Myo1d作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及MYO1D作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物。本发明用ITRAQ蛋白质组学的方法对开放和闭合的人动脉导管组织进行鉴定分析，筛选出132个有差异的蛋白，进行信号通路分析后，挑选MYO1D蛋白，用western blot、Qrt-PCR和免疫组化三种方法进行了鉴定，首次证明该蛋白在人动脉导管组织中表达，并且该蛋白在闭合和开放的两组动脉导管组织具有明显的差异，可能是调控动脉导管闭合或开放的关键因子，可用于动脉导管未闭的临床诊断，且诊断的准确度高。
【专利说明】MY01D作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物
【技术领域】
[0001] 本发明设及分子生物学及医学的临床诊断【技术领域】，具体地说，设及MY01D作为 诊断动脉导管闭合或开放的标志物。
【背景技术】
[0002] 动脉导管是主动脉与肺动脉之间的一根管道，为胎儿循环的重要通路。小儿出生 后，动脉导管即在功能上关闭，绝大多数婴儿生后3个月左右在解剖上逐渐闭合成为动脉 初带，若不闭合即称动脉导管未闭。动脉导管的闭合分为两期；1.第一期为生理闭合期。婴 儿出生啼哭后第一 口吸气，肺泡即膨胀，肺血管阻力随之下降，肺动脉血流开始直接进入肺 脏，建立正常的肺循环，而不流经动脉导管，促进其闭合。动脉导管的组织学结构与两侧的 主动脉、肺动脉不同，管壁主要由平滑肌而不是弹性纤维组织组成，中层含粘性物质。足月 婴儿出生后血氧张力升高，作用于平滑肌，使之环形收缩，同时管壁粘性物质凝固，内膜垫 突入管腔，造成血流阻滞，营养障碍和细胞分解性坏死，因而导管发生生理性闭合。一般在 出生后10?15小时内完成，但在7?8天内有潜在性再开放的可能。2.此后内膜垫弥漫 性纤维增生完全封闭管腔，最终形成导管初带。导管纤维化一般起始于肺动脉侧，向主动脉 延伸，但主动脉端可W不完成，因而呈壶腹状。纤维化解剖性闭合，88%婴儿于8周内完成。 如该闭合过程延迟称动脉导管延期未闭。动脉导管出生后6个月未能闭合，将终生不能闭 合，则称持续动脉导管闭锁不全，临床上简称动脉导管闭锁不全。
[0003] 肌球蛋白是真核细胞内的一类分子马达，对细胞的运动与传输起着重要的作用。 例如肌球蛋白II就在肌肉收缩和细胞分裂的过程中扮演了重要的角色。其他种类的肌球 蛋白也有着类似的功能。肌球蛋白有I-XVII型，其中肌球蛋白I型又包括MY01A、MY01B、 MY01C、MY01D、MY01E、MY01F、MY01G、MY01H。
[0004] 有许多从左向右分流屯、内崎形在胸骨左缘可听到同样的连续性机器样杂音或接 近连续的双期屯、杂音，难W辨识，在建立动脉导管未闭诊断进行治疗前必须予W鉴别。目前 尚未见关于动脉导管闭合诊断标志物的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供了 MY01D蛋白或其特异性抗体的用 途。
[0006] 本发明的再一的目的是，提供一种用于诊断动脉导管未闭的试剂盒。
[0007] 本发明的另一的目的是，提供一种巧片或阵列。
[000引为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：
[0009] MY01D蛋白或其特异性抗体的用途，用于制备诊断动脉导管未闭的试剂或试剂盒。
[0010] 为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
[0011] 一种用于诊断动脉导管未闭的试剂盒，所述的试剂盒包含检测MY01D蛋白含量的 试剂和检测e-actin蛋白含量的试剂。
[001引优选地，所述的检测MYOID蛋白含量的试剂为MYOID蛋白的特异性抗体，所述的检 测e-actin蛋白含量的试剂为e-actin蛋白的特异性抗体。为实现上述第S个目的，本 发明采取的技术方案是：
[0013] 一种巧片或阵列，所述的巧片或阵列上具有检测MY01D蛋白含量的试剂和检测 0 -actin蛋白含量的试剂。
[0014] 优选地，所述的检测MY01D蛋白含量的试剂为MY01D蛋白的特异性抗体，所述的检 测e-actin蛋白含量的试剂为e-actin蛋白的特异性抗体。
[001引本发明优点在于：
[0016] 本发明用口RAQ蛋白质组学的方法对开放和闭合的人动脉导管组织进行鉴定分 析，筛选出132个有差异的蛋白，进行信号通路分析后，挑选MY01D蛋白，用western blot、 化t-PCR和免疫组化S种方法进行了鉴定，首次证明该蛋白在人动脉导管组织中表达，并且 该蛋白在闭合和开放的两组动脉导管组织具有明显的差异，可能是调控动脉导管闭合或开 放的关键因子，可用于动脉导管未闭的临床诊断，且诊断的准确度高。
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 附图1是闭合（Constricted)和开放（Patent)动脉导管组织形态学的比较。
[0018] 附图 2 是 Myold 蛋白的 western-blot 结果。
[0019] 附图3是Myold蛋白的RT-PCR结果。
[0020] 附图4是Myold蛋白的免疫组化结果。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。下列实施例中未注 明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆；实验手册（New York:Cold Spring Harbor L油oratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建 议的条件。
[0022] 实施例1
[002引一.材料和方法
[0024] 1. 1分离人动脉导管组织
[0025] 该实验所有步骤和过程均获得上海交通大学医学院伦理委员会批准。开放（n = 10,年龄=30. 2 + 6. 3天）或闭合（n = 10,年龄=25. 3 + 7. 9天）的动脉导管组织取自于 手术过程中的动脉导管依赖的先天性屯、脏病患儿（患儿详细信息见表1)。所有病人在手 术前均使用前列腺素E1，但闭合组的动脉导管在手术前依然闭合了。动脉导管的状态（开 放或闭合）均经过屯、脏超声和CT确认，并在手术过程加W确认。所有样本用生理盐水冲洗 后，分成四部分，并迅速冻存于液氮中。
[0026] 表1患儿临床信息
[0027]
【权利要求】
1. MY01D蛋白或其特异性抗体的用途，其特征在于，用于制备诊断动脉导管未闭的试剂 或试剂盒。
2. -种用于诊断动脉导管未闭的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含检测MY01D 蛋白含量的试剂和检测0 -actin蛋白含量的试剂。
3. 根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测MY01D蛋白含量的试剂为 MY01D蛋白的特异性抗体，所述的检测0-actin蛋白含量的试剂为0-actin蛋白的特异性 抗体。
4. 一种芯片或阵列，其特征在于，所述的芯片或阵列上具有检测MY01D蛋白含量的试 剂和检测0 -actin蛋白含量的试剂。
5. 根据权利要求4所述的芯片或阵列，其特征在于，所述的检测MY01D蛋白含量的试剂 为MY01D蛋白的特异性抗体，所述的检测0-actin蛋白含量的试剂为0-actin蛋白的特 异性抗体。
【文档编号】G01N33/68GK104502603SQ201410723745
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月3日 优先权日:2014年12月3日
【发明者】叶霖财, 刘锦纷, 洪海筏 申请人:上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心