含有咖啡酸酯和灯盏花乙素的药用组合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药领域的药用制剂，具体是一种含有特殊工艺制得的注射用组合物的配方及制备工艺和应用。
【背景技术】
[0002]缺血性心脑血管疾病如中风、冠心病是人类死亡的主要原因，急性发作致死率极高，存活者多会不同程度留下偏瘫、失语、口眼歪斜、视力模糊或者频发心绞痛、心律失常，降低生活质量，给病人及家属带来沉重的身心和经济负担。据统计，我国约有4000万患者，随着人口老龄化发展，发病人群还在快速增长，每年新发病人数高达450万。开发此类预防治疗药物是世界新药研究的热点。心脑缺血后影响能量代谢，继发乳酸堆积、钙超载、自由基损伤等多种变化。多靶点逆转或改善这些变化，提高综合治疗效是药物治疗的重要目标。病毒性肝炎也是一种严重危害人类健康的传染性疾病，其流行范围之光、发病率之高、传染性之强是其它疾病所不能比拟的，目前尚缺乏真正有效的治疗药物。植物药化学组成具多样性特征，结构各异的有效成分通过作用于不同靶点或病理环节联合奏效，常发挥明显的协同效应。从历史悠久的中草药或民族药开发新药有其独特优势。本发明的目的即是通过对云南苗族植物药灯盖细辛(灯盖花)(Erigeron breviscapus (Vant.) Hand.- Mazz)的研究为上述疾病的预防和治疗提供一种成分明确、质量可控、安全有效的药用组合物及其制剂。
[0003]灯盏花为菊科飞蓬属草本植物，主要分布于云南省，民间广泛用于治疗中风后遗症、风湿病、胸痹等症，取得了较好效果。早在1976年云南学者即开始对灯盏花的化学成分进行研究，分离鉴定了灯盏花乙素(即野黄芩苷，scutellarin)、焦袂康酸、飞蓬甙等成分，其中灯盏花乙素经药理筛选被证明是治疗中风的有效成分，在此基础上研制成功以灯盏花素为原料(黄酮类有效部位，主成分为野黄芩甙)约占90%的药品“灯盏花素片”，后来一些厂家又开发了 “灯盏花素注射液”和“注射用灯盏花素”。与灯盏花素相关的专利有CN1053609、CN10595934、CN1133180、CN1252277、CN1228959、CN1191730、CNl187356 等，涉灯盏花素原料提取及口服、注射制剂的制备工艺。但，对灯盏花化学成分的认识还远未充分。
[0004]目前，我国已有该品种的小容量注射剂在生产，生产厂家很少，主要是受制于原料及制剂工艺的不完善，经常出现例如制剂不稳定，有关物质超标、不符合注射制剂的相关要求等一系列的问题。
【发明内容】
[0005]本发明目的是寻找一种合理有效的咖啡酸酯和灯盏花乙素的注射剂配方及工艺以克服现有的该制剂存在的问题，期望生产一种质量稳定可控的小容量注射用制剂，尤其是水针剂型。
[0006]本发明的配方的有效成分由咖啡酸酯和灯盏花乙素组成。
[0007]本发明提供了一种含有咖啡酸酯和灯盏花乙素的药用组合物，该组合物中含有的咖啡酸酯和灯盏花乙素的重量比为1.2:1?19:1 ;以1ml的注射液为计量单位，其中干物质含量为115-145mg，在这些干物质中(即1ml注射液含有的干物质)，咖啡酸酯为8-18.5mg，灯盏花甲素为0.2-1.5mg，灯盏花乙素4_6mg，总黄酮4.2-7.5mg ;该咖啡酸酯中的二咖啡酸酯含量为7.0-15mg。
[0008]本发明上述的药用组合物，其中，该组合物含有咖啡酸酯和灯盏花乙素的重量比为 1.2:1 ?5.5:1。
[0009]进一步地，本发明提供了一种含有咖啡酸酯和灯盏花乙素的药用组合物，其中咖啡酸酯中的二咖啡酸酯包括3，4-0- 二咖啡酰奎宁酸，3，5-0- 二咖啡酰奎宁酸，4，5-0二 -咖啡酰奎宁酸，飞蓬酯乙及灯盏细辛酯。
[0010]上述药用组合物，该组合物以1ml注射液为计量单位，其中干物质含量为115-145mg,总咖啡酸酯和灯盏花甲素的干物质含量为8.2-20.0mg ;二咖啡酸酯含量为7.2-14.0mg ;其中，该二咖啡酸酯中的3，4_0_ 二咖啡酰奎宁酸含量为1.4-2.3mg,3, 5_0_二咖啡酰奎宁酸0.8-1.4mg，4，5-0 二 -咖啡酰奎宁酸1.5-2.6mg,飞蓬酯乙1-2.6mg，灯盏细辛酯 2.2-5.1mg0
[0011]本发明的含有灯盏花乙素和咖啡酰奎宁酸注射用组合物制剂，解决了业内存在多年的由于灯盏细辛中有效成分不稳定而导致的制剂澄明度等一系列问题，尤其解决了由于单咖啡酸酯附近的杂质导致的澄明度低以及制剂颜色深等问题，在组合物中去除了水溶性杂质时也去除了焦袂康酸，达到更精准地除去杂质的目的。
