鹿布氏杆菌病抗体检测卡的制作方法

本实用新型涉及检测卡领域，尤其涉及一种快速检测鹿布氏杆菌病毒抗体的检测卡，用于对鹿血样品中布氏杆菌病毒抗体的检测。

背景技术：

近年来我国鹿养殖业得到了迅速的发展，给我国带来了巨大的经济收入。但目前我国梅花鹿严重的疫病流行影响着鹿养殖业的发展。布氏杆菌（Brucellosis)就是其中重要的传染疫病之一，作为常见的人畜共患病，该病广泛流行于我国畜间，不仅带来了极大的经济损失，还不断威胁着人类和社会的安全。

监测抗体是有效淘汰感染鹿的重要手段。采集鹿血清，并检测血清中鹿布氏杆菌抗体的效价是监控此病的主要方法。

目前，血清学检测方法是鹿布氏杆菌病常用的诊断方法之一。血清学检测常用的方法有试管凝集试验和虎红平板试验。试管凝集试验和虎红平板试验的结果判定主观性较强、不易量化。 胶体金检测试纸条具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和仪器，结果判定直观等优点，广泛应用于多种疾病的快速诊断。

本发明应用胶体金免疫层析制备鹿布氏杆菌抗体检测卡，用于鹿布氏杆菌病抗体的检测，其灵敏度高，且在短时间内能够判断结果，操作简便，不需要特殊的实验仪器，不需要专业的操作人员，可以用于鹿布氏杆菌病抗体的快速检测，尤其适用于基层畜牧兽医站对本病的初筛。

技术实现要素：

本实用新型的目的是提供一种操作简单，灵敏度高的鹿布氏杆菌病抗体检测卡。

为实现上述目的，本实用新型提供一种鹿布氏杆菌病抗体检测卡，包括卡壳和卡壳内的试纸条，卡壳上设有加样孔和视窗孔，所述试纸条包括底板，所述底板上依次衔接有样品垫、兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述硝酸纤维素膜上设有包被有鹿布氏杆菌脂多糖LPS抗原的检测线和包被有羊抗兔IgG的质控线，所述的检测线和质控线平行排列。

进一步的，上述的一种鹿布氏杆菌病抗体检测卡，所述硝酸纤维素膜两端分别与兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫和吸水纸相互交叠连接，所述样品垫压贴在兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫上。

进一步的，上述的一种鹿布氏杆菌病抗体检测卡，所述样品垫为用于检测血清、血浆及全血的样品垫。

进一步的，上述的一种鹿布氏杆菌病抗体检测卡，所述底板为PVC板。

进一步的，上述的一种鹿布氏杆菌病抗体检测卡，所述的样品垫与卡壳上的加样孔相对应，所述的硝酸纤维素膜上的检测线与视窗孔相对应。

进一步的，上述的一种鹿布氏杆菌病抗体检测卡，所述的样品垫为滤血膜。

进一步的，上述的一种鹿布氏杆菌病抗体检测卡，所述的样品垫为加入有抗鹿红细胞表面蛋白抗体的样品垫。

进一步的，上述的一种鹿布氏杆菌病抗体检测卡，所述兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫是在玻璃纤维上喷涂兔抗鹿IgG胶体金标记物。

有益效果

与现有技术相比，本实用新型提供的鹿布氏杆菌病抗体检测卡，结构简单，易于操作，用于鹿布氏杆菌病抗体的检测时，其灵敏度高，且在短时间内能够判断结果，不需要特殊的实验仪器，不需要专业的操作人员，可以用于鹿布氏杆菌病抗体的快速检测，尤其适用于基层畜牧兽医站对本病的初筛。

通过以下的描述并结合附图，本实用新型将变得更加清晰，这些附图用于解释本实用新型的实施例。

附图说明

为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为鹿布氏杆菌病抗体检测卡的结构布置图；

图中，样品垫1；硝酸纤维素膜2；底板3；兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫4；检测线5；质控线6；吸水纸7；卡壳8；加样孔81；视窗孔82。

