延胡索甲素的新应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体涉及延胡索甲素的新应用。
【背景技术】
[0002] 呼吸道病毒是一大类主要以呼吸道为侵入门户，首先在呼吸道粘膜上皮细胞中增 殖引起呼吸道以及全身感染，造成呼吸道及其他器官损害的病毒的总称。病毒性呼吸道感 染，又名病毒性感冒，多数有流行性发生，病种很多，临床表现较为多样，主要分病毒性上呼 吸道感染和病毒性下呼吸道感染，前者表现为急性鼻炎、咽炎和喉炎，后者表现为急性气管 炎、支气管炎和肺炎。以冬春季发病较多。临床上的急性呼吸感染中有90~95%是由病 毒引起的，主要的致病病毒包括流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、腺病 毒、鼻病毒、埃可病毒、柯萨奇病毒、麻疹病毒、风疹病、冠状病毒等。流感病毒是一种造成人 类及动物患流行性感冒的RNA病毒，属于正粘液病毒科，人类流感病毒根据其核蛋白的抗 原性可以分为甲、乙、丙型三类。在核蛋白抗原性的基础上，流感病毒还根据血凝素和神经 氨酸酶的抗原性分为不同的亚型，目前在人群中流行的甲型流感病毒为甲3型（H3N2)和亚 甲型（H1N1)。呼吸道合胞病毒是在婴幼儿中引起致死性急性呼吸道感染的最重要的病原因 子，典型的是细支气管炎和肺炎，但在较大儿童和成人主要引起上呼吸道感染。柯萨奇病毒 是一种肠病毒，分为A和B两类，是一类常见的经呼吸道和消化道感染人体的病毒，感染后 人会出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状。腺病毒属于腺病毒科，能引起急性发热性咽炎、咽 结膜热、急性呼吸道感染、肺炎、眼部感染和胃肠道感染。近年来，随着全球物种活动范围的 加大，各种病毒的变异性增强，特别是人与禽等其他种属间的流感病毒相互作用，产生具有 高致病性的新变种病毒，人感染高致病性禽流感病例的发生、新发病毒的人群间高传染性 及感染者的高死亡率，曾一度引起了全球范围对流感的恐慌，严重影响了人类的日常生活 和经济稳定发展。
[0003]目前，治疗病毒性呼吸道感染的已上市药物种类依然有限，根据作用机制大致分 为两类，一类为M2离子通道阻断剂，主要为20世纪60年代发现的金刚烷胺和金刚乙胺， 此类药主要对甲型流感病毒有预防和治疗作用，研究表明此类药物具有神经毒性等毒副作 用，而且容易产生耐药性和传染性的耐药株，因此M2离子通道阻断剂的临床使用并不广 泛；另一类是神经氨酸酶抑制剂，代表性药物为20世纪90年代发现的扎那米韦和奥司他 韦，此类药物对大多数的人流感病毒及高致病性禽流感病毒均有效。但是近年来关于奥司 他韦的耐药株也不断有报道。因此，开发更多基于新靶点和新结构类型的呼吸道病毒防治 药物具有重要的意义。
[0004] 延胡索甲素，异名为延胡索碱或紫堇碱，英文名为Corydaline或corydaline， 分子式为C22H27N04，为季胺类生物碱，是罂粟科紫堇属植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T. Wang)块茎中的主要有效成分之一。现代药理学表明延胡索甲素不仅有镇痛、兴奋子 宫、抗心律失常等作用，还可用于制备为戒毒药物。目前，尚未有延胡索甲素在抗呼吸道病 毒及治疗呼吸道病毒感染引起疾病的报道。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明的目的在于提供延胡索甲素在制备抑制呼吸道病毒药物和/或 制备预防和治疗呼吸道疾病药物中的应用。
[0006] 延胡索甲素结构式如下：
[0008] 其中，作为优选，所述呼吸道病毒为甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、 副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和/或柯萨奇病毒。
[0009] 作为优选，所述呼吸道疾病为由甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、glj 流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和/或柯萨奇病毒引起的上/下呼吸道急/慢 性炎症。
[0010] 更优选地，所述甲型流感病毒为甲型流感病毒H3N2和/或甲型流感病毒H1N1。
[0011] 更优选地，所述柯萨奇病毒为柯萨奇病毒B3型。
[0012] 更优选地，所述腺病毒为腺病毒7型。
[0013] 作为优选，所述呼吸道疾病包括流感、肺炎、哮喘、咳嗽、支气管炎、结膜炎、鼻炎、 鼻窦炎和扁桃体炎。
[0014] 作为优选，所述药物为片剂、胶囊、颗粒剂、滴丸剂、液体制剂、煎膏剂、分散剂、栓 剂、凝胶剂、气雾剂或贴剂。
