利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法与流程

技术特征：

1.一种利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，获取需要检测的水域中的鱼，并采用所述鱼的GPX作为敏感生物标记物。

2.根据权利要求1所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述鱼的GPX活性与水体中菲的浓度呈负相关。

3.根据权利要求1所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述鱼的GPX活性与水体中多氯联苯的浓度呈负相关。

4.根据权利要求1-3任一项所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，建立鱼的GPX活性与污染物浓度关系的标准曲线，然后将待检测水域中的同种同大小的鱼的GPX活性与所述标准曲线比对，得到待检测水域中水体污染物浓度。

5.根据权利要求4所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述标准曲线为鱼的GPX活性与菲浓度关系的曲线，或者鱼的GPX活性与多氯联苯浓度关系的曲线。

6.根据权利要求5所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述鱼的GPX活性测定包括如下步骤：

步骤一、待测样本处理：制备全鱼匀浆，然后离心分层，取上层清液为待测样本；

步骤二、待测样本蛋白浓度的测定：分别将等量的双蒸水、蛋白标准品和待测样本加入1、2、3号管中，并分别向各管加入等量的考马斯亮蓝显色剂，分别混匀，静置，预热，用分光光度计并用双蒸水调零后，于1cm光径，在波长595nm处，测定1、2、3号管中物质的光密度，分别记为1号OD值，2号OD值，3号OD值，然后代入如下公式计算得待测样本蛋白浓度:

步骤三、酶促反应：使用谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒进行测定，分别在对照管和测定管中加入0.2mL浓度为1mmol/L的谷胱甘肽，只在测定管中加入0.2mL待测样本，然后将所述对照管和测定管置于37℃水浴预温5分钟后，分别各加入试剂一应用液0.1mL，于37℃反应2.5-5分钟，再分别加入试剂二应用液2mL，只在对照管中加入待测样本0.2mL，然后分别混匀，用用冷冻离心机，1000g，4℃，离心10分钟，分别取上清液稀释n倍作显示反应；

步骤四、显色反应：在空白管中加入1mL浓度为1mmol/L的GSH,在标准管中加入1mL浓度为20umol/L的GSH标准品应用液，在对照管中是其稀释n倍的上清液1mL，在测定管中是其稀释n倍的上清液1mL，然后分别在空白管、标准管、对照管和测定管中各加入试剂三应用液1mL，试剂四应用液0.25mL和试剂五应用液0.05mL，然后分别混匀，室温静置5-10分钟，于412nm处，用1cm光环比色杯和双蒸水调零后，测各管OD值，分别记为空白管OD值，标准管OD值，对照管OD值和测定管OD值，然后代入如下公式计算得鱼的谷胱甘肽过氧化物酶活性：

7.根据权利要求6所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述步骤一中全鱼匀浆为全鱼与浓度0.65％的鱼用生理盐水按质量比为1:9配置，且所述离心分层用冷冻离心机，11028g，4℃，离心10min。

8.根据权利要求6所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述步骤二中等量的双蒸水、蛋白标准品和待测样本均为0.05ml，蛋白标准品的浓度为0.563g/L，分别加入考马斯亮蓝显色剂的量均为3ml，静置10min；所述步骤三中反应时间为2.5分钟，稀释倍数n＝5；所述步骤四中室温静置10分钟。

9.根据权利要求5-8任一项所述的利用鱼的GPX活性检测水体污染程度的方法，其特征在于，所述鱼为海水青鳉或淡水青鳉。