本发明属于分析化学领域,具体涉及一种雪胆甲素和乙素的测定方法。
背景技术:
雪胆甲素和乙素是雪胆属植物的主要成分,为葫芦烷型三萜。属于葫芦科,其块根性寒、味苦,具有清热解毒、抗菌消炎的功效,广泛用于治疗肝炎、菌痢、冠心病、气管炎、慢性子宫颈炎、肿瘤等疾病。雪胆甲素性寒,味苦,具有清热解毒、抗菌消炎、消肿止痛的功能。临床上,雪胆甲素和乙素的混合物适用于菌痢、肠炎、支气管炎、急性扁桃体炎等症的治疗。由于雪胆甲素和乙素只有较弱的紫外吸收,难以使用普通的高效液相法对其定量分析。雪胆甲素和乙素的结构式如说明书附图的图1和图2所示。目前,尚无有效的雪胆甲素和乙素含量测定方法。准确测定雪胆甲素和乙素的含量,对于雪胆的质量控制、应用研究具有指导意义。
技术实现要素:
本发明提供一种雪胆中甲素和乙素含量的测定方法。该方法首次利用超高压液相色谱-质谱联用仪,通过优化质谱条件和流动相,实现雪胆植物中甲素和乙素的提取和快速检出。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。
一种雪胆甲素和乙素的测定方法,包括如下步骤:
①样品提取:将雪胆植物粉末用甲醇溶液超声提取,离心分离得上层清液;超声提取三次,合并上层清液,以色谱甲醇定溶,以0.22μm的尼龙滤膜过滤后得到测试样品;
②测定:采用uplc-ms/ms进行测定,仪器条件如下:
液相色谱条件为,色谱柱:c18柱(1.7μm,2.1mm×100mm);流速:0.2~0.3ml/min;柱温:25~35℃;进样量:1~5μl;流动相a为甲醇,流动相b为水;
梯度洗脱条件为:0~4min,60wt%甲醇溶液;4~5min,100wt%甲醇;5min,60wt%甲醇溶液;
质谱条件如下:离子源:电喷雾离子源esi;扫描方式:负离子扫描;检测方式:多反应监测扫描模式;喷雾电压:3200v;离子源温度:110℃;雾化气:550l/hr;气帘气:50l/hr;碰撞池电压:0.0035mbar;扫描时间:50ms。
优选地,步骤②的质谱分析仪器为电喷雾质谱esims。
优选地,雪胆甲素和乙素的保留时间和质谱参数如下表所示。
本发明的有益效果:本发明的测定方法能够有效提取雪胆植物中的雪胆甲素和乙素,首次利用超高压液相色谱-质谱联用仪,通过优化质谱条件和流动相,实现雪胆植物中甲素和乙素的提取和快速检出,方法快速、准确,灵敏度高,重现性好。
附图说明
图1为雪胆甲素的结构式;
图2为雪胆乙素的结构式;
图3为本发明雪胆甲素标准品超高液相质谱图;
图4为本发明雪胆乙素标准品超高液相质谱图。
图5为本发明实施例1雪胆甲素测定的超高液相质谱图;
图6为本发明实施例1雪胆乙素测定的超高液相质谱图。
具体实施方式
本发明以下将结合实施例作进一步描述,但并不限制本发明:
实施例1
①样品提取:将峨眉山雪胆植物粉末0.5g用15ml甲醇溶液在700kw下超声提取30min,以4000转/分离心分离得上层清液;超声提取三次,合并上层清液至50ml的容量瓶中,以色谱甲醇定溶,以0.22μm的尼龙滤膜过滤后得到测试样品;
②测定:采用uplc-ms/ms法进行测定,仪器条件如下:
液相色谱条件为,色谱柱:c18柱(1.7μm,2.1mm×100mm);流速:0.2~0.3ml/min;柱温:25~35℃;进样量:2μl;流动相a为甲醇,流动相b为水;
梯度洗脱条件为:0~4min,60wt%甲醇溶液;4~5min,100wt%甲醇;5min,60wt%甲醇溶液;
质谱条件如下:离子源:电喷雾离子源esi;扫描方式:负离子扫描;检测方式:多反应监测扫描模式;喷雾电压:3200v;离子源温度:110℃;雾化气:550l/hr;气帘气:50l/hr;碰撞池电压:0.0035mbar;扫描时间:50ms;质谱分析仪器为电喷雾质谱esims;
雪胆甲素和乙素的保留时间和质谱参数如下表所示;
测定结果如图5和图6所示;干燥的峨眉山雪胆中甲素和乙素的含量分别是57.05mg/g和92.54mg/g。
实施例2
①样品提取:将罗锅底植物粉末0.5g用15ml甲醇溶液在700kw下超声提取30min,以4000转/分离心分离得上层清液;超声提取三次,合并上层清液至50ml的容量瓶中,以色谱甲醇定溶,以0.22μm的尼龙滤膜过滤后得到测试样品;
②测定:采用uplc-ms/ms法进行测定,仪器条件如下:
液相色谱条件为,色谱柱:c18柱(1.7μm,2.1mm×100mm);流速:0.2~0.3ml/min;柱温:25~35℃;进样量:3μl;流动相a为甲醇,流动相b为水;
梯度洗脱条件为:0~4min,60wt%甲醇溶液;4~5min,100wt%甲醇;5min,60wt%甲醇溶液;
质谱条件如下:离子源:电喷雾离子源esi;扫描方式:负离子扫描;检测方式:多反应监测扫描模式;喷雾电压:3200v;离子源温度:110℃;雾化气:550l/hr;气帘气:50l/hr;碰撞池电压:0.0035mbar;扫描时间:50ms;质谱分析仪器为电喷雾质谱esims;
雪胆甲素和乙素的保留时间和质谱参数如下表所示;
测定结果如图5和图6所示;干燥的峨眉山雪胆中甲素和乙素的含量分别是65.70mg/g和73.21mg/g。