Arhgap26作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及ARHGAP26作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物。本发明用ITRAQ蛋白质组学的方法对开放和闭合的人动脉导管组织进行鉴定分析，筛选出132个有差异的蛋白，进行信号通路分析后，挑选ARHGAP26蛋白，用Western Blot、Qrt-PCR和免疫组化三种方法进行了鉴定，首次证明该蛋白在人动脉导管组织中表达，并且该蛋白在闭合和开放的两组动脉导管组织具有明显的差异，可能是调控动脉导管闭合或开放的关键因子，可用于动脉导管未闭的临床诊断，且诊断的准确度高。
【专利说明】ARHGAP26作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物 【【技术领域】】
[0001] 本发明设及分子生物学及医学的临床诊断【技术领域】，具体地说，设及ARHGAP26作 为诊断动脉导管闭合或开放的标志物。 【【背景技术】】
[0002] 动脉导管（化ctus arteriosus, DA)为胎儿时期降主动脉和肺动脉之间的正常通 道，正常新生儿生后10-1化可达到功能性关闭，3个月达解剖学上的关闭。如果DA关闭机 制异常，即为动脉导管未闭（patent ductus arteriosus, PDA)。PDA是常见的先天性屯、脏 病，发病率在先天性屯、脏崎形中占第2位。早产儿因为生后氧诱导DA收缩机制不成熟，且 DA对血管活性物质的反应敏感性下降，PDA的发病率较高，体重低于1750g的早产儿中45% 有PDA。及时关闭动脉导管有助于改善缺氧，控制屯、脏衰竭，降低早产儿死亡率。
[0003] 动脉导管未闭的临床表现取决于主动脉至肺动脉分流血量的多少W及是否产生 继发肺动脉高压和其程度。轻者可无明显症状，重者可发生屯、力衰竭。常见的症状有劳累 后屯、惇、气急、乏力，易患呼吸道感染和生长发育迟缓。晚期肺动脉高压严重，产生逆向分流 时可出现下半身发组。动脉导管未闭体检时，典型的体征是胸骨左缘第2肋间听到响亮的 连续性机器样杂音，伴有震颤，肺动脉第2音亢进，但常被响亮的杂音所掩盖。对于婴幼儿 动脉导管未闭合患者，仅可听到收缩期杂音，或收缩期杂音亦消失而代之W肺动脉瓣关闭 不全的舒张期杂音，诊断难度较大。因此提供诊断动脉导管闭合或开放的标志物是十分必 要的。
[0004] ARHGAP26 巧ho GTPase activating protein 26)，又名 GRAF (GTPase Regulator Associated with Focal A 化 esion Kinase),是一种 GTP 酶活化蛋白。ARHGAP26 能负向 调控化oA和Cdc42,影响化0蛋白促进细胞迁移和增殖功能的发挥；此外该蛋白与FAK 相互作用参与调控整合素信号通路，在化IC/GEEC (clat虹in-independent carrier/ GPI-anchored protein-enriched early endocytic compartment)胞吞途径中也发挥重要 功貪良（Lundmark R, Doherty GJ, et al. The GTPase-Activating Protein GRAFl Regulates the 化IC/GEEC 化docytic PathwaypLJ]. Curr Biol, 2008, 18(22) : 1802-1808)。普遍认为 ARHGAP26具有肿瘤抑制功能，ARHGAP26基因缺陷会导致粒细胞白血病，在髓系恶性肿瘤、 转移性脑瘤、X-连锁的a地中海贫血智力低下综合征等患者中，ARHGAP26表达量明显下 降。目前，关于ARHGAP26作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物还未见报道。 【
【发明内容】
】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供了 ARHGAP26蛋白或其特异性抗体 的用途。
[0006] 本发明的再一的目的是，提供一种用于诊断动脉导管未闭合的试剂盒。
[0007] 本发明的另一的目的是，提供一种巧片或阵列。
[000引为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
[0009] ARHGAP26蛋白在作为诊断动脉导管开放或闭合的标志物中的应用。
[0010] ARHGAP26蛋白或其特异性抗体的用途，用于制备诊断动脉导管未闭合的试剂或试 剂盒。
[0011] 为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是；
