一种检测伏马毒素B1的电化学适配体传感器的制备方法与流程

文档序号:12061375阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测伏马毒素B1的电化学适配体传感器的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤1、丝网印刷碳电极SPCE的预处理;

步骤2、活化的FB1核酸适配体溶液的制备:用50mM Tris-HCl缓冲溶液溶解FB1核酸适配体,使FB1核酸适配体的浓度为100μM,得到溶液A;取20μL溶液A加入到5μL含有三(2-羧乙基)膦盐酸盐的50mM Tris-HCl缓冲溶液B中,得到混合液C;然后,将混合液C放置在往复式震荡仪上室温条件下反应1h;最后,离心移去多余的三(2-羧乙基)膦盐酸盐,重新分散在2mL 50mM Tris-HCl缓冲溶液D中,得到活化的FB1核酸适配体溶液,备用;

步骤3、金纳米粒子修饰的丝网印刷碳电极的制备:将步骤1中预处理过的SPCE浸入5mL 2mM的HAuCl4溶液进行金纳米粒子的表面电沉积,得到金纳米粒子修饰的丝网印刷碳电极,记为AuNPs-SPCE,二次蒸馏水淋洗,氮气吹干,备用;

步骤4、FB1核酸适配体修饰的AuNPs-SPCE电极的制备:首先取10μL的步骤2中活化的FB1核酸适配体溶液滴涂在步骤1中预处理的工作电极表面,4℃条件下反应6h,得到FB1核酸适配体修饰的AuNPs-SPCE电极,记为aptamer-AuNPs-SPCE,用50mM Tris-HCl缓冲溶液淋洗,氮气吹干;

步骤5、电极表面多余活性位点的封闭:将步骤4中aptamer-AuNPs-SPCE表面滴涂10μL1mM 6-巯基己醇的溶液,室温条件下反应1h,得到6-巯基己醇封闭的电极,之后用50mM Tris-HCl缓冲液淋洗,氮气吹干,得到可用于伏马毒素B1检测的免标记电化学适配体传感器,4℃保存备用。

2.根据权利要求1所述的一种检测伏马毒素B1的电化学适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤1中,SPCE预处理方法为:在5mL含有0.5M H2SO4和0.1M KCl的溶液中对SPCE进行循环伏安扫描,扫描范围设定为-0.2~1.5V,扫描速率为100mV s-1,直到扫描得到重叠的循环伏安曲线,用二次水淋洗,氮气吹干,备用。

3.根据权利要求1所述的一种检测伏马毒素B1的电化学适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤2中,所使用的Tris-HCl缓冲溶液B中含有的三(2-羧乙基)膦盐酸盐的浓度为100mM;所使用的Tris-HCl缓冲溶液D中含有0.1M NaCl,0.2M KCl,5.0mM MgCl2和1.0mM EDTA。

4.根据权利要求1所述的一种检测伏马毒素B1的电化学适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤3中,所述电沉积的电压为0.5V,沉积时间为1200s。

5.根据权利要求1所述的一种检测伏马毒素B1的电化学适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤2、4、5中,所使用的Tris-HCl缓冲溶液pH均为7.4。

6.根据权利要求1所述的一种检测伏马毒素B1的电化学适配体传感器的制备方法,其特征在于,所用的FB1核酸适配体序列为:5’-SH-(CH2)6-ATA CCA GCT TAT TCA ATT AAT CGC ATT ACC TTA TAC CAG CTT ATT CAA TTA CGT CTG CAC ATA CCA GCT TAT TCA ATT AGA TAG TAA GTG CAA TCT-3’。

7.根据权利要求1所述的一种检测伏马毒素B1的电化学适配体传感器的制备方法,其特征在于,所述电化学适配体传感器检测伏马毒素B1的步骤如下:

分别取10μL不同浓度的FB1标准溶液滴涂在所述检测伏马毒素B1的电化学适配体传感器的界面上,得到修饰电极;在37℃条件下孵化30min,之后将修饰电极电极用50mMpH=7.4的Tris-HCl缓冲液淋洗,氮气吹干;将修饰电极置于5mL阻抗液中,扫描电化学阻抗图谱,根据阻抗值与对应的FB1标准样浓度建立标准曲线。

8.根据权利要求7所述的一种检测伏马毒素B1的电化学适配体传感器的制备方法,其特征在于,所述FB1标准溶液浓度依次是0,0.005,0.01,0.05,0.25,1,2,5,10,50,100ng mL-1;所述阻抗液包括:a.0.1M磷酸盐缓冲溶液,pH=7.4;b.5mM[Fe(CN)6]3-/4-;c.0.1M KCl。

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