本发明涉及医药
技术领域：
，具体涉及一种氟比洛芬酯注射液中有关物质的检测方法。
背景技术：
：氟比洛芬是一种非甾体类抗炎药，具有抗炎镇痛作用。氟比洛芬酯是氟比洛芬的前体药物，化学名为(±)-2-(2-氟-4-联苯基)丙酸-1-乙酰氧基乙酯，其结构式如下所示。其在临床上应用十分广泛，可用于手术后及各种癌症的镇痛。作用机理主要是抑制花生四烯酸环氧酶的活性，从而抑制疼痛和炎症反应的前列腺素的合成。氟比洛芬酯有两对对映异构体，目前临床上使用的氟比洛芬酯药物为其消旋体，制剂类型为脂肪乳注射液，该剂型是依据药物传递系统概念研发的以脂肪乳为药物载体，包封氟比洛芬酯的制剂，其注射时刺激性小，止痛作用起效快。目前国内外的一些研究表明，s-氟比洛芬对环氧合酶有抑制性，起主要的抗炎镇痛活性，r-氟比洛芬对环氧合酶无抑制作用，但能起到镇痛作用。也有研究表明r-氟比洛芬能够通过调整γ-分泌酶，选择性抑制aβ1-42淀粉状前体蛋白从而防治阿尔茨海默病，并由美国myriadgenetics公司开发，正处于阿尔茨海默病的三期临床研究。专利cn1736374a公开了一种r-氟比洛芬酯在制备镇痛及治疗癌症或老年痴呆药物中的用途。专利cn102670502a公开了一种以s(+)-氟比洛芬酯为药用活性成分的注射乳剂，从而降低氟比洛芬酯的临床用量，解决副作用大的缺点。专利cn103301063a也公开了一种s(+)-氟比洛芬酯注射乳剂，其给出了氟比洛芬酯的s(+)-对映体相对于氟比洛芬酯消旋体注射液的有效剂量。由此可见，由于氟比洛芬酯的非对映异构体在体内药理作用的差异，为便于进行立体选择性药效和药动学研究，确保疗效，保证药物的质量控制，对氟比洛芬酯药物两对对映异构体的分离检测具有重要意义。专利cn106770807a公开了一种氟比洛芬酯注射液中有关物质的检测方法，该申请采用反向高效液相色谱法能够分离氟比洛芬酯注射液中的两对对映异构体，除此之外，该申请公开了使用含甲醇或乙醇的流动相检测氟比洛芬酯时，调整甲醇或者乙醇的比例在液相色谱中两对对映异构体的峰分离度达不到要求，并且会出现基线漂移的现象。除此之外，氟比洛芬酯中还存在杂质脱氟氟比洛芬酯，脱氟氟比洛芬酯也有两对对映异构体，目前，尚无检测方法能够较好分离检测氟比洛芬酯的两对对映异构体以及脱氟氟比洛芬酯的两对对映异构体。本发明克服现有技术的缺陷以及技术偏见，获得了一种能够更好分离氟比洛芬酯原料药或者氟比洛芬酯制剂中对映异构体以及有关物质脱氟氟比洛芬酯对映异构体的检测方法。技术实现要素：本发明克服现有技术的缺陷，提供一种能够更好分离氟比洛芬酯及其杂质脱氟氟比洛芬酯的检测方法。本发明的技术方案如下：一种氟比洛芬酯及其制剂中有关物质的检测方法，其中，流动相采用醇类有机溶剂或者醇类有机溶剂与水或缓冲盐的混合溶液。上述检测方法中，所述的醇类有机溶剂选自甲醇或者乙醇。上述检测方法包含以下特点：(1)取氟比洛芬酯原料药或者氟比洛芬酯制剂样品，使用稀释剂稀释，制备供试品溶液；(2)色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；(3)采用紫外检测器，检测波长为200-300nm；(4)流动相流速为0.5-2.0ml/min；(5)以a相：醇类有机溶剂或者醇类有机溶剂与水或缓冲盐的混合溶液，b相：水或缓冲盐的混合溶液为流动相。上述检测方法中，，所述的醇类有机溶剂选自甲醇或乙醇。上述检测方法中，所述的醇类有机溶剂为甲醇。上述检测方法中，所述的供试品溶液为氟比洛芬酯原料药的供试品溶液，其制备方法为，取氟比洛芬酯原料药样品用稀释剂溶解并稀释，制成每1ml含氟比洛芬酯0.01-10mg的供试品溶液。上述检测方法中，所述的供试品溶液为氟比洛芬酯制剂的供试品溶液，其制备方法为，取氟比洛芬酯制剂样品用稀释剂溶解并稀释，制成每1ml含氟比洛芬酯0.01-10mg的供试品溶液。上述检测方法中，所述的稀释剂为有机溶剂，选自甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇或四氢呋喃或其任意组合。上述检测方法中，分析色谱柱柱长为150-250mm，柱内径为4.6mm。上述检测方法中，分析色谱柱的柱长为150mm，柱内径为4.6mm。根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的检测波长为254nm。上述检测方法中，所述的流速为1.0ml/min。本发明采用反向高效液相色谱法获得了一种能够较好分离氟比洛芬酯两对对映异构体以及其杂质脱氟氟比洛芬酯两对对映异构体的检测方法。附图说明图1：实施例1检测方法hplc图谱图2：实施例2检测方法hplc图谱图3：对比例1检测方法hplc图谱图4：对比例2检测方法hplc图谱具体实施方式下面结合实施例和对比例对本发明进行详细的阐述，但是下述的实施例为优选实施例，只用于对本发明技术方案的揭示，本发明的技术方案并不限于下述实施例。实施例1色谱条件色谱柱为symmetryshieldrp18(4.6×150mm，3.5μm)，a：甲醇0.15v/v冰醋酸，b：0.15v/v冰醋酸的混合溶液为流动相，采用a相45％，b相55％等度洗脱。