一种中药冻干注射剂中有机溶剂残留的测定方法
【专利摘要】本发明提供了一种中药组合物冻干注射剂中有机溶剂残留的测定方法，本发明中药冻干注射剂原料包括人参和淫羊藿，临床用于运动神经元疾病（肌萎缩侧索硬化症、进行性脊肌萎缩症、进行性延髓麻痹、原发性侧索硬化症）、进行性肌营养不良症、先天性肌病等疾病所致的肌肉萎缩及重症肌无力的治疗，本发明方法采用顶空气相色谱法测定其中有机溶剂的残留量，可以用于该产品的质量控制。
【专利说明】一种中药冻干注射剂中有机溶剂残留的测定方法
[0001] 本发明专利申请为分案申请，原案信息如下： 申请号：201010200771. 7 申请日：2010年06月17日 发明名称：一种中药冻干注射剂中有机溶剂残留的测定方法。
【技术领域】
[0002] 本发明涉及一种中药冻干注射剂中有机溶剂残留的测定方法，属于药物制剂分析
【技术领域】。
【背景技术】
[0003] 中药冻干注射剂在质量标准上，要求控制的项目比较多，其中，对于药物分离过程 中使用了大孔吸附树脂，根据药品研发指导原则的要求需要对药物的有机溶剂残留进行检 测控制，这对于药物的安全性至关重要。
[0004] CN1785223A公开了一种治疗肌肉萎缩及重症肌无力的药物及其制备方法，该专利 公开了该药物的组方、制剂以及胶囊、片剂等制备方法；该专利还公开了该药物的药效学实 验，证实该药物具有增强正常运动神经元活力，促进神经突起生长，又能保护兴奋性氨基 酸毒性损伤运动神经元，减少细胞凋亡，在维持中枢神经系统功能，延缓病情发展，提高患 者生存质量方面具有重要的临床应用价值；该专利还公开了其中人参提取物的制备方法， "取人参药材，用60-90%乙醇提取1-3次，第1次加药材8-12倍量溶剂提取1-2小时，第2 次加6-10倍量溶剂提取1-2小时，第3次加6-10倍量溶剂提取0. 5-1小时；合并上述提取 液，趁热滤过，减压回收乙醇，并浓缩，放入不锈钢桶内，加纯水搅拌均匀，冷藏24-36h ;将 冷藏液取出，放至常温，板框过滤器过滤，用少量水洗涤板框，滤液加纯水稀释，备用；取人 参浓缩药液通过处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，并分别用pH值8-9的氨水、20%乙醇、 80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液。将80%洗脱液加入纯水，配成50%醇溶液，通过中性 氧化铝柱，收集洗脱液，再用少量50%乙醇洗涤柱子，合并洗脱液备用；取药液加入活性炭， 回流加热，煮沸20min，趁热板框抽滤，收集滤液，浓缩，冷藏过夜；澄清板过滤，减压干燥， 即得人参提取物。"该人参提取物即为人参总皂苷提取物；该专利还公开了淫羊藿提取物的 提取方法，"取淫羊藿药材，加水煎煮提取2-5次，加水量为10-30倍，第一次提取时间定为 0. 5-2h，以后3次为0. 5-lh ;合并上述提取液，趁热滤过，减压浓缩，放入不锈钢桶内，加乙 醇至药液含醇浓度为70%,冷藏；过滤，滤液回收乙醇并浓缩，加水搅拌均匀，冷藏，过滤，备 用；取淫羊藿药液通过处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，并分别用纯水、20%乙醇、50%乙醇 洗脱，收集50%乙醇洗脱液；洗脱液拌入适量硅藻土混匀，用无水乙醇提取2-5次，提取液 合并，回收乙醇并浓缩，浓缩液加入丙酮，并搅拌均匀，冷藏，过滤，沉淀加丙酮再同前处理2 次，合并3次滤液，回收溶剂，并浓缩，减压干燥，即得淫羊藿提取物。"该淫羊藿提取物即为 淫羊藿总黄酮提取物。该专利未公开冻干注射剂制备及其含量测定方法。
[0005] 由CN1785223A公开的技术内容，可以看出，该中药组合物分离过程中使用了大孔 吸附树脂，因此有必要对其制备的制剂-冻干注射剂进行有机溶剂残留的检测。
[0006] 本专利申请即是在CN1785223A的基础上做了进一步的研发，在研制该中药组合 物的冻干注射剂的基础上，制定了有机溶剂残留的测定方法。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种中药冻干注射剂有机溶剂残留的测定方法。
[0008] 本发明所述中药冻干注射剂是由如下重量份比例的原料制成： 人参总皂苷提取物30-70淫羊藿总黄酮提取物20-60。
[0009] 本发明采用顶空气相色谱法，对该中药冻干注射剂进行有机溶剂残留的控制。本 发明测定方法可以有效的、可靠的对本发明所述中药冻干注射剂进行质量控制，以确保其 安全有效。
