小儿感冒宁糖浆水提液hplc标准指纹图谱的建立方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及小儿感冒宁糖浆水提液指纹图谱的建立方法，具体地说，涉及小儿感 冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法、标准指纹图谱及其应用。
【背景技术】
[0002] 小儿感冒宁糖浆是由吉林益民堂制药有限公司生产的原中药保护品种，主要由薄 荷、荆芥穗、苦杏仁、牛蒡子、黄芩、桔梗、前胡、白芷、炒栀子、焦山楂、六神曲（焦）、焦麦芽、 芦根、金银花、连翘原料药组成，根据临床前药理及毒理研宄，具有疏散风热、清热止咳的 功效，主要用于治疗小儿外感风热所致的感冒，症见发热、汗出不爽、鼻塞流涕、咳嗽咽痛。
[0003] 感冒是由生活起居不慎或气候突变，或体质素虚，卫外不足，外邪冒犯人体而发生 的肺系疾病。本病的发生，常因气温骤变之时，寒热失常，感受外邪，外邪从皮毛、口鼻而入， 侵袭肺卫，表卫不和所致。因小儿的生理和病理特点，可表现为，热证多，感邪之后，易从热 化，临床发热较重；易挟痰，小儿肺脏尤娇，外邪犯肺，肺使宣降，而出现咳嗽痰多；易挟滞， 小儿脾常不足，感受外邪之后，常导致脾胃失调，不能运化水谷，而出现不思饮食，脘腹胀 满；易挟惊，小儿心肝有余，感受外邪，易化热化火，动风扰心，而出现烦躁哭闹。
[0004] 本方为风热感冒所设。风热侵于肺卫，则见恶寒发热；风热犯肺，肺使宣降，则鼻塞 流涕、咳嗽；风热上扰于喉，则咽喉肿痛。小儿感冒宁糖浆，为古代治疗感冒（风热型）之名 方，"银翘散"化裁而来。方中金银花、连翘气味芳香，疏散风热，清热解毒。金银花甘寒，芳 香疏散，善于散肺经热邪，透热达表；连翘苦寒，长于清心火，散上焦风热，二者治风热感冒， 常相须为用，故重用为君药。薄荷、牛蒡子疏散风热，清头明目利咽。薄荷辛散之性较强，是 治疗风热感冒药中最能宣散表邪之药；牛蒡子升散之中具有清降之性，长于宣肺祛痰，利咽 消肿，为治疗咽喉肿痛常用药。荆芥穗解表散邪。白芷发散表邪，宣通鼻窍，治感冒头痛鼻 塞不通，浊涕不止，为治"阳明头痛、鼻渊头痛之要药"。上四药相合，即可助君药疏散风热， 又可治咽痛，鼻塞流涕。感冒易挟痰，故用黄芩、桔梗、前胡、芦根清肺化痰，止咳。黄芩注入 肺经，善清泻肺火，而化痰止咳；桔梗开宣肺气，祛痰止咳，并可利咽消肿，古有"诸药舟楫， 载药上浮"为肺经引经药。上七药合用即可助君药疏散风热，又可止咳化痰，利咽消肿，共为 臣药。感冒易挟滞，故复用焦山楂、六神曲、焦麦芽消食化积，开胃健脾，即可治疗小儿不思 饮食，又可增强食欲，以利体力恢复，提高正气，驱邪外出。栀子泻火除烦，以防小儿感冒挟 惊，本品能淸泻三焦火，泻心火而除烦，为治热病心烦，躁扰不宁之要药。上四味药物相合， 共为佐药。诸药合用，共奏疏散风热，清热止咳之功效。
[0005] 目前，小儿感冒宁糖浆处方为薄荷80g、荆芥穗67g、苦杏仁80g、牛蒡子80g、黄芩 80g、桔梗67g、前胡80g、白芷27g、炒栀子40g、焦山楂27g、六神曲（焦）27g、焦麦芽27g、芦 根120g、金银花120g、连翘80g ;制法为取以上十五味，薄荷、荆芥穗提取挥发油，苦杏仁压 榨去油，加五倍水，37°C浸渍3小时，浸渍液水蒸气蒸馏，用90%乙醇液20ml收集蒸馏液至 60ml，过滤，密封储存；其余牛蒡子等十二味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，煎 液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液浓缩至适量，加入蔗糖450g及羟苯乙酯0. 25g，苯 甲酸钠 3g，煮沸使溶解，加入杏仁水混匀，静置，取上清液，加入挥发油及柠檬香精、香蕉香 精适量，加水至1000 ml，搅匀，滤过，分装，即得。
[0006] 其中牛蒡子、黄芩、桔梗、前胡、白芷、炒栀子、焦山楂、六神曲（焦）、焦麦芽、芦根、 金银花、连翘十二味的水提液的制法为：加水（5-6倍量）煎煮二次，第一次2小时，第二次 1小时，煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液浓缩至适量。现有方法采用水提、静置 沉淀的方法处理，既浪费人力、物力，也浪费能源。因此，寻找新的小儿感冒宁糖浆水提液的 沉淀方法及其质量检查方法成为亟待解决的问题。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法、标 准指纹图谱及其应用，目的是解决目前小儿感冒宁糖浆水提液质量评价和成分分析中不能 较全面综合反映和控制水提液整体质量的问题。
[0008] 为了实现本发明目的，本发明提供小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的 建立方法，包括HPLC测定；优选地，所述HPLC测定的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A、以0. 3 %磷酸为流动相B进行梯度洗脱；
[0009] 优选地，取多批次待测样品溶液分别按照所述HPLC色谱条件进行测定，对各供试 品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱；优选地，紫外检 测波长为320nm ;和/或流速为1.0 mL/min ;和/或柱温为30°C ;和/或进样量为10 μ L ;
[0010] 一般地，可选用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，例如Agilent ZORBAX SB-C18 (5 μ m，4. 6 X 250mm);
[0011] 优选地，所述流动相按梯度洗脱梯度变化为：
【主权项】
1. 小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法，包括HPLC测定，其特征在 于，所述HPLC测定的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流 动相A、以0. 3%磷酸为流动相B进行梯度洗脱。
2. 根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，取多批次待测样品溶液分别按照所 述HPLC色谱条件进行测定，对各供试品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液 HPLC标准指纹图谱。