供试品溶液的制备取氟比洛芬酯注射液1ml(相当于氟比洛芬酯10mg)，置50ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按照上述色谱条件，量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见附图图1，结果见下表：峰编号保留时间(min)％面积分离度140.320.0920.12241.2748.361.99342.160.111.89443.0249.292.01在该色谱条件下，基线平稳。1号峰(保留时间40.32min)和3号峰(保留时间42.16min)为脱氟氟比洛芬酯的两对对映异构体，2号峰(保留时间41.27min)和4号峰(保留时间43.02min)为氟比洛芬酯的两对对映异构体。由此可见，氟比洛芬酯的两对对映异构体以及脱氟氟比洛芬酯的两对对映异构体的分离度均大于1.5，主峰与杂质峰之间的分离度较好。实施例2色谱条件色谱柱为symmetryshieldrp18(4.6×150mm，3.5μm)，a：甲醇，b：0.15v/v冰醋酸的混合溶液为流动相，采用梯度洗脱。0-30min，a为40％，b为60％；25-45min，a由40％匀速提高至50％，b由60％匀速降低至50％；45-60min，a由50％匀速降低至30％，b由50％匀速提高至70％；供试品溶液的制备取氟比洛芬酯注射液1ml(相当于氟比洛芬酯10mg)，置50ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按照上述色谱条件，量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见附图图2，结果见下表：在该色谱条件下，基线平稳。1号峰(保留时间27.89min)和3号峰(保留时间29.87min)为脱氟氟比洛芬酯的两对对映异构体，2号峰(保留时间28.82min)和4号峰(保留时间30.72min)为氟比洛芬酯的两对对映异构体。由此可见，氟比洛芬酯的两对对映异构体以及脱氟氟比洛芬酯的两对对映异构体的分离度均大于1.5，主峰与杂质峰之间的分离度较好。对比例1色谱条件色谱柱：venusilxbpc18(l)，4.6×150mm，5μm，150a(天津博纳艾杰尔科技有限公司)；流动相:乙腈:水:冰醋酸＝55:45:0.15，柱温：40℃，流速：1.5ml/min；检测波长：254nm，进样量：10μl。供试品溶液的制备取氟比洛芬酯注射液1ml(相当于氟比洛芬酯10mg)，置50ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按照上述色谱条件，量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见附图3。结果如下：保留时间％面积分离度123.930.0922.17224.8147.651.57326.4550.463.26在该色谱条件下，基线平稳。1号峰(保留时间23.93min)和3号峰(保留时间26.45min)为氟比洛芬酯的两对对映异构体，其分离度大于1.5，但是在该色谱条件下，仅能检测到脱氟氟比洛芬酯的一对对映异构体，1号峰(保留时间23.93min)，杂质脱氟氟比洛芬酯的另一对对映异构体包裹在氟比洛芬酯的峰中，不仅对于有关物质脱氟氟比洛芬酯的含量检测不准确，而且对于药物主要成分氟比洛芬酯的含量检测也不准确。对比例2采用专利cn106770807a中实施例1的方法检测氟比洛芬酯注射液色谱条件色谱柱为symmetryshieldrp18(4.6×150mm，3.5μm)，a：0.15v/v冰醋酸，b：乙腈:水＝95:5的混合溶液为流动相，采用梯度洗脱方式；洗脱过程中，流动相a，b的体积百分含量如下：0-20min，a为30％，b为70％；20-40min，a由30％匀速提高至60％，b由70％匀速降低至40％；40-56min，a由60％匀速降低至30％，b由40％匀速提高至70％；供试品溶液的制备取氟比洛芬酯注射液1ml(相当于氟比洛芬酯10mg)，置50ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按照上述色谱条件，量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见附图4。结果如下表：保留时间％面积分离度121.330.0928.62222.4648.181.68323.9650.711.79在该色谱条件下，基线平稳。2号峰(保留时间22.46min)和3号峰(保留时间23.96min)为氟比洛芬酯的两对对映异构体，其分离度大于1.5，但是在该色谱条件下，仅能检测到脱氟氟比洛芬酯的一对对映异构体，1号峰(保留时间21.33min)，杂质脱氟氟比洛芬酯的另一对对映异构体包裹在氟比洛芬酯的峰中，会造成药物主成分含量与有关物质的含量检测不准确。上述内容详细描述了本发明的优选实施方式。但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。当前第1页12