本发明涉及农业检测领域，特别是指一种不同烟区烤烟烟叶香气物的分析方法。
背景技术：
烟草香气是指由烟草直接散发或者燃烧时产生的令人愉快的气味，它也是评价烟叶及其制品品质的一项重要指标。然而，烟叶中所含致香物质的种类、含量和组成比例是决定烟叶香气风格的重要因素，也是评价卷烟产品品质特色的主要影响因子，分析烟叶中香气物质的主要种类及其含量对指导卷烟配方、加香加料有重要的实用价值。因此，国内外研究者主要从生态环境、栽培措施和发酵工艺等方面对有关影响烤烟香气物质形成的因子进行了大量的研究,研究结果表明，生态环境对烟叶香气物质的形成起着主导性作用。目前，对于烟叶中挥发性香气物质的研究主要采用水蒸气蒸馏-二氯甲烷溶剂萃取法，而利用同时蒸馏-石油醚萃取法提取烟叶中挥发性香气物质的研究较少。
技术实现要素：
本发明提出不同烟区烤烟烟叶香气物的分析方法，采用同时蒸馏-石油醚萃取法与气-质联用对不同烤烟主产区烟叶中挥发性香气物质的种类和含量进行比较分析，了解不同烟区烟叶的致香成分与生态条件的关系，为国内开发优质烤烟及弥补烟叶香气不足提供理论依据和方法。
本发明的技术方案是这样实现的：一种不同烟区烤烟烟叶香气物的分析方法，包括步骤：
(1)选取不同烟区同等级烟叶；
(2)采用同时蒸馏萃取法进行前处理；
(3)将步骤(2)中萃取所得香气浓缩物由GC-MS鉴定结果和NIST库检索定性；
(4)结果的对比与分析。
进一步，步骤(2)中，同时蒸馏萃取法为：称取粉碎后的烟叶于圆底烧瓶中，加入水，电热套加热；在另一个烧瓶中加入石油醚，水浴加热，同时蒸馏萃取2.5h后，保留石油醚萃取液，加入无水硫酸钠摇匀至溶液澄清，转移有机相至鸡心瓶，使用旋转蒸发仪在45℃水浴中将其浓缩，所得香气浓缩物由GC-MS鉴定结果和NIST库检索定性。
进一步，步骤(3)中，检测方法为，采用气质联用仪对烟叶样品进行定性分析。GC-MS条件：载气及流速：He,0.8mL/min；柱头压170kPa；进样口温度：250℃；传输线温度：220℃；离子源温度:177℃；升温程序：初温50℃，恒温1min后以3℃/min升至120℃，保持2min；再以5℃/min升至180℃，保持10min，再以10℃/min升至250℃，保持15min；分流比：1:15；进样量2.0：n；电离方式：EI；电离能：70eV；电子倍增器电压350V；质量扫描范围:35-350amu。采用NIST谱库检索定性。
本发明的所述不同烟区烤烟烟叶香气物的分析方法，采用同时蒸馏-石油醚萃取法与气-质联用对不同烤烟主产区烟叶中挥发性香气物质的种类和含量进行比较分析，深入的了解不同烟区烟叶的致香成分与生态条件的关系，对于获知不同烟区的烟叶致香成分，与风味的形成获得更深的认识，为进一步烟区烟叶品质的改善与环境的改良提出了指引。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
选用广东南雄、贵州遵义、云南沾益、河南南阳和津巴布韦2009年产同等级烟叶(C3F)
前处理方法：
前处理采用同时蒸馏萃取法。称取50.00g粉碎后的烟叶于2000mL圆底烧瓶中，加入1000mL水，电热套加热；在另一个250mL烧瓶中加入50mL石油醚，水浴加热，同时蒸馏萃取2.5h后,保留石油醚萃取液,加入10g左右无水硫酸钠摇匀至溶液澄清，转移有机相至鸡心瓶，使用旋转蒸发仪在45℃水浴中将其浓缩至3mL，所得香气浓缩物由GC-MS鉴定结果和NIST库检索定性。
检测方法：
