（一）技术领域
本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种快速测定牛奶中黄曲霉毒素m1含量的方法。
（二）
背景技术：
黄曲霉毒素m1简称afm1，目前afm1的检测方法主要有色谱法(包括薄层色谱法和高效液相色谱法)、免疫化学法(包括免疫亲和柱法、酶联免疫法、放射免疫法和胶体金法)、电化学方法、化学发光及各种方法之间的联用。薄层层析法和液相色谱法存在检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多，且难以定性等缺点，酶联免疫法虽然操作简便，但容易产生假阳性现象，仅适用于批量筛选超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中黄曲霉毒素b1和m1的方法研究。超高效液相质谱联用仪灵敏度和选择性高，适用于afm1检测，是目前实验室常用方法，但是前期需用免疫亲和柱处理，程序复杂且成本高。
（三）
技术实现要素：
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种快速测定牛奶中黄曲霉毒素m1含量的方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种快速测定牛奶中黄曲霉毒素m1含量的方法，其特征在于：称取afm1标准品溶于有机溶剂中，分别配置一系列已知浓度的afm1标准曲线系列工作液，将该afm1标准曲线系列工作液进行液相色谱-质谱/质谱仪分析，得到以afm1的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标的标准曲线及线性回归方程；将待测样品处理后进行hplc-ms/ms分析，得到样品中afm1的峰面积，将峰面积带入上述线性回归方程后得到相应的afm1的质量浓度。
其中，afm1标准曲线系列工作液配置方法为：分别准确吸取标准工作液ⅱ于容量瓶中，用初始流动相定容至刻度，配制一系列已知浓度的afm1标准曲线系列工作液。
进一步所述标准工作液ⅱ的配置方法为：取afm11.0ml，用乙腈溶解并定容至10ml；将溶液转移至棕色试剂瓶中，在-20℃下避光密封保存，即浓度为1.0μg/ml的afm1标准储备溶液；准确吸取afm1标准工作溶液500μl至10ml容量瓶中，乙腈定容，现配现用。
其中，称取一定量所述待测样品，加5ml0.1%甲酸乙腈，具体为将甲酸加入到乙腈中，甲酸占乙腈的体积百分比为0.1%，涡旋1min，加入提取包，涡旋1min，-4℃用10000rpm离心机进行离心5min，取上清液1.25ml加入净化包，然后手摇1min，使用12000rpm离心机进行离心3min，上清液过0.22μm尼龙膜，待测分析。
上述液相色谱-质谱/质谱仪配有电喷雾离子源。
其中液相色谱采用behc18色谱柱；流动相：a：0.1%甲酸水溶液，b：乙腈。梯度洗脱条件见下表1。色谱柱柱温40℃；进样量0.5μl。
上述behc18色谱柱长度为50mm，直径为1.7μm。
其中，质谱采用正电子电离方式，扫描范围50-400m/z，喷雾电压为3.5kv，雾化气压为40psi，干燥气流速为6ml/min，温度为550℃，碰撞气为氩气。
本发明的有益效果是：本发明在前处理中避开了免疫亲和柱，降低了检测成本还可以快速、准确的对afm1进行检测，基于该方法，本文选择了固体分散萃取材料，使得操作更加方便快捷，结合超高效液相色谱／串联质谱技术对afm1进行直接分析测定结果更加准确快速。
（四）具体实施方式
实施例1
称取afm1标准品溶于有机溶剂中，分别配置一系列已知浓度的afm1标准曲线系列工作液，将该afm1标准曲线系列工作液进行液相色谱-质谱/质谱仪分析，得到以afm1的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标的标准曲线及线性回归方程；将待测样品处理后进行hplc-ms/ms分析，得到样品中afm1的峰面积，将峰面积带入上述线性回归方程后得到相应的afm1的质量浓度。所述有机溶剂为乙腈。
实施例2
实施例1中一系列已知浓度的afm1标准曲线系列工作液配置方法具体为：
（1）afm1标准储备溶液（1.0μg/ml）：取afm11.0ml，用乙腈溶解并定容至10ml。将溶液转移至棕色试剂瓶中，在-20℃下避光密封保存。afm1标准品：纯度≥99%。
（2）afm1标准工作溶液ⅱ（0.05μg/ml）：准确吸取afm1标准工作溶液（1.0μg/ml）500μl至10ml容量瓶中，乙腈定容，现配现用。
（3）aftm1标准曲线系列工作液：分别准确吸取标准工作液ⅱ4ml、2ml、1ml、0.2ml至10ml容量瓶中，用初始流动相定容至刻度，配制afm1的浓度均为0.02μg/ml、0.01μg/ml、0.005μg/ml、0.001μg/ml的系列标准溶液。
绘制标准曲线：
将afm1标准储备液用空白基质稀释成质量浓度为0.001～0.05μg/ml的系列标准工作液，各进样0.5μl，进行hplc-ms/ms分析，以x轴为afm1的质量浓度，y轴为响应值，得到黄曲霉毒素m1标准曲线见下表，线性回归方程为y=1596.3655x，线性相关系数r2为0.99978。如下表所示：
实施例3
实施例1中，样品处理方法具体为：
称取5g样品于50ml比色管，加5ml0.1%甲酸乙腈，涡旋1min，加入quechersspeno5010-050123提取包，涡旋1min，-4℃用10000rpm离心5min，取上清液1.25mlquechersspeno5010-015040净化包，手摇1min，12000rpm离心3min，上清液过0.22μm尼龙膜，待测分析。
其中乙腈为色谱纯；甲酸为色谱纯。
提取包：quechersspeno5010-050123，岛津。
净化包：quechersspeno5010-015040，岛津。
实施例4
定量限的确定：
按信噪比s/n=3计算，测得afm1的检出限为0.001μg/ml；方法的检出限分别为0.029μg/kg；满足我国对afb1和afm1检出限的要求。
实施例5
精密度和回收率试验：
在阴性样品中添加相同含量的标准品，连续进样6次，得到六种平行结果的峰面积，最终计算相对标准偏差（relativestandarddeviation，rsd）值及加标回收率，结果分别见下表。afm1的相对标准偏差分别为1.674%，均＜3%，样品经处理后，通过外标法定量得到牛奶的添加回收率为87.0%～90.6%，酸奶的添加回收率为87%～92.4%。说明该方法精密度高，准确性好，能满足实际样品的分析需要。
上面以举例方式对本发明进行了说明，但本发明不限于上述具体实施例，凡基于本发明所做的任何改动或变型均属于本发明要求保护的范围。