[0010] 本发明测定方法中，顶空气相色谱条件条件优选如下： 色谱柱：毛细管柱填料为聚乙二醇-20M，规格为30mX320ymX0. 25μπι ;程序升温方 式为柱温60°C，保持2 min，然后以10°C 升至80°C，保持5 min，再以15°C 升 至150°C，保持lmin ;FID检测器温度为240°C，进样口温度为200°C ;载气为氮气，流速1.0 mMmirr1 ;分流进样，分流比为10:1 ;顶空进样体积为lmL ;以水为溶剂平衡温度为90°C，平 衡时间为20 min。 toon] 本发明测定方法中，供试品和对照品的配制方法如下： 供试品溶液取权利要求1所述中药冻干注射剂〇. 4 g，精密称定，置10 mL顶空进样瓶 中，精密加水2 mL密封瓶口，振摇使溶解，即得； 对照品溶液取正己烷、苯、甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯适 量，精密称定，分别加 N，N-二甲基甲酰胺制成每mL含苯0. 20 mg,正己烧2. 36 mg,甲苯、邻 二甲苯、间二甲苯、对二甲苯各2. 00 mg,苯乙烯2. 50 mg,二乙烯苯1. 00 mg的溶液，作为各 自单独的对照品贮备溶液；分别量取各对照品贮备溶液苯、甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二 甲苯各10 mL,苯乙烯8 mL,正己烧8. 5 mL,二乙烯苯20 mL混合，加 N，N-二甲基甲酰胺定容 至IJ 100 mL，作为混合对照品贮备溶液，取混合对照品贮备液2ml，加水稀释至100ml，作为对 照品溶液。
[0012] 本发明测定方法所述中药冻干注射剂的原料重量比例优选为： 人参总皂苷提取物35淫羊藿总黄酮提取物55。
[0013] 还优选为： 人参总皂苷提取物65淫羊藿总黄酮提取物25。
[0014] 或者： 人参总皂苷提取物50淫羊藿总黄酮提取物40。
[0015] 为证实本发明方法可行性，发明人进行了如下的验证试验： 1、样品制备： 人参总皂苷提取物50克淫羊藿总黄酮提取物40克 制备方法： a、将800克羟丙基-β -环糊精加水4000ml溶解制成20%的溶液，将淫羊藿总黄酮提取 物加水750ml(5. 33%)加热溶解，分次缓慢加入羟丙基-β -环糊精溶液中，保温80°C ± 1 °C， 动态搅拌包合，包合时间3小时，将人参总皂苷提取物加水100ml (50%)加热溶解，加入包合 液中，继续包合1小时； b、 加水调节溶液总量至6000ml，用10%的氢氧化钠溶液调节PH到7. 5,加入活性炭24 克（即含活性炭0. 4%)，煮沸10分钟，趁热用澄清板框过滤，滤除活性炭，再用0. 22 μ m微孔 滤膜过滤，用水定容至6000ml ; c、 105°C热压灭菌30分钟，取出，放至常温，用0. 22 μ m微孔滤膜过滤，分装至15ml西 林瓶，每支6ml，半压塞，置冻干机中，-40°C预冻3小时； d、 按照预冻条件，在真空度为0. 05Pa状态下，从-40°C至0°C升温升华28小时，再从 0°C至30°C升温干燥4. 5小时； e、 在升华和干燥的真空状态下压塞，出箱，压铝盖，灯检，包装。
[0016] 2、方法学验证 2. 1仪器和试剂 Agilent 6890N气相色谱仪(包括FID氢火焰检测器，7694E顶空进样器，美国安捷伦公 司）；二乙烯苯(批号：CA12605400);苯(批号：C10535000);邻二甲苯(批号：C17945000);间 二甲苯(批号：C17945100);对二甲苯(批号：C17945200);苯乙烯(批号：C16982000);正己烷 (批号：C14195500);以上试剂均为德国Labor Dr. Ehrensterfer. Gmbh生产。甲苯（色谱纯， 天津光复精细化工）；N，N-二甲基甲酰胺(分析纯，天津大茂化工)。水为无有机物蒸馏水。
[0017] 3方法与结果 3. 1色谱条件 色谱柱：AT-WAX毛细管柱聚乙二醇-20M，30mX320 μπιΧΟ. 25 μπι;程序升温方式为柱 温 60°C，保持 2 min，然后以 10 °C 升至 80°C，保持 5 min，再以 15°C 升至 150°C， 保持1 min ;FID检测器温度为240°C，进样口温度为200°C;载气为氮气，流速1. 0 mL €11-1 ; 分流进样，分流比为10 : 1 ;顶空进样体积为1 mL :以水为溶剂平衡温度为90°C，平衡时间 为 20 min。
