一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法
【专利摘要】本发明属于食品安全【技术领域】，具体涉及一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法。本发明前处理方法包括待测样品的称量、提取、回旋振荡、离心、净化、衍生化等操作；所用仪器包括离心机、振荡器、恒温干燥箱和氮吹仪等；用本前处理方法制备出的样品溶液可以直接用气相色谱－质谱法进行检测。该前处理方法与现有方法相比，具有操作成本低、高重现性、高准确性、高灵敏度等优点，具有很强的可操作性，有望在农业、质检部门及出入境检验检疫等行业大规模推广应用，具有显著的经济效益。本发明可以准确检测到肉类中是否含有氯霉素，经检测后的动物产品食用是安全的，并符合我国国家标准的要求。
【专利说明】一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食品安全【技术领域】，具体涉及一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法。
【背景技术】
[0002]氯霉素是一种高效广谱的抗生素，在各种动物传染性疾病的防治方面得到了广泛的应用，由于氯霉素有严重的毒副作用，长期微量摄入氯霉素不仅会使大肠杆菌、沙门氏菌等多种菌株产生耐药性，而且会引起动物机体正常菌群失调、抵抗力降低、易感染各种疾病。氯霉素在食用动物中的残留，可通过食物链在人体中富集，因此对人类的健康构成了潜在危害。许多国家和地区已经相继禁止或严格限制使用氯霉素，1999年9月13日，我国农业部发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》的通知，规定了氯霉素在所有食品动物的可食用组织中不得检出。但由于氯霉素抑菌效果好，价格低廉，目前违法使用的现象时有发生。因此，建立高灵敏度、特异性强、简便易行而又经济的氯霉素残留的分析方法已经成为一项迫切的任务。
[0003]现有检测动物产品中氯霉素含量的方法包括氯霉素检测方法包括微生物法、色谱法、免疫测定法。微生物法易操作，费用低，但灵敏度低，特异性差；免疫测定具有灵敏度高、特异性强、对仪器设备和人员素质要求低以及样品前处理简单等优点，适于现场监控和大规模样品筛选，但其影响因素较多，易出现假阳性结果，抗体批次不同，测定结果也会出现差异等；色谱法精确可靠、灵敏度高，检测极限可达到0.1 μ gPkg，但前处理步骤多，回收率偏低，所以急需一种操作成本低，具备高重现性、高准确性、高灵敏度的前处理方法。
【发明内容】
[0004]本发明前处理方法包括待测样品的称量、提取、回旋振荡、离心、净化、衍生化等操作；所用仪器包括离心机、振荡器、恒温干燥箱和氮吹仪等；用本前处理方法制备出的样品溶液可以直接用气相色谱一质谱法进行检测。该前处理方法与现有方法相比，具有操作成本低、高重现性、高准确性、高灵敏度等优点，具有很强的可操作性，有望在农业、质检部门及出入境检验检疫等行业大规模推广应用，具有显著的经济效益。本发明可以准确检测到肉类中是否含有氯霉素，经检测后的动物产品食用是安全的，并符合我国国家标准的要求。
[0005]为实现上述目的，本发明提供一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法，由以下步骤组成:
[0006](I)提取；称取3?8g匀浆后的肉类或蛋类置于10mL离心管中，加入15?25mL乙酸乙酯，均质0.5?1.5min,回旋振荡15?25min, 2500?3500r/min离心3?8min ;取上清液转入另一 10mL离心管中，试样中再用10?20mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮气吹干；
[0007](2)净化；加入0.5?1.5mL甲醇超声溶解残渣，依次加入15?25mL质量分数为3%?8%氯化钠和5?15mL正己烧；回旋振荡5?15min,弃去正己烧层；再加入10?20mL乙酸乙酯，回旋振荡5?15min，静置分层，吸取上层转入15mL具塞离心管中，氮气吹至 0.5 ?1.5mL ；
[0008](3)衍生化；将上述液体移入5mL具塞离心管中，用I?3mL乙酸乙酯洗原离心管，合并乙酸乙酯溶液，用50°C?60°C氮气蒸发至干；向残余物中依次加入90?110 μ L正己烷，90?110 μ L硅烷化试剂，混匀20?40s，于恒温干燥箱中110°C?130°C反应20?40min，氮气吹干；加入0.3?0.6mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测液。
