柱从下至上依次填充玻璃棉、无水硫酸钠5份、1%的X-CARB/硅藻土 3份和无水硫酸钠10份，填充好后依次通过I份的丙酮，4份的甲苯和2份的正戊烷淋洗。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述荧光分析包括以下步骤:先向已经提纯的二噁英油脂加入400 μ LPMI1640浓缩至正戊烷完全挥发；再加入含有二噁英荧光酶细胞的培养液后混匀；第三把混合液均匀添加到放置有细胞H1L6.1c2的96孔的孔板上，培养20?24h ;最后把培养液通过红外线光照射，投影到荧光识别分析板，通过荧光分光光度计进行数据提取，并连接至计算机进行数据处理，获得二噁英含量结果，并显示在屏幕上。
【文档编号】G01N21/64GK104048947SQ201410219084
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年5月23日 优先权日:2014年5月23日
【发明者】孟令启 申请人:孟令启