[0018] 3. 2溶液的制备 3. 2. 1对照品溶液 取正己烷、苯、甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯适量，精密称定， 分别加 N，N-二甲基甲酰胺制成每mL含苯0. 20 mg,正己烧2. 36 mg,甲苯、邻二甲苯、间二甲 苯、对二甲苯各2. 00 mg,苯乙烯2. 50 mg,二乙烯苯1. 00 mg的溶液，作为各自单独的对照品 贮备溶液。分别量取各对照品贮备溶液苯、甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯各10 mL，苯 乙烯8 mL，正己烷8. 5 mL，二乙烯苯20 mL混合，加 N，N-二甲基甲酰胺定容到100 mL，作为 混合对照品贮备溶液，取混合对照品贮备液2ml，加水稀释至100ml，作为对照品溶液。
[0019] 3. 2. 2供试品溶液 取上述制备的本发明冻干注射剂内容物〇.4g，精密称定，置10 mL顶空进样瓶中，精密 加水2 mL密封瓶口，振摇使溶解，即得。
[0020] 3. 2. 3空白溶液 取按本品制备工艺制备的辅料空白样品〇. 4 g，置10 mL顶空进样瓶中，精密加水2 mL 密封瓶口，振摇使溶解，即得。
[0021] 3. 3系统适用性试验 取"3. 2"项下方法制备的对照品溶液、供试品溶液和空白溶液，按"3. 1"项下的色谱条 件进行分析，记录色谱图。
[0022] 结果表明，正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯各 峰与相邻峰均达基线分离，分离度大于1.5,按邻二甲苯峰计算，理论塔板数（N)不低于 100000。
[0023] 3. 4线性关系 分别取上述混合对照品贮备液〇. 8、1. 2、1. 6、2. 0、2. 4 mL，加 N，N-二甲基甲酰胺定容 至100 mL，制成浓度为1. 6、2. 4、3. 2、4. 0、4. 8μ g*mL-l的系列混合对照品溶液(其中苯为 0. 16、0. 24、0. 32、0. 40、0. 48μ g*mL-l)，分别精密量取2 mL置10 mL顶空进样瓶中，密封，摇 匀，按"2. 1"项下的色谱条件进样测定，以峰面积（A)对浓度（C)进行线性回归，得回归方 程，结果见表1。
【权利要求】
1. 一种中药冻干注射剂中有机溶剂残留的测定方法，该中药冻干注射剂是由30-70重 量份的人参总皂苷提取物和20-60重量份的淫羊藿总黄酮提取物制成，其特征在于该方法 采用顶空气相色谱法测定。
2. 根据权利要求1所述测定方法，其特征在于所述顶空气相色谱法的色谱条件为： 色谱柱：毛细管柱填料为聚乙二醇-20M，规格为30mX 320 μ mXO. 25 μ m ;程序升温方 式为柱温60°C，保持2min，然后以10 °C 升至80°C，保持5min，再以15°C 升 至150°C，保持lmin ;FID检测器温度为240°C，进样口温度为200°C ;载气为氮气，流速1.0 mMmirr1 ;分流进样，分流比为10:1 ;顶空进样体积为lmL ;以水为溶剂平衡温度为90°C，平 衡时间为20 min。
3. 根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于所述中药冻干注射剂原料的 重量比例如下： 人参总皂苷提取物35淫羊藿总黄酮提取物55。
4. 根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于所述中药冻干注射剂原料的 重量比例如下： 人参总皂苷提取物65淫羊藿总黄酮提取物25。
5. 根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于所述中药冻干注射剂原料的 重量比例如下： 人参总皂苷提取物50淫羊藿总黄酮提取物40。
【文档编号】G01N30/02GK104062373SQ201410295915
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2010年6月17日 优先权日:2010年6月17日
【发明者】宋剑, 郑亚杰, 贾继明, 刘兴国, 王贵金, 蔡燕, 裴彩云 申请人:河北以岭医药研究院有限公司