3. 根据权利要求1或2所述的建立方法，其特征在于，所述梯度洗脱为：
4. 根据权利要求1-3任一项所述的建立方法，其特征在于，紫外检测波长为320nm ;和 /或流速为1.0 mL/min ;和/或柱温为30°C ;和/或进样量为10 μ L。
5. 根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，还包括供试品溶液的制备；所述 供试品溶液的制备为：由以下重量份的原料药经水提获得，牛蒡子80、黄芩80、桔梗67、前 胡80、白芷27、炒栀子40、焦山楂27、六神曲（焦）27、焦麦芽27、芦根120、金银花120、连翘 80 ;优选取以上十二味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，煎液滤过，滤液合并， 静置48小时，取上清液即得；进一步优选将所得上清液再于4000转/分钟离心10分钟，取 离心后的上清液，即得；更优选第一次煎煮，水的加入量为药材总重量的6倍，煎煮2小时， 第二次煎煮，水的加入量为药材总重量的5倍，煎煮1小时。
6. 根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)供试品溶液的制备：取以下重量份的原料，牛蒡子80、黄芩80、桔梗67、前胡80、白 芷27、炒栀子40、焦山楂27、六神曲（焦）27、焦麦芽27、芦根120、金银花120、连翘80,加 水煎煮二次，第一次2小时（加水量药材总重量的6倍），第二次1小时（加水量药材总重 量的5倍），煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液，再于4000转/分钟离心10分钟， 取离心后的上清液，即得； ⑵HPLC测定：将多批次供试品溶液各10 μ L注入到高效液相色谱仪中进行测定，得到 指纹图谱； 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相Α、以0. 3%磷 酸为流动相B进行梯度洗脱；紫外检测波长为320nm ;流速为1.0 mL/min ;柱温为30°C;进样 量10 μ L ;流动相按梯度洗脱梯度变化为：
(3)标准指纹图谱的建立：采用软件（中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件）对各 供试品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱。
7. 权利要求1-6任一项所述的方法建立的小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱。
8. 权利要求1-6任一项所述方法建立的HPLC标准指纹图谱在检测小儿感冒宁糖浆水 提液质量的应用。
9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：按上述方法建立小儿感冒 宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱；取小儿感冒宁糖浆水提液待检样品，优选取采用以上述 方法于4000转/分钟离心10分钟的上清液，按上述HPLC测定同法操作，得到小儿感冒宁 糖浆水提液待检样品指纹图谱，采用软件（中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件）对所 得小儿感冒宁糖浆水提液待检样品指纹图谱和上述HPLC标准指纹图谱进行分析。
10. 根据权利要求9所述的应用，包括以下步骤： (1)供试品溶液的制备：取以下重量份的原料，牛蒡子80、黄芩80、桔梗67、前胡80、白 芷27、炒栀子40、焦山楂27、六神曲（焦）27、焦麦芽27、芦根120、金银花120、连翘80,加 水煎煮二次，第一次2小时（加水量药材总重量的6倍），第二次1小时（加水量药材总重 量的5倍），煎液滤过，滤液合并，静置48小时，取上清液，再于4000转/分钟离心10分钟， 取离心后的上清液，即得； ⑵HPLC测定：将多批次供试品溶液各10 μ L注入到高效液相色谱仪中进行测定，得到 指纹图谱； 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相Α、以0. 3%磷 酸为流动相B进行梯度洗脱；紫外检测波长为320nm ;流速为1.0 mL/min ;柱温为30°C;进样 量10 μ L ;流动相按梯度洗脱梯度变化为：
(3)标准指纹图谱的建立：采用软件（中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件）对各 供试品的指纹图谱进行分析，生成小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱； (4)样品检测：取小儿感冒宁糖浆水提液待检样品，优选取采用以上述方法于4000转 /分钟离心10分钟的上清液，按上述HPLC测定同法操作，得到小儿感冒宁糖浆水提液待检 样品指纹图谱，采用软件（中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件）对所得小儿感冒宁糖 浆水提液待检样品指纹图谱和上述HPLC标准指纹图谱进行分析； 优选地，所述的应用，还包括对照品溶液的制备：即分别称取黄芩苷和绿原酸置同一量 瓶中，加入甲醇制成分别含0. 03-0. 05mg/mL的溶液，更优选加入甲醇制成分别含0. 04mg/ mL的溶液；将对照品溶液按上述HPLC测定同法操作，得到对照品溶液HPLC指纹图谱。
【专利摘要】本发明提供小儿感冒宁糖浆水提液HPLC标准指纹图谱的建立方法、标准指纹图谱及其应用，包括对照品和供试品溶液的制备、HPLC测定、标准指纹图谱的建立以及样品检测等步骤。该法能有效表征小儿感冒宁糖浆水提液的工艺和质量，有利于监控产品的质量；具有方法简便、稳定性好、精密度高、重现性好等优点。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104833751
【申请号】CN201510207830
【发明人】潘雅辉, 赵景龙, 罗敏, 杜丽爽, 王春荣, 丁爱英, 徐阳, 李艳茹
【申请人】吉林益民堂制药有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年4月28日