壮药材滇桂艾纳香hplc指纹图谱的建立方法
【专利摘要】本发明公开了一种壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，采用高效液相色谱，以滇桂艾纳香中的主要成分原儿茶酸和原儿茶醛为参照物，据此获得了壮药滇桂艾纳香药材共有模式的指纹图谱。指纹图谱共有色谱峰13个，它能充分反应滇桂艾纳香药材中的化学成分，信息量丰富，方法重现性良好，对控制药材质量和鉴别药材优劣提供了更有力的理论依据，提高了壮药滇桂艾纳香药材的质量控制和真伪鉴别的水平，实现了快速、准确地鉴别滇桂艾纳香的真伪优劣。
【专利说明】壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析中的中药材指纹图谱【技术领域】，尤其涉及一种壮药材滇桂艾 纳香HPLC指纹图谱的建立方法。
【背景技术】
[0002] 滇桂艾纳香为菊科艾纳香属植物Blumeariparia(Bl)DC的干燥全草，在广西尤其 是在百色地区有较长的使用历史。滇桂艾纳香主产于广西西南部（百色、德保、凌云）、广 东南部、云南西南至东南部，具有活血、止血、利水的功效，用于经期提前、产后血崩、产后浮 月中，不孕症，阴疮。
[0003] 中药指纹图谱是指中药材或中成药经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各 组分群体共有特征的图谱或图象。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴定手段，它是建 立在中药化学成分系统研宄的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真 实性、优良性和稳定性。从中药全面质量控制的角度看，高效液相色谱（HPLC)指纹图谱在 国际上容易获得认可，包括美国、英国、法国、加拿大、德国、日本和印度在内的许多国家更 愿意接受HPLC指纹图谱。
[0004] 近年来的生药学、化学中记载的壮药滇桂艾纳香主要有性状鉴别、显微鉴别及理 化鉴别方法，其质量标准起草说明中也用到了薄层鉴别方法，但这些方法都存在提供的信 息量小，样品化学成分体现不完全，可鉴别的成分数量较少等问题，因而不能很好地代表壮 药滇桂艾纳香的整体质量。LeelakittisinBenjakarn等（滇桂艾纳香的高效液相色谱指 纹图谱的鉴别方法的研宄，中国临床新医学，2014年，第5期）对滇桂艾纳香指纹图谱鉴别 研宄进行了有益尝试，他采用原儿茶酸、绿原酸为参照物进行标定，共标定11个共有峰。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种简便、稳定、精密度高、重现性好的壮药材滇 桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，以实现快速、准确地鉴别滇桂艾纳香的真伪优劣。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图 谱的建立方法，包括以下步骤：
[0007] (1)制备对照品溶液：加甲醇配制成每1ml分别含原儿茶酸、原儿茶醛25yg的混 合对照品溶液；
[0008] (2)供试品溶液的制备：精密称取壮药滇桂艾纳香药材粗粉，加水浸泡后，煎煮3 次，每次1. 5h，滤过，合并滤液并浓缩至约40ml，用稀盐酸调pH后，用乙醚萃取，合并乙醚液 蒸干后用甲醇溶解残渣，滤过，即可；
[0009] (3)色谱条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为甲醇 与冰醋酸组成的梯度洗脱液，紫外检测：波长为200?300nm;
[0010] (4)测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得 到指纹图谱。
[0011] 步骤（2)按以下操作进行：精密称取滇桂艾纳香药材粗粉约2?8g，精密稳定，加 水煎煮3次，每次加水200ml煎煮1. 5h，其中第一次加水200ml，先浸泡10?40min后，煎 煮；滤过，合并3次煎煮的滤液并浓缩至约40ml，放冷，用稀盐酸调pH= 2-3,用乙醚萃取 4次，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇适量溶解，并转移至10ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇 匀，滤过，即可。
[0012] 步骤（2)按以下操作进行：精密称取滇桂艾纳香药材粗粉约5g，精密稳定，加水煎 煮3次，每次加水200ml煎煮1. 5h，其中第一次加水200ml，先浸泡30min后，煎煮；滤过， 合并3次煎煮的滤液并浓缩至约40ml，放冷，用稀盐酸调pH= 2-3,用乙醚萃取4次，每次 2〇1111、151111、151111、151111，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇适量溶解，并转移至1〇1111的量瓶中， 加甲醇至刻度，摇匀，用0. 45ym微孔滤膜滤过，取续液即可。
[0013] 步骤（3)的色谱条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流 动相为1 %的冰醋酸（色谱用）与甲醇组成的梯度洗脱液，柱温25°C，紫外检测：波长为 256nm，流速为1.Oml/min，分析时间为85min。
[0014] 梯度洗脱的程序设为时间梯度Omin- 4min-lOmin- 20min- 35min- 40min- 85m in;对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相Bl%冰醋酸组成，流动相A的 体积百分数梯度10%-10%-18% - 23% - 25% - 40% - 40%，流动相B的体积百分数 梯度 90%- 90%- 82%- 77%- 75%- 60%- 60%。
[0015] 步骤（4)按以下操作进行：精密吸取供试品溶液10?20y1注入高效液相色谱 仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。
[0016] 指纹图谱共有色谱峰有13个，其保留时间分别为5. 919min、14. 515min、 17.867min、21.74min、24. 579min、25. 785min、29. 338min、31. 880min、37. 903min、 49. 410min、51. 148min、53. 373min、60. 022min。