[0012] 一种用于诊断动脉导管未闭合的试剂盒，所述的试剂盒包含检测ARHGAP26蛋白 含量的试剂和检测0 -actin蛋白含量的试剂。
[0013] 所述的检测ARHGAP26蛋白含量的试剂为ARHGAP26蛋白的特异性抗体，所述的检 测0 -actin蛋白含量的试剂为0 -actin蛋白的特异性抗体。
[0014] 为实现上述第S个目的，本发明采取的技术方案是：
[0015] 一种巧片或阵列，所述的巧片或阵列上具有检测ARHGAP26蛋白含量的试剂和检 测e-actin蛋白含量的试剂。
[0016] 所述的检测ARHGAP26蛋白含量的试剂为ARHGAP26蛋白的特异性抗体，所述的检 测e-actin蛋白含量的试剂为e-actin蛋白的特异性抗体。
[0017] 本发明优点在于：
[0018] 本发明使用口RAQ蛋白质组学的方法对开放和闭合的人动脉导管组织进行鉴定 分析，筛选出132个有差异的蛋白，通过信号通路分析，挑选出ARHGAP26蛋白，用western blot,化t-PCR和免疫组化S种方法进行了鉴定，首次证明该蛋白在人动脉导管组织中表， 并且该些蛋白在闭合和开放的两组动脉导管组织具有明显的差异，可能是调控动脉导管闭 合或开放的关键因子。本发明提供了一个用于区分闭合动脉导管和未闭合动脉导管的蛋白 标志物ARHGAP26,利用该标志物制备诊断动脉导管未闭合的试剂、试剂盒、巧片和阵列。本 发明为有效判断动脉导管开放或闭合提供可靠的检测手段。 【【专利附图】
【附图说明】】
[0019] 附图1是闭合（Constricted)和开放（Patent)动脉导管组织形态学的比较。
[0020] 附图 2 是 ARHGAP26 蛋白的 western-blot 结果。
[002U 附图3是ARHGAP26蛋白的RT-PCR结果。
[0022] 附图4是ARHGAP26蛋白的免疫组化结果。 【【具体实施方式】】
[0023] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。下列实施例中未注 明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆；实验手册（New York:Cold Spring Harbor L油oratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建 议的条件。
[0024] 实施例1 [002引一、材料和方法
[0026] 1. 1分离人动脉导管组织
[0027] 根据国家卫生部有关医学伦理审查方法，本实验所有步骤和过程均获得上海交通 大学医学院伦理委员会审查批准并与患者签订知情同意书。
[002引 开放（n = 10,年龄=30. 2 + 6. 3days)或闭合（n = 10,年龄=25. 3 + 7. 9days) 的动脉导管组织取自于上海交通大学医学院附属上海儿童医学中屯、手术过程中的动脉导 管依赖的先天性屯、脏病患儿（患儿详细信息见表1)。所有病人在手术前均使用前列腺素 E1，但闭合组的动脉导管在手术前依然闭合了。所有样本离体后，用生理盐水冲洗数遍，分 成四部分，然后迅速冻存于液氮中。所有样品的状态（开放或闭合）均经过屯、脏超声和CT 确认，并在手术过程加W确认。
[0029] 表 1
[0030]
【权利要求】
1. ARHGAP26蛋白在作为诊断动脉导管开放或闭合的标志物中的应用。 2. ARHGAP26蛋白或其特异性抗体的用途，其特征在于，用于制备诊断动脉导管未闭合 的试剂或试剂盒。
3. -种用于诊断动脉导管未闭合的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含检测 ARHGAP26蛋白含量的试剂和检测0 -actin蛋白含量的试剂。
4. 根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测ARHGAP26蛋白含量的试剂 为ARHGAP26蛋白的特异性抗体，所述的检测|3 -actin蛋白含量的试剂为|3 -actin蛋白的 特异性抗体。
5. -种芯片或阵列，其特征在于，所述的芯片或阵列上具有检测ARHGAP26蛋白含量的 试剂和检测|3 -actin蛋白含量的试剂。
6. 根据权利要求5所述的芯片或阵列，其特征在于，所述的检测ARHGAP26蛋白含量的 试剂为ARHGAP26蛋白的特异性抗体，所述的检测|3 -actin蛋白含量的试剂为|3 -actin蛋 白的特异性抗体。
【文档编号】G01N33/68GK104502602SQ201410723729
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月3日 优先权日:2014年12月3日
【发明者】叶霖财, 刘锦纷, 洪海筏 申请人:上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心