一种用于检测人血清中超氧化物歧化酶含量的方法与流程

本发明属于疾病的诊断或检测技术领域，具体涉及一种胶乳免疫比浊法用来检测人血清中超氧化物歧化酶的含量。

背景技术：

超氧化物歧化酶是一种非特异辅助诊断指标，但对机体自由基代谢紊乱、自由基清除干预对策、以及对于同一病患者病程转归(自由基损伤的加剧或降低、自由基清除剂药物或手术治疗效果)的判断，实时动态监测具有重要参考价值。它常用于对缺血、出血性心、脑等重要脏器病伤(或手术治疗后)引发的继发性(自由基)过氧化损伤及其自由基清除药物治疗效果的监测，以指导临床制定相应的自由基清除干预对策及最佳治疗时间窗的确立，它对自由基继发损伤病情的诊断、自由基清除治疗疗效跟踪和预后判断与评估等具有重要参考价值。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种用于检测超氧化物歧化酶含量的方法。采用胶乳免疫比浊法检测血清中超氧化物歧化酶的含量，线性范围宽好，灵敏度高，特异性好、操作简单、方便快速等优点。它能够作为一项新的临床指标，超氧化物歧化酶检测对阐明这些疾病的发病机制和判定治疗效果有一定价值。本发明采用以下步骤：

一种超氧化物歧化酶检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：

试剂R1中含有

试剂R2中含有

本发明中抗人超氧化物歧化酶抗体的胶乳微球的制备步骤：

1、每ml反应混合物加入下列各物：

a.去离子水是最后容积为1.0mL；

b.0.1mL的5x的贮备缓冲溶液，其pH值为7.5(一般可用0.5M MES缓冲溶液)；胶乳微球最终浓度为5％(W/V)；

c.按照二者呈现的0.1∶0.8～1∶2的比例范围加入20mg/ml的NHS在去离子水中的溶液和15mg/mL的EDAC在去离子水中的溶液中；

2、在室温将此混合物反应30min，不断搅拌；

3、用上述的MES缓冲液，除去未反应的NHS和EDAC；

4、重新将胶乳微球在去离子水中悬浮，使其浓度为5％(w/v)；

5、将结合的蛋白质溶于MES缓冲溶液中，浓度为1mg/mL；

6、将上述物质轻轻搅拌至少2h；

7、按1mL反应混合液加入5μL乙醇胺混合，轻轻搅拌反应10分钟；

8、除去未结合的蛋白质和乙醇胺，贮于适宜的贮存缓冲溶液中。

本发明的优点：

1.采用的不同粒径的胶乳微球，提升了检测的线性范围和灵敏度。

2.采用的偶联剂NHS和EDAC的加入比例的多少，提升了抗体与微球的偶联效率。

3.试剂的线性范围宽，准确度高，使用方便，满足临床需要。

附图说明：

图1：实施例1与对比方法相关性图

图2：实施例2与对比方法相关性图

图3：实施例3与对比方法相关性图

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明，但是本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。

实施例1

按照下面讲述的检测步骤，在600nm的波长下，试剂R1∶试剂R2＝5∶1，偶联剂NHS和EDAC的加入比例0.1∶0.8，检测一批数量为40例血清样本。

本实施例描述的超氧化物歧化酶检测方法，使用双试剂全自动生化分析仪，例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪进行测定。将R1和R2放置所设置好的位置上，在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本，操作如下：

表1操作程序

结果计算：以测定管ΔA，根据校准曲线可求得超氧化物歧化酶含量。

实施例2

按照下面讲述的检测步骤，在600nm的波长下，试剂R1∶试剂R2＝4∶1，偶联剂NHS和EDAC的加入比例0.5∶1.5，检测同实施例1相同的40例血清样本。

本实施例描述的超氧化物歧化酶检测方法，使用双试剂全自动生化分析仪，例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪进行测定。将R1和R2放置所设置好的位置上，在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本，操作如下：

表2操作程序

结果计算：以测定管ΔA，根据校准曲线可求得超氧化物歧化酶含量。

实施例3

按照下面讲述的检测步骤，按照上述的检测步骤，在600nm的波长下，试剂R1∶试剂R2＝3∶1，偶联剂NHS和EDAC的加入比例1∶2，检测同实施例1和实施例2相同的40例血清例样本。

本实施例描述的超氧化物歧化酶检测方法，使用双试剂全自动生化分析仪，例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪进行测定。将R1和R2放置所设置好的位置上，在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本，操作如下：

表3操作程序

结果计算：以测定管ΔA，根据校准曲线可求得超氧化物歧化酶含量。

实施例4

将上述实施例1～3的相同血清样本进行酶速率法检测(对比方法)，实施例1～3的结果与对比方法比较。

表4所有实施例检测结果汇总(ng/mL)

综合上述结果实施例1～3中的结果采用BS-420全自动生化分析仪，对40个血清样本进行测定，并对测定值进行相关分析并与对比方法检测结果比较，其中实施例1的相关系数：r²＝0.997，线性方程为：y＝0.983x+16.67。其中实施例2的相关系数：r²＝0.969，线性方程为：y＝1.001x+16.07。其中实施例3的相关系数：r²＝0.969，线性方程为：y＝0.968x+10.99结果表明实施例1中的试剂的检测与对比方法的相关性较好。