[0009]所述步骤(I)进一步优选为称取5.0g匀浆后的肉类或蛋类置于10mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯,均质Imin,回旋振荡20min, 3000r/min离心5min ;取上清液转入另一10mL离心管中，试样中再用15mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮气吹干。
[0010]所述步骤((2)进一步优选为加入ImL甲醇超声溶解残渣，依次加入20mL 5%氯化钠和1mL正己烧；回旋振荡lOmin。弃去正己烧层；再加入15mL乙酸乙酯，回旋振荡1min,静置分层，吸取上层转入15mL具塞离心管中，氮气吹至lmL。
[0011]所述步骤(3)进一步优选为将上述液体移入5mL具塞离心管中，用2mL乙酸乙酯洗原离心管，合并乙酸乙酯溶液，用55°C氮气蒸发至干；向残余物中依次加入10yL正己烷，100 μ L硅烷化试剂，混匀30s，于恒温干燥箱中120°C反应30min，氮气吹干；加入0.50mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测液。
[0012]本发明具有定量准确、灵敏度高、检出限低、操作简单、分析时间短、适用范围广等优点，能够满足国内食品安全的标准和出口有关要求，与现有技术相比，具有如下特点:
[0013]1.操作成本低。其他专利技术一般是采用固相萃取方法进行净化，提高了检测成本。本专利创新采取液液萃取方法，在保证净化效果前提下，极大降低前处理检测成本(一个固相萃取柱约30元)，具有广阔的应用前景。
[0014]2.操作简单、分析时间短。一般人员经过简单的培训即可掌握，前处理时间比其他专利技术方法短，能够更适用于满足企业和各类检测机构快速检测的需要。
[0015]3.适用范围广。其他专利技术方法一般只适用于鸡肉或猪肉相比，本发明技术方法经实验证明，可广泛的适用于包括肉类、蛋类、动物内脏等动物产品，适用范围广等优点。
【具体实施方式】
[0016]为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例子仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0017]实施例1:
[0018]一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法，由以下步骤组成:
[0019](I)提取；称取5.0g匀浆后的肉类或蛋类置于10mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯，均质Imin,回旋振荡20min, 3000r/min离心5min ;取上清液转入另一 10mL离心管中，试样中再用15mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮气吹干；
[0020](2)净化；加入ImL甲醇超声溶解残渣，依次加入20mL 5%氯化钠和1mL正己烷；回旋振荡lOmin。弃去正己烧层；再加入15mL乙酸乙酯，回旋振荡1min,静置分层，吸取上层转入15mL具塞离心管中，氮气吹至ImL ；
[0021](3)衍生化；将上述液体移入5mL具塞离心管中，用2mL乙酸乙酯洗原离心管，合并乙酸乙酯溶液，用55°C氮气蒸发至干；向残余物中依次加入100 μ L正己烷，100 μ L硅烷化试剂，混匀30s，于恒温干燥箱中120°C反应30min，氮气吹干；加入0.50mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测液。
[0022]实施例2:
[0023]一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法，由以下步骤组成:
[0024](I)提取；称取3g匀浆后的肉类或蛋类置于10mL离心管中，加入25mL乙酸乙酯，均质0.5min,回旋振荡25min, 2500r/min离心8min ;取上清液转入另一 10mL离心管中，试样中再用1mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮气吹干；
[0025](2)净化；加入1.5mL甲醇超声溶解残渣，依次加入15mL浓度为8%氯化钠和5mL正己烧；回旋振荡15min,弃去正己烧层；再加入1mL乙酸乙酯，回旋振荡15min,静置分层，吸取上层转入15mL具塞离心管中，氮气吹至0.5mL ；
[0026](3)衍生化；将上述液体移入5mL具塞离心管中，用3mL乙酸乙酯洗原离心管，合并乙酸乙酯溶液，用50°C氮气蒸发至干；向残余物中依次加入IlOyL正己烷，90yL硅烷化试剂，混匀40s，于恒温干燥箱中110°C反应40min，氮气吹干；加入0.3mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测液。
[0027]实施例3:
[0028]一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法，由以下步骤组成:
[0029](I)提取；称取8g匀浆后的肉类或蛋类置于10mL离心管中，加入15mL乙酸乙酯，均质1.5min,回旋振荡15min, 3500r/min离心3min ;取上清液转入另一 10mL离心管中，试样中再用20mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮气吹干；
[0030](2)净化；加入0.5mL甲醇超声溶解残渣，依次加入25mL浓度为3%氯化钠和15mL正己烧；回旋振荡5min,弃去正己烧层；再加入20mL乙酸乙酯，回旋振荡5min,静置分层，吸取上层转入15mL具塞离心管中，氮气吹至1.5mL ；
[0031](3)衍生化；将上述液体移入5mL具塞离心管中，用ImL乙酸乙酯洗原离心管，合并乙酸乙酯溶液，用60°C氮气蒸发至干；向残余物中依次加入90 μ L正己烷，110 μ L硅烷化试剂，混匀20s，于恒温干燥箱中130°C反应20min，氮气吹干；加入0.6mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测液。
[0032]以上已将本发明做一详细说明，以上所述，仅为本发明之较佳实施例而已，当不能限定本发明实施范围，即凡依本申请范围所作均等变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖范围内。
【权利要求】
1.一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法，其特征在于由以下步骤组成: (1)提取；称取3?8g匀浆后的肉类或蛋类置于10mL离心管中，加入15?25mL乙酸乙酯，均质0.5?1.5min,回旋振荡15?25min, 2500?3500r/min离心3?8min ;取上清液转入另一 10mL离心管中，试样中再用10?20mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮气吹干； (2)净化；加入0.5?1.5mL甲醇超声溶解残渣，依次加入15?25mL质量分数为3%?8%氯化钠和5?15mL正己烧；回旋振荡5?15min,弃去正己烧层；再加入10?20mL乙酸乙酯，回旋振荡5?15min,静置分层，吸取上层转入15mL具塞离心管中，氮气吹至0.5?1.5mL ； (3)衍生化；将上述液体移入5mL具塞离心管中，用I?3mL乙酸乙酯洗原离心管，合并乙酸乙酯溶液，用50°C?60°C氮气蒸发至干；向残余物中依次加入90?110 μ L正己烷，90?110 μ L硅烷化试剂，混匀20?40s，于恒温干燥箱中110°C?130°C反应20?40min，氮气吹干；加入0.3?0.6mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测液。
2.如权利要求1所述的一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法，其特征在于:所述步骤(I)为称取5.0g匀浆后的肉类或蛋类置于10mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯，均质Imin,回旋振荡20min, 3000r/min离心5min ;取上清液转入另一 10mL离心管中，试样中再用15mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮气吹干。
3.如权利要求1所述的一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法，其特征在于:所述步骤(2)为加入ImL甲醇超声溶解残渣，依次加入20mL 5%氯化钠和1mL正己烷；回旋振荡lOmin。弃去正己烧层；再加入15mL乙酸乙酯，回旋振荡1min,静置分层，吸取上层转入15mL具塞离心管中，氮气吹至ImL。
4.如权利要求1所述的一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法，其特征在于:所述步骤(3)为将上述液体移入5mL具塞离心管中，用2mL乙酸乙酯洗原离心管，合并乙酸乙酯溶液，用55°C氮气蒸发至干；向残余物中依次加入100 μ L正己烧，100 μ L硅烷化试剂，混匀30s，于恒温干燥箱中120°C反应30min，氮气吹干；加入0.50mL甲苯溶解，用0.25 μ m微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测液。
【文档编号】G01N30/06GK104280483SQ201410493782
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年9月24日 优先权日:2014年9月24日
【发明者】路平 申请人:中国动物卫生与流行病学中心