本发明属于海洋生物医药技术领域，具体涉及一种肉芝软珊瑚提取物的生物活性测定方法。
背景技术：
肉芝软珊瑚(Sarcophyton sp.)，分类学上属腔肠动物门(Cnidaria)，珊瑚虫纲(Anthozoa)，软珊瑚目动物(Alcyonacea)，软珊瑚科(Alcyoniidae)，肉芝软珊瑚属(Sarcophyton)动物，是一种在热带与亚热带比较常见的海洋生物。肉芝软珊瑚颜色多种，包括褐色、绿色或棕色，带有白色或金色的水螅体，随着生长会长出褶皱。珊瑚体呈平铺的盆形，群体肥厚，中央凹入，表面常具有略呈辐射状的脊，脊宽约1至3公分；群体的柱部低矮、粗大。
全球有肉芝软珊瑚约41种，到目前为止，国内外研究者已对该属的17个种开展了化学成分研究。该属的化学成分主要有萜类(包括倍半萜、二萜、三萜、四萜，尤其以西松烷二萜居多)、甾醇(尤其以多羟基甾醇居多)、糖苷类、前列腺素、神经酰胺、吡啶衍生物及脂肪酸等化合物。这其中不乏许多结构新颖、生理活性显著的化学成分，因此我们选择南海肉芝软珊瑚(Sarcophyton sp.)进行化学成分及其生物活性的研究。
技术实现要素：
本发明旨在为肉芝软珊瑚的提取物提供一种方便可靠的生物活性测定方法。
一种肉芝软珊瑚提取物的生物活性MTT测定方法，包括如下步骤：
(1)取对数期肿瘤细胞，调整细胞悬液的浓度为200000个/mL，每孔200μL，加入96孔细胞培养板中；
(2)在培养箱中培养4h(37ºC，5%CO2)；
(3)待测样品分别设5个浓度梯度(每个浓度3个平行样)，同时设阴性、阳性对照，每孔加空白液或样品液2μL，培养72h；
(4)每孔加入MTT液10μL，继续培养4h；
(5)终止培养，离心8min(37ºC、2000r/min)，吸去孔内培养液；
(6)每孔加入DMSO各100μL，于微量振荡器中振荡15min，直至结晶充分溶解；
(7)酶标仪测定每孔在570nm处的吸光值(即OD值)。取三孔的平均OD值，按公式IR%=(OD空白对照-OD样品)/OD空白对照×100%计算样品对细胞增殖的抑制率(IR%)。
测定原理为：MTT为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，是一种黄颜色的染料，其检测原理为在活细胞线粒体中，琥珀酸脱氢酶可以使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。Formazan 与活细胞数成正比，二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在 570nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。以此原理来测定化合物的抗肿瘤活性。
本发明的测定方法相对于现有技术简单快速、而且检测结果可靠，适于推广应用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
选择K562和HL-60肿瘤细胞株对从肉芝软珊瑚分离得到的多羟基甾醇SAR 1 - SAR 11进行体外抗肿瘤活性筛选，包括如下步骤：
(1)取对数期肿瘤细胞，调整细胞悬液的浓度为200000个/mL，每孔200μL，加入96孔细胞培养板中；
(2)在培养箱中培养4h(37ºC，5%CO2)；
(3)待测样品分别设5个浓度梯度(每个浓度3个平行样)，同时设阴性、阳性对照，每孔加空白液或样品液2μL，培养72h；
(4)每孔加入MTT液10μL，继续培养4h；
(5)终止培养，离心8min(37ºC、2000r/min)，吸去孔内培养液；
(6)每孔加入DMSO各100μL，于微量振荡器中振荡15min，直至结晶充分溶解；
(7)酶标仪测定每孔在570nm处的吸光值(即OD值)。取三孔的平均OD值，按公式IR%=(OD空白对照-OD样品)/OD空白对照×100%计算样品对细胞增殖的抑制率(IR%)。
测定结果见表1-2，分析表中数据可以看出在浓度为50μM浓度水平，所有进行活性的测定的化合物均对肿瘤细胞株K562有抑制作用，大部分化合物对K562表现出强的抑制活性，抑制率在90%以上。化合物 SAR 1、3-7、9对HL-60肿瘤细胞表现出中等强度的抑制活性，抑制率在40%-65%间，化合物 SAR 2、8、10、11 对HL-60细胞株呈现出弱的抑制活性。
表1 多羟基甾醇化合物 SAR 1-SAR 11 对K562肿瘤细胞株的抑制率(%)
表2 多羟基甾醇化合物 SAR 1-SAR 11 对HL-60肿瘤细胞株的抑制率(%)