具体实施方式

现在参考附图描述本实用新型的实施例。

实施例

本实用新型是一种鹿布氏杆菌病抗体检测卡，如图1所示，包括卡壳8和卡壳8内的试纸条，卡壳8上设有加样孔81和视窗孔82，所述试纸条包括底板3，所述底板3为PVC板，所述底板3上依次衔接有用于检测血清、血浆及全血的样品垫1，为检测结果更为精确，在检测全血时，其样品垫1优先选用滤血膜，或者加入有抗鹿红细胞表面蛋白抗体的样品垫。兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫4、硝酸纤维素膜2和吸水纸7，具体的说，所述硝酸纤维素膜2两端分别与兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫4和吸水纸7相互交叠连接，所述样品垫1压贴在兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫4上，所述兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫4上设有胶体金标记的兔抗鹿IgG抗体。所述硝酸纤维素膜2上设有包被有鹿布氏杆菌脂多糖LPS抗原的检测线5和包被有羊抗兔IgG的质控线6，所述的检测线5和质控线6平行排列。

为了方便加样和观察检测结果，所述的样品垫1与卡壳8上的加样孔81相对应，所述的硝酸纤维素膜上的检测线5与视窗孔82相对应。

为了更清楚的说明本实用新型提供的技术方案，所述的鹿布氏杆菌脂多糖LPS抗原购自杭州亿米偌生物技术有限公司，所述的兔抗鹿IgG和羊抗兔IgG购自洛阳佰奥通实验材料中心。

所述的兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫4通过下述步骤依次制得：

所述的兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫4是将兔抗鹿IgG胶体金标记物喷涂在玻璃纤维材质，所述的兔抗鹿IgG胶体金标记物是胶体金颗粒溶液和兔抗鹿IgG通过物理吸附连接而成，其具体步骤如下：

（1）用0.2mol/L的碳酸钾溶液将胶体金颗粒溶液的PH调至9.0；

（2）按照10µg/ml浓度计算所需的兔抗鹿IgG，将兔抗鹿IgG用去离子水稀释至1mg/ml，搅拌下缓慢滴入上述胶体金颗粒溶液；

（3）搅拌下同样将10%的牛血清白蛋白（BSA）加入上述混合溶液中；

（4）在离心速度10000rpm，时长30min后，将上述混合液中的上清除去，剩余的沉淀物用0.01mol/ml的PH7.0磷酸盐缓冲液复溶至原体积的1/10，得兔抗鹿IgG胶体金标记物。

（5）将上述兔抗鹿IgG胶体金标记物喷涂在玻璃纤维上，待干燥后制备成兔抗鹿IgG胶体金复合物金垫。

为了精确检测结果，所述胶体金颗粒溶液中含有的胶体金颗粒大小为25nm，所述胶体金颗粒溶液中所含有的胶体金颗粒大小的变异度小于2%，其采用下述步骤依次制得：

（1）将0.01%氯金酸水溶液100ml加热至沸腾，同时匀速搅拌；

（2）搅动下准确加入1%柠檬酸三钠水溶液0.7ml，金黄色的氯金酸水溶液在2分钟内变为紫红色，继续煮沸15分钟，冷却后以蒸馏水恢复到原体积。

具体使用时，上述鹿布氏杆菌病抗体检测卡是利用鹿血液样品中鹿布氏杆菌抗体、兔抗鹿IgG胶体金标记物和硝酸纤维素膜上的鹿布氏杆菌脂多糖LPS抗原通过间接法来检测鹿血液样本中的鹿布氏杆菌抗体。

为快速层析检测卡，在添加鹿血液样本后，样本中的鹿布氏杆菌抗体沿层析膜移动，与检测线5上的布氏杆菌脂多糖LPS抗原结合显色，通过检测线5的显色深浅来判定鹿血液中布氏杆菌抗体含量的高低。

具体使用时，将待检鹿血液样本70µl加入到加样孔81后，与兔抗鹿IgG胶体金复合物金标垫4上的兔抗鹿IgG结合沿层析膜移动。若待检样本中含有鹿布氏杆菌抗体，将与检测线5处的布氏杆菌脂多糖LPS抗原结合，形成抗原抗体复合物，在检测线5处出现红色的条带，结合物越多，条带的红色就越深。

以上所述仅为说明本实用新型，并不用于限制本实用新型，凡在本实用新型的的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。