采用德国Finnigan TRACE气质联用仪(德国Finnigan公司)对烟叶样品进行定性分析。GC-MS条件：色谱柱：HP-INNO WAX柱(30mNNO WAX性分析。转移有机)；载气及流速：He，0.8mL/min；柱头压170kPa；进样口温度：250℃；传输线温度：220℃；离子源温度:177℃；升温程序：初温50℃，恒温1min后以3℃/min升至120℃，保持2min；再以5℃/min升至180℃，保持10min，再以10℃/min升至250℃，保持15min；分流比：1:15；进样量2.0：n；电离方式：EI；电离能：70eV；电子倍增器电压350V；质量扫描范围:35-350amu。采用NIST谱库检索定性。
结果与分析：
1.质体色素降解产物比较分析
质体色素包括叶绿素和类胡萝卜素，是影响烟叶香味特色的重要因素之一，其降解产物对烤烟清新香气起着重要作用，叶绿素降解产物新植二烯本身具有清香气，在烟叶香气成分中所占比例最高。从表1可以看出，广东、云南烤烟中新植二烯含量较高，津巴布韦和河南烤烟中含量较低，这可能是由于新植二烯经复烤、醇化等后加工过程，降解生成了低分子香气物质。广东和津巴布韦烟叶中类胡萝卜素降解产物含量明显高于其他烟区烤烟，其中巨豆三烯酮(A、B、C、D)含量与其他烟区烟叶差异最显著，约为其他烟区烟叶含量的2倍。广东烟叶中β-大马酮、3-羟基-基酮二氢大马酮含量最高。津巴布韦烟叶中假紫罗兰酮、二氢猕猴桃内酯、香叶基丙酮、法尼基丙酮含量最高，而3-羟基-基大二氢大马酮、6-甲基-5-庚烯-2-酮含量为痕量。
表1不同产区烤烟中质体色素降解产物含量
注：表中“：表中表示痕量<tr means trace>
2.苯丙氨酸类降解产物比较分析
苯丙氨酸类降解产物是烟叶中香气较丰富的致香物质，如：具有天然玫瑰香味的苯甲醇；具有杏仁香、樱桃香和甜香的苯甲醛；具有皂花香和焦香的苯乙醛；具有甜味和水果味的苯乙醇。从表2可以看出，河南烤烟中苯丙氨酸类降解产物含量最高，与处于较低水平的云南和贵州烤烟烟叶中的含量存在显著差异。云南和贵州烟叶中苯丙氨酸类降解产物的峰面积分别约占河南烟叶的28.42％和17.63％。
表2不同产区烤烟中苯丙氨酸类降解产物含量
3.美拉德反应产物比较分析
美拉德反应能够产生大量的具有烤香、烘焙香和坚果香等香味特征的氮杂环类化合物，如：吡嗪类、吡啶类、呋喃类和吡咯类等。从表3可以看出，津巴布韦和广东烤烟烟叶中美拉德反应产物含量较高，贵州和云南烤烟含量最低。津巴布韦烟叶中2-乙酰基吡咯含量明显高于国内烟叶；广东烟叶中糠醛含量明显高于云南烟叶含量。
表3不同产区烤烟中美拉德反应产物含量
4.西柏烷类降解产物比较分析
西柏烷类最初主要以无味的表面蜡质的形式在鲜烟叶中存在，只有通过调制、发酵才能降解产生香味成分，它既是烟叶腺毛分泌物，也是浓郁香气的典型代表。烟叶腺毛数量越多，则烟叶的香气物质含量越丰富。西柏烷类主要降解产物茄酮具有很好的香气，目前被作为单体香用于卷烟香料，它的氧杂双环化合物具有特别的香味，能够明显改善烟草的香吃味。同时,它的转化产物也是很重要的烟草香味物质，如：茄醇、茄尼呋喃、降茄二酮。在保留时间为27.83min的条件下，广东、贵州烟叶中茄酮含量较低(分别为2.51％和1.96％)，峰面积分别约为含量最高的河南烟叶(9.73％)的25.80％和20.14％。津巴布韦、云南烟叶茄酮含量居中，分别为4.7％和5.75％。
五大烤烟区烟叶总挥发性香气物质比较分析
广东烤烟烟叶中类胡萝卜素、叶绿素降解产物含量最高。河南烟叶中苯丙氨酸类、西柏烷类降解产物含量最高。国内烟叶中的中性挥发性香气物质含量高于津巴布韦烟叶，这是由于国内烟叶中新植二烯含量较高的缘故。不计新植二烯含量时，津巴布韦烤烟中的香气物质总含量最高，贵州最低，约为津巴布韦烤烟含量的49.99％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。