人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC‑MS/MS检测方法与流程

技术特征：

1.人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)样品的制备

取待测尿液样品于试管或离心管中，加样1/10倍体积的水，涡旋混匀，加与水等量的浓盐酸和水3倍质量的的氯化钠，涡旋混匀后，加入样品量5倍的乙酸乙酯萃取，涡旋混匀1min，15000rpm离心10min，取上清，氮气吹干，再加100μL的水复溶，取上清5μL进样分析；

2)UPLC-MS/MS分析：将处理后的样品用三重四级杆液质联用仪，在以下条件下进行分析

液相条件：

流动相：A:0.1％甲酸水溶液 B:甲醇

流速：0.3ml/min 进样量：5μL

柱温：45℃ 检测波长：254nm

色谱柱：Waters ACQUITYBEH C18,1.7μm,2.1*50mm Column

梯度洗脱程序

Time/minA％B％095548020610906.19558955

质谱条件：

待测成分和内标的质谱检测参数

其他质谱参数：

毛细管电压(kV):3.2kV； 源温度(℃):120；

脱溶剂气温度(℃):350； 脱溶剂气流量(L/Hr):800；

气帘气流量(L/Hr):50； 驻留时间(s)：0.1s

3)根据样品的峰面积和标准曲线的回归方程中，计算尿液中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸的浓度。

2.根据权利要求1所述的人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：步骤(1)样品的处理方法为：

取100μL尿液，加10μL水，涡旋混匀后，加10μL浓盐酸，30mg氯化钠，涡旋混匀后，加500μL乙酸乙酯萃取，涡旋混匀1min后，15000rpm离心10min，取上清400μL，氮气吹干，再加100μL的水复溶，取上清5μL进行样分析。

3.根据权利要求1所述的人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：步骤(3)标准曲线的制作过程如下：

a.标准品处理：

取100μL尿液，加10μL标准溶液，涡旋混匀后，加10μL浓盐酸，30mg氯化钠，涡旋混匀后，加500μL乙酸乙酯萃取，涡旋混匀1min后，15000rpm离心10min，取上清400μL，氮气吹干，再加100μL的水复溶，取上清5μL进行分析，记录色谱图；

马尿酸的定量系列浓度为：2，5，20，50，200，500，1000μg/ml，

甲基马尿酸的定量系列浓度为：2，5，20，50，200，500，1000ng/ml，

扁桃酸的定量系列浓度为：20，50，200，500，2000，5000，10000ng/ml。

b.标准曲线的制备

以待测物浓度为横坐标，待测物的峰面积比值为纵坐标，用加权(W＝1/x2)最小二乘法进行回归运算，求得的直线回归方程，即为定量标准曲线。

4.根据权利要求1所述的人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：该检测方法中还包括质控品的检测和基质效应的检测。

5.根据权利要求4所述的人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：质控样品的制备

取100μL尿液，加10μL标准溶液，涡旋混匀后，加10μL浓盐酸，30μL氯化钠，涡旋混匀后，加500μL乙酸乙酯萃取，涡旋混匀1min后，15000rpm离心10min，取上清400μL，氮气吹干，再加100μL的水复溶，取上清5μL进行样分析。

马尿酸的质控样品浓度为：5，50，800μg/ml，

甲基马尿酸的质控样品浓度为：5，50，800ng/ml，

扁桃酸的质控样品浓度为：50，500，8000ng/ml。

6.根据权利要求4所述的人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：所述基质效应的检测中基质效应样品的制备：取90μL水，加10μL标准溶液，涡旋混匀后，取上清5μL进行样分析:马尿酸的基质效应浓度点为：5，50，800μg/ml，甲基马尿酸的基质效应浓度点为：5，50，800ng/ml，扁桃酸的基质效应浓度点为：50，500，8000ng/ml。

7.根据权利要求1所述的人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：所述甲基马尿酸包括2-甲基马尿酸和3-甲基马尿酸。

8.根据权利要求1所述的人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：该方法的检出限：扁桃酸0.005ug/ml；马尿酸0.5ug/ml；2-甲基马尿酸0.0005ug/ml；3-甲基马尿酸0.0005ug/ml。

9.根据权利要求1所述的人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：该方法的定量限：扁桃酸0.02ug/ml；马尿酸2ug/ml；2-甲基马尿酸0.002ug/ml；3-甲基马尿酸0.002ug/ml。

10.根据权利要求1所述的人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于：该方法的检测范围：扁桃酸0.02-10ug/ml；马尿酸2-1000ug/ml；2-甲基马尿酸0.002-1ug/ml；3-甲基马尿酸0.002-1ug/ml。