一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，是采用超声提取的方法对牛肉中的阿维菌素类抗生素残留进行测定。本发明的有益效果为：本发明提供的一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，利用超声提取法来测定牛肉中阿维菌素、伊维菌素和多拉菌素等抗生素残留的检测，具有提取效率局，节省时间和有机溶剂，测定结果准确可靠的优点，适合实验室中大批量牛肉样品中阿维菌素、伊维菌素和多拉菌素中的一种或几种残留的检测。
【专利说明】一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗生素残留测定领域，具体涉及一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的 测定方法。
【背景技术】
[0002] 阿维菌素（Avermectin)是美国默克公司的研究人员1978年研制出的一种新的高 效、广谱抗寄生虫抗生素。它是由日本北里研究所收集的土壤样品中筛选出的一种叫阿维 链霉菌的放线菌产生的次级代谢产物。阿维菌素是一组含有8种组分的混合物。经过化 学修饰和同类骨架结构药物的衍生，现在市场上常见的阿维菌素类抗生素有阿维菌素、伊 维菌素和多拉菌素等多种。阿维菌素类药物在农业生产上是一类广谱抗寄生虫药物，在对 内寄生虫方面，几乎所有的线虫，不论何种寄主或种类，对口服或非肠道使用的阿维菌 素类药物都是敏感的。阿维菌素还可作饲料添加剂应用。据报道它对肉牛有显著的增重作 用，以阿维菌素作为小公牛的生长刺激剂时，日增重比对照组提高5. 9%，而lkg增重的耗 料量则降低8. 5 %。
[0003] 据调查，目前在我国肉牛饲养中，大多数牛场每年至少实施春秋两季驱虫，还有一 些养殖场会根据本场寄生虫病流行情况定期进行驱虫，抗寄生虫药物已成为牛场常用药物 的一部分。绝大多数抗寄生虫药物在体内的残留时间比较长，当用这些抗寄生虫药物给牛 驱虫时，如果使用不当或者没有严格执行休药期，就会造成该类药物在牛肉中的残留。消费 者食用了残留有阿维菌素类药物的牛肉就可能会造成该类药物在人体里的积累。因此残留 于牛肉的中的阿维菌素类药物会对人体造成潜在的危害。相关文献报道阿维菌素和伊维 菌素对未成年的哺乳动物(包括人）的中枢神经系统(脑和脊髓）有很强的毒性，甚至引起死 亡。人意外摄食阿维菌素和伊维菌素引起的不良反应包括：瞳孔放大、呕吐、嗜睡、心动过 速、苍白、血压异常等。考虑到牛肉中残留的阿维菌素和伊维菌素对人，特别是婴幼儿的潜 在危害，因此，有必要加强对牛肉中阿维菌素药物残留的监控，而现有技术中针对阿维菌素 类抗生素的检测方法存在效率低、时间长等缺陷。
[0004] 超声波提取分离主要是依据物质中有效成分和有效成分群体的存在状态、极性、 溶解性等设计的一项学科。合理利用超声波振动的方法进行提取的新工艺，使溶剂快速地 进入固体物质中，将其物质所含的有机成分尽可能完全地溶于溶剂之中，得到多成分混合 提取液。利用超声波技术来强化提取分离过程，可有效提高提取分离率，缩短提取时间、节 约成本、甚至还可以提高产品的质量和产量。超声波提取(也称为超声波萃取）以其提取 温度低、提取率高、提取时间短的独特优势被具有创新意识者应用于中药材和各种动、植物 有效含量的提取，是替代传统剪切工艺方法实现高效、节能、环保式提取的现代高新技术手 段。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种将超声波提取技术应 用到牛肉中阿维菌素类的抗生素残留检测中的检测方法。
[0006] 为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种牛肉中阿维菌素类抗生素残 留的测定方法，是采用超声提取的方法对牛肉中的阿维菌素类抗生素残留进行测定。
[0007] 进一步的，上述的一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，具体操作步骤 为：称取试样3g，放入100mL的具塞磨口锥形瓶中，加入有机溶剂作为超声提取溶剂，盖紧 塞子，置于超声清洗仪上进行萃取，萃取完毕后将萃取液立即过滤到试管中，在45°C下用氮 吹仪吹干，再向试管里加入含有体积百分比为50%的N-甲基咪唑的乙腈溶液150 μ 1，置于 超声清洗仪上若干秒后，再加入含有体积百分比为35%的三氟乙酸酐的乙腈溶液200 μ 1， 摇匀半分钟之后，再加入乙腈溶液650 μ 1，放置20min之后转入到进样瓶以高效液相色谱 仪测定即可。
[0008] 进一步的，上述的一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，所述超声提取 溶剂为乙腈溶液，加入量为每lg试样加入3ml乙腈溶液。
[0009] 进一步的，上述的一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，所述液相色谱 测定的具体方法为，以体积比90 :10的乙腈和水为流动相，设置流速为1. Oml/min，柱温 30°C，进样体积20 μ 1，荧光检测器激发波长为365nm，发射波长为475nm。