[0017] 为提高壮药滇桂艾纳香药材的质量控制和真伪鉴别的水平，发明人采用高效液相 色谱，以滇桂艾纳香中的主要成分原儿茶酸和原儿茶醛为参照物，研发了一种壮药材滇桂 艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，据此获得了壮药滇桂艾纳香药材共有模式的指纹图谱， 指纹图谱共有色谱峰13个，它能充分反应滇桂艾纳香药材中的化学成分，信息量丰富，方 法重现性良好，对控制药材质量和鉴别药材优劣提供了更有力的理论依据。相对于现有技 术，本发明具有以下突出优势：
[0018] (1)将不同产地和不同采集时间的壮药滇桂艾纳香药材，在同一指纹图谱条件下 分别建立指纹图谱，然后将其进行融合，达到信息互补，增加指纹图谱的信息量，从而提高 其指纹鉴定能力，以实现指纹图谱的全面和整体评价。
[0019] (2)供试品制备方便，分析时间短，色谱条件容易实现。
[0020](3)方法简便、稳定，精密度高、重现性好。
[0021] (4)适于对壮药滇桂艾纳香药材真伪、产地和品质的鉴别和控制，弥补了现有质量 控制技术的不足，使滇桂艾纳香药材的质量控制更加完善和科学。
【专利附图】
【附图说明】
[0022] 图1是对照品HPLC图谱，图中：1原儿茶酸，2原儿茶醛。
[0023] 图2是壮药滇桂艾纳香药材的HPLC指纹图谱。
[0024]图3是各批壮药滇桂艾纳香药材的HPLC指纹图谱整合叠加图。
【具体实施方式】
[0025] 发明人将13批不同来源的滇桂艾纳香药材，在同一指纹图谱条件下分别建立指 纹图谱，然后将这些指纹图谱进行融合，确定其共用指纹特征图，增加指纹图谱的信息量， 从而提高其指纹鉴定能力，以实现指纹图谱的全面和整体评价。为了更一步阐述本发明的 研宄过程，以下通过实例来说明。
[0026] 实施例1
[0027] 1实验材料和仪器
[0028] 1. 1药材：产地及采收时间如表1。
[0029] 表1滇桂艾纳香药材的产地及采收时间
【权利要求】
1. 一种壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 制备对照品溶液：加甲醇配制成每lml分别含原儿茶酸、原儿茶醛25 y g的混合对 照品溶液； (2) 供试品溶液的制备：精密称取壮药滇桂艾纳香药材粗粉，加水浸泡后，煎煮3次，每 次1. 5h，滤过，合并滤液并浓缩至约40ml，用稀盐酸调pH后，用乙醚萃取，合并乙醚液蒸干 后用甲醇溶解残渣，滤过，即可； (3) 色谱条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为甲醇与冰 醋酸组成的梯度洗脱液，紫外检测：波长为200?300nm ; (4) 测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指 纹图谱。
2. 根据权利要求1所述的壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于步 骤（2)按以下操作进行：精密称取滇桂艾纳香药材粗粉约2?8g，精密稳定，加水煎煮3次， 每次加水200ml煎煮1. 5h，其中第一次加水200ml，先浸泡10?40min后，煎煮；滤过，合并 3次煎煮的滤液并浓缩至约40ml，放冷，用稀盐酸调pH = 2-3,用乙醚萃取4次，合并乙醚 液，蒸干，残渣加甲醇适量溶解，并转移至l〇ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即可。
3. 根据权利要求2所述的壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于步 骤（2)按以下操作进行：精密称取滇桂艾纳香药材粗粉约5g，精密稳定，加水煎煮3次，每 次加水200ml煎煮1. 5h，其中第一次加水200ml，先浸泡30min后，煎煮；滤过，合并3次煎 煮的滤液并浓缩至约40ml，放冷，用稀盐酸调pH = 2-3,用乙醚萃取4次，每次20ml、15ml、 15ml、15ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇适量溶解，并转移至10ml的量瓶中，加甲醇至刻 度，摇匀，用0. 45 y m微孔滤膜滤过，取续液即可。
4. 根据权利要求1所述的壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于 步骤（3)的色谱条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为1% 的冰醋酸（色谱用）与甲醇组成的梯度洗脱液，柱温25°C，紫外检测：波长为256nm，流速为 1. Oml/min，分析时间为 85min。
5. 根据权利要求4所述的壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在 于：所述梯度洗脱的程序设为时间梯度Omin -4min - lOmin - 20min - 35min -40min -85m in;对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相Bl%冰醋酸组成，流动相A的 体积百分数梯度10%-10%-18% - 23% - 25% - 40% - 40%，流动相B的体积百分数 梯度 90%- 90%- 82%- 77%- 75%- 60%- 60%。
6. 根据权利要求1所述的壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于步 骤（4)按以下操作进行：精密吸取供试品溶液10?20 y 1注入高效液相色谱仪，照高效液 相色谱法测定，得到指纹图谱。
7. 根据权利要求1所述的壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于： 所述指纹图谱共有色谱峰有13个，其保留时间分别为5. 919min、14. 515min、17. 867min、 21. 74min、24. 579min、25. 785min、29. 338min、31. 880min、37. 903min、49. 410min、 5L 148min、53. 373min、60. 022min〇
【文档编号】G01N30/88GK104458993SQ201410767029
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月11日 优先权日:2014年12月11日
【发明者】蒋冰清, 罗盛东, 陈良 申请人:广西万寿堂药业有限公司