[0015] 本领域中，MDCK细胞感染是目前研究H1N1和H3N2等流感病毒的典型细胞模型。 本发明以不同浓度的延胡索甲素测试对MDCK细胞的安全性，结果显示延胡索甲素对MDCK 细胞的TC5。（半数有毒浓度）为337. 13 μ M，最大无毒浓度为67. 67 μ M。同时，延胡索甲素 对流感病毒Η3Ν2的IC5。（半数抑制浓度）为10. 42 μ Μ，选择指数（SI)高达32. 36 ;对流感 病毒Η1Ν1的IC5。为18. 18 μ Μ，选择指数（SI)为18. 55。1C 5。浓度远低于最大无毒浓度，表 明延胡索甲素能够有效抑制Η1Ν1和Η3Ν2的复制，可用于治疗Η1Ν1和Η3Ν2病毒引起的呼 吸道疾病，且安全无毒。
[0016] Hep-2细胞感染是目前研究呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒Β3型和腺病毒7等 病毒的常用细胞模型。本发明以不同浓度的延胡索甲素测试对Hep-2细胞的安全性，结 果显示延胡索甲素对Η印-2细胞的TC5。（半数有毒浓度）为462. 66 μΜ，最大无毒浓度 为135.34μΜ。同时，延胡索甲素对呼吸道合胞病毒IC5。为16.68μΜ，选择指数（SI)为 27. 73 ;对柯萨奇病毒B3型1(：5。为21. 52 μ M，选择指数（SI)为21. 50 ;对腺病毒7型1C 5。为 17. 48 μΜ，选择指数（SI)为26.47。IC5。浓度远低于最大无毒浓度，表明延胡索甲素能够有 效抑制呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒B3型和腺病毒7的复制，用于治疗呼吸道合胞病毒、柯 萨奇病毒B3型和腺病毒7病毒引起的呼吸道疾病，且安全无毒。
[0017] 由以上技术方案可知，本发明提供了延胡索甲素在制备抑制呼吸道病毒药物和/ 或制备预防和治疗呼吸道疾病药物中的应用，从而为临床上病毒性呼吸道疾病的治疗提供 一种安全高效毒副作用小的天然小分子化合物。延胡索甲素在无毒性范围内能够有效地抑 制呼吸道病毒的复制，可进一步开发为治疗或预防病毒性呼吸道疾病的药物，具有广泛的 应用前景。
【附图说明】
[0018] 图1所示为延胡索甲素对MDCK细胞毒性检测柱形图；
[0019] 图2所示为延胡索甲素抗流感病毒A/汉防/359/95(H3N2)检测柱形图；
[0020] 图3所示为延胡索甲素抗流感病毒A/PR/8/34(HlNl)检测柱形图；
[0021] 图4所示为延胡索甲素对Η印-2细胞毒性检测柱形图；
[0022] 图5所示为延胡索甲素抗呼吸道合胞病毒（RSV，Long株）检测柱形图；
[0023] 图6所示为延胡索甲素抗柯萨奇病毒B3型（CVB3, Nancy株）检测柱形图；
[0024] 图7所示为延胡索甲素抗病毒7型（Ad7)检测柱形图。
【具体实施方式】
[0025] 本发明公开了延胡索甲素的新应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改 进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显 而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述应用已经通过较佳实施例进行了描述， 相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或 适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0026] 抗病毒药物的体外细胞筛选方法主要包括空斑减数法、MTT(噻唑蓝）比色分析法 及CPE(细胞病变）观察法等。空斑减数法可以敏感精确地测定病毒的感染程度，检查结果 直观可靠，但是其对操作技术要求较高，操作较繁琐，可推广性受限。CPE观察法检测药物毒 性是以前用最为常用的，通过在显微镜下逐日观察细胞形态变化，但此法定量不准确，主观 性强，难以判断结果，而且统计困难。MTT分析法是使用MTT对细胞进行染色，通过检测其光 密度（0D值）的改变可判断细胞的活性，从而实现药物抗病毒活性的定量分析，该法操作简 便，在国内外实验室中广泛应用。本发明【具体实施方式】中将MTT法与CPE法进行结合，通过 在光镜下观察细胞的CPE，决定进行MTT测定的最适时间，从而保证结果的准确性。
[0027] 以下就本发明所提供的延胡索甲素的新应用做进一步说明。
[0028] 实施例1 :延胡索甲素对MDCK细胞的细胞毒性实验
[0029] MDCK细胞购自美国模式菌种保藏中心（ATCC);药物：延胡索甲素购于中国药品生 物制品检定所。仪器为酶标仪，molecular devices spectraMax M2e ;天平，Mettler Toledo AL104。
[0030] 细胞培养：37°C，5%