[0012]本发明上述的药用组合物具有如下的指纹图谱:
[0013]色谱条件为:色谱柱是十八烷基硅烷为填料，采用梯度洗脱的方式，梯度洗脱程序如下:
[0014]O分钟时，5%流动性A，92%流动相B，3%流动相C ；
[0015]15分钟时，15%流动性A, 73.5%流动相B, 11.5%流动相C ；
[0016]45分钟时，15%流动性A, 73.5%流动相B, 11.5%流动相C ；
[0017]55分钟时，O %流动性A，55%流动相B，45%流动相C ；
[0018]65分钟时，O %流动性A，15%流动相B，85%流动相C ；
[0019]65.1分钟时，5%流动性A，92%流动相B，3%流动相C ；
[0020]80分钟时，5%流动性A，92%流动相B，3%流动相C ；
[0021 ] 其中，流动相A为甲醇，流动相B为含0.5%的甲酸水溶液，C为乙腈溶液，
[0022]检测条件为:流速1.0mL/min,检测波长335nm,柱温30°C ；
[0023]在上述条件下，得到该药用组合物的指纹图谱，该指纹图谱的特征在于:所述组合物的有效成分具有如下保留时间:灯盏花乙素27.5-29.5min，3，4-0-二咖啡酰奎宁酸30.0-32.0min, 3，5-0- 二咖啡酰奎宁酸 32.0-34.0min,飞蓬酯乙 37.5-40.5min，灯盏花甲素 42.5-46.0min, 4，5-0- 二咖啡酰奎宁酸 44.5-48.0min，灯盏细辛酯 48.0-51.5min。
[0024]具体地说，本发明的上述药用组合物具有如图1所示的指纹图谱。
[0025]本发明还提供了上述的药用组合物的制备方法，该方法为:
[0026]取灯盏细辛，加水煎煮至少二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成清膏；取清膏调节pH直至溶解，滤过，滤液加硫酸或盐酸溶液调节pH I?5，滤过，得滤液和沉淀；
[0027]取沉淀，控制pH值反复多次溶解、沉淀以除去杂质，得到干膏粉为灯盏花乙素，控制灯盏花乙素的纯度50-95% ；
[0028]取滤液，过聚酰胺柱，用水洗脱，弃去水洗脱液，再用20% -90%浓度乙醇梯度洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩成清膏,用水溶解性< 80g/L(20°C )有机溶剂萃取，收集有机溶剂提取液，回收有机溶剂，得到的清膏为咖啡酸酯；
[0029]上述灯盏花乙素与咖啡酸酯浸膏加入注射用水，调节pH 7?9，滤过，滤液备用；另取氯化钠加注射用水煮沸滤过，与上述备用滤液合并，再加注射用水，滤过，灌封，灭菌，即得所述的组合物。
[0030]在本发明优选实施例中，该方法优选为:
[0031]取灯盏细辛，加水煎煮至少二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至75°C下相对密度为1.15-1.25的清膏；取清膏加水稀释，调节pH 7.5?9，滤过，滤液加硫酸或盐酸溶液调节PH 2?3，滤过，得滤液和沉淀；
[0032]取沉淀，用水溶解，加碱溶液调节pH 5?6，滤过，滤液加硫酸溶液调节pH小于3，滤过，沉淀用浓度90 %?95 %的乙醇洗涤，再用60-70 %乙醇溶解，加氢氧化钠溶液调pH5?6，滤过，滤液加盐酸溶液调节pH小于3，滤过，沉淀用浓度90%?95%浓度的乙醇洗涤，干燥，干膏粉为灯盏花乙素；
[0033]取滤液，通过聚酰胺柱，梯度洗脱，用至少2倍量的水洗脱，弃去水洗脱液，再用20% -90%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩成清膏，加氢氧化钠溶液，调节pH 7?10,用乙酸乙酯萃取,取碱水层用硫酸或盐酸溶液调节pH 2?3,用有机溶剂萃取,收集有机溶剂提取液，回收溶剂，得到的清膏为咖啡酸酯；
[0034]上述干膏粉与咖啡酸酯浸膏加入注射用水，调节pH 7?9，滤过，滤液备用；另取氯化钠加注射用水煮沸滤过，与上述备用滤液合并，再加注射用水，滤过，灌封，灭菌，即得所述的组合物。
[0035]在本发明优选实施例中，该方法优选为:
[0036]取灯盏细辛以800g计，加水煎煮至少二次，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15_1.25(75°C )的清膏。取清膏加3倍量水稀释，加5%氢氧化钠溶液调节pH7.5?8.5，滤过，滤液加10%硫酸溶液调节pH 2?3，滤过，得滤液和沉淀；取沉淀，用等量水溶解，加10%氢氧化钠溶液调节pH 5?6，滤过，滤液加20%硫酸溶液调节pH I?2，滤过，沉淀用90%乙醇等量洗涤4次，再用适量的65%乙醇溶解，加0.5%氢氧化钠溶液调pH5?6，滤过，滤液加10%盐酸溶液调节pH I?2，滤过，沉淀用的90%乙醇等量洗涤4次，真空干燥，干膏粉备用；取滤液，通过聚酰胺柱，梯度洗脱，用至少2倍量的水洗脱，弃去水洗脱液，再用20% -90%乙醇洗脱，收集浓度为40%乙醇洗脱时的乙醇洗脱液以及70%乙醇洗脱的洗脱液，回收乙醇并浓缩至70°C下相对密度为1.10?1.20的清膏，加碱溶液，调节pH 7?10，用乙酸乙酯萃取至少1-3次，取碱水层用硫酸或盐酸溶液调节pH 2?3，用乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯提取液，减压回收乙酸乙酯溶液，剩余稠膏加水，煮沸，浓缩至45°C下相对密度为1.20?1.30的清膏，即为咖啡酸酯；上述干膏粉和咖啡酸酯加注射用水，用5%氢氧化钠调节pH 7.5?8.5，滤过，滤液备用；另取氯化钠8g、活性炭0.2g,加适量注射用水溶解煮沸，滤过，滤液与上述备用滤液合并，混匀，再加注射用水至1000ml，滤过，灌封，灭菌，即得。
[0037]在本发明另一优选实施例中，该方法优选为:
[0038]取灯盏细辛，加水煎煮至少二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至75°C下相对密度为1.15-1.25的清膏；取清膏加水稀释，调节pH 7?12，滤过，滤液加硫酸或盐酸溶液调节pHI?5，滤过，得滤液和沉淀；
[0039]取沉淀，用水溶解，加碱溶液调节pH 5?6，滤过，滤液加硫酸或盐酸溶液调节pH小于3，滤过，沉淀用浓度90%以上的高浓度乙醇洗涤，再用60-70%乙醇溶解，再加碱溶液调pH5?6，滤过，滤液加硫酸或盐酸溶液调节pH小于3，滤过，沉淀用浓度90%以上的高浓度乙醇洗涤，干燥，得到的干膏粉为灯盏花乙素；
[0040]取滤液，通过聚酰胺柱，梯度洗脱，依次用至少2倍量的水、40%乙醇、70%乙醇洗脱，弃去水洗脱液，收集40%乙醇洗脱液和70%乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩至相对密度为L10?L 20(70°C)的清膏，加氢氧化钠溶液，调节pH 7?10，用乙酸乙酯萃取至少I次，取碱水层用硫酸或盐酸溶液调节pH 2?3，用乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯提取液，回收乙酸乙酯溶液，剩余稠膏加水，煮沸，浓缩至相对密度为1.20?1.30的清膏，得到的清膏为咖啡酸酯；
[0041]与上述备用的干膏粉，分别加注射用水适量，用碱溶液调节pH7.5?8.5，滤过，滤液备用；另取适量的氯化钠、活性炭，加适量注射用水溶解煮沸，滤过，滤液与上述备用滤液合并，混匀，再加注射用水，滤过，灌封，灭菌，即得所述的组合物，该组合物为注射用制剂。
[0042]在本发明又一优选实施例中，该方法优选为:
[0043]取灯盏细辛，加水煎煮至少二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15-1.25的清膏；取清膏加水稀释，调节pH 7.5?9，滤过，滤液加硫酸或盐酸溶液调节PH 2?3，滤过，得滤液和沉淀；
[0044]取沉淀,用水溶解,加碱溶液调节pH 5?6,滤过,滤液加硫酸溶液调节pH小于I?2，滤过，沉淀用浓度90%?95%的乙醇洗涤，再用60-70%乙醇溶解，加氢氧化钠溶液调pH 5?6，滤过，滤液加盐酸溶液调节pH I?2，滤过，沉淀用浓度90%?95%浓度的乙醇洗涤，干燥，干膏粉为灯盏花乙素；
[0045]取滤液，通过聚酰胺柱，梯度洗脱，依次用2-10倍量的水、40%乙醇、70%乙醇洗脱，弃去水洗脱液，收集浓度为40%乙醇洗脱时的乙醇洗脱液以及70%乙醇洗脱的洗脱液，回收乙醇并浓缩至70°C下相对密度为1.10?1.20的清膏，加碱溶液，调节pH 7?10，用乙酸乙酯萃取至少1-3次，取碱水层用硫酸或盐酸溶液调节pH 2?3，用乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯提取液，减压回收乙酸乙酯溶液，剩余稠膏加水，煮沸，浓缩至相对密度为1.20?1.30的清膏，即为咖啡酸酯；