[0010] 进一步的，上述的一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，所述超声提取 过程中，温度为30°C，提取时间为15min。 toon] 本发明的有益效果为：本发明提供的一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方 法，利用超声提取法来测定牛肉中阿维菌素、伊维菌素和多拉菌素等抗生素残留的检测，具 有提取效率高，节省时间和有机溶剂，测定结果准确可靠的优点，适合实验室中大批量牛肉 样品中阿维菌素、伊维菌素和多拉菌素中的一种或几种残留的检测。
【专利附图】
【附图说明】
[0012] 图1为牛肉加标10 μ g/kg的色谱图。
【具体实施方式】
[0013] 实施例1 : 一、试剂与仪器： KQ-600DE型超声清洗仪：昆山超声清洗仪器厂； XS205型电子天平：Mettler Toledo公司； 组织均楽仪：美国waters公司； H-2050R型湘雅离心机； 氮吹仪：美国waters公司； Waters 2695型高效液相色谱仪：美国waters公司； SunFireTMC18 柱：4. 6 mm X 250 mm，5 μ m，美国 waters 公司。
[0014] 二、试剂和材料： 三氟乙酸酐：购自上海国药集团； N-甲基咪唑：购自上海国药集团； 乙腈：色谱纯，购比利时fisher公司； 实验用水为超纯水； 阿维菌素、伊维菌素和多拉菌素标准品：购自德国Dr. Ehrenstorfer公司。
[0015] 三、超声提取： 精确称取试样3.0 g，放入100 mL的具塞磨口锥形瓶中，加入一定量的有机溶剂作为 提取液，盖紧塞子，置于超声清洗仪上进行萃取，萃取完毕后将萃取液立即过滤到试管中， 在45°C下用氮吹仪吹干。再向试管里，加入体积比50%的N-甲基咪唑的乙腈溶液150 μ 1， 置于超声清洗仪上若干秒后，再加入体积比35%的三氟乙酸酐乙腈溶液200 μ 1，用手摇动 半分钟之后，再加入乙腈650 μ 1，放置20min之后转到进样瓶里面，上高效液相色谱仪测 定。
[0016] 四、液相色谱仪器方法： 流动相为乙腈和水（V:V=90:10)，流速为l.Oml/min，柱温30°C，进样体积20μ 1，荧光 检测器激发波长：365nm，发射波长475nm。
[0017] 五、超声提取条件的优化： 一）提取时间： 其他条件不变，分别设定超声提取时间为5min、lOmin、15min、20min和30min为单因素 条件，测定不同超声提取时间下的阿维菌素类药物残留加标回收率（5 μ g/kg)，超声提取提 取时间对提取效果的影响结果见表1。随着超声提取时间的延长，样品中阿维菌素类药物的 检出浓度逐渐增大；15 min后，渐趋稳定。由于萃取体系并非绝对的密闭体系，随着超声时 间的延长会造成阿维菌素类药物的损失，因此15 min为最佳超声萃取时间。
[0018] 表 1
【权利要求】
1. 一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，其特征在于，是采用超声提取的方 法对牛肉中的阿维菌素类抗生素残留进行测定。
2. 根据权利要求1所述的一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，其特征在 于，具体操作步骤为：称取试样3g,放入lOOmL的具塞磨口锥形瓶中，加入有机溶剂作为超 声提取溶剂，盖紧塞子，置于超声清洗仪上进行萃取，萃取完毕后将萃取液立即过滤到试管 中，在45°C下用氮吹仪吹干，再向试管里加入含有体积百分比为50%的N-甲基咪唑的乙腈 溶液150 μ 1，置于超声清洗仪上若干秒后，再加入含有体积百分比为35%的三氟乙酸酐的 乙腈溶液200 μ 1，摇匀半分钟之后，再加入乙腈溶液650 μ 1，放置20min之后转入到进样瓶 以高效液相色谱仪测定即可。
3. 根据权利要求2所述的一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，其特征在 于，所述超声提取溶剂为乙腈溶液，加入量为每lg试样加入3ml乙腈溶液。
4. 根据权利要求3所述的一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，其特征在 于，所述液相色谱测定的具体方法为，以体积比90 :10的乙腈和水为流动相，设置流速为 1. Oml/min，柱温30°C，进样体积20 μ 1，荧光检测器激发波长为365nm，发射波长为475nm。
5. 根据权利要求4所述的一种牛肉中阿维菌素类抗生素残留的测定方法，其特征在 于，所述超声提取过程中，温度为30°C，提取时间为15min。
【文档编号】G01N30/06GK104215709SQ201410454257
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月9日 优先权日:2014年9月9日
【发明者】熊琳, 李维红, 高雅琴, 杨晓玲 申请人:中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所