专利名称：一种从内折香茶菜中提取内折香茶菜乙素的方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种从内折香茶菜中提取内折香茶菜乙素的方法。
背景技术：
内折香茶菜乙素是一种二萜类化合物，分子式为C2tlH26O5，分子量为346. 42，主要存在于唇形科内折香茶菜的茎叶中，资源丰富。药理研究表明，内折香茶菜乙素具有抗肿瘤活性，对体外和体内的艾氏腹水癌(Ehrlich ascites carcinoma, ECA)肿瘤细胞有明显的抑制作用，并且还具有抗菌活性，对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和白色念珠菌有很强的抑菌作用，可作为一种有前途的抗肿瘤药物，值得深入开发与研究。目前，对内折香茶菜乙素的研究较少，经检索，尚未发现适宜于大量制备内折香茶菜乙素的工业化方法的公开报道。
发明内容
针对上述情况，本发明的目的是提供一种从内折香茶菜中提取内折香茶菜乙素的方法，可有效解决从内折香茶菜中提取内折香茶菜乙素的问题。本发明的技术构思是这样的
本发明结合几种提取纯化方法，摸索出了一种适合提取纯化内折香茶菜乙素的方法。 采用醇溶液索氏提取，提取液浓缩上大孔树脂，除去多糖、色素等杂质，再采用溶剂萃取及制备液相色谱精制纯化，得到高纯度的内折香茶菜乙素。本发明是通过如下技术方案实现的
将内折香茶菜叶粉碎，经60-95%乙醇或甲醇溶液浸泡l_2h，加热至80-95°C索氏提取提取4-10h，提取液减压回收至无醇味，加水分散，上大孔吸附树脂柱，洗脱液浓缩，用乙醚萃取，萃取液浓缩干燥得内折香茶菜乙素粗品，用反相高效液相色谱法精制得到内折香茶菜乙素对照品，纯度达98%以上。所述大孔吸附树脂型号可选AB-8、DlOl、HP20、HZ841、LDA-10等。所述大孔吸附树脂洗脱溶剂为乙醇或丙酮溶液，先用10-30%乙醇或丙酮溶液洗脱，再用50-80%乙醇或丙酮溶液洗脱，收集50-80%的乙醇或丙酮洗脱液。所述反相高效液相色谱法色谱条件为流动相为乙腈-水，乙腈与水的体积比为 (30-40) (60:70),流速 20-50ml/min,检测波长 233nm。本发明的有益效果是采用索氏提取，可实现连续提取，同时浓缩提取液，既节约溶剂，又提高了萃取率；通过大孔树脂吸附洗脱，提高了产品的纯度；采用反相高效液相色谱法精制纯化，纯度高达98%以上，所得产品可作为对照品使用，同时可进行大量制备；本发明工艺稳定，可用于工业化生产。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步说明。
实施例1:
将内折香茶菜茎叶粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量3倍的80%甲醇溶液浸泡2h， 然后加热至80_90°C索氏提取6h，收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味，加水溶解分散， 离心，上清液上HZ841大孔吸附树脂柱，依次用水冲柱至洗脱液流出无色、用20%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用60%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，收集60%乙醇洗脱液，减压浓缩，用乙醚反复萃取6次，萃取液浓缩干燥得内折香茶菜乙素粗品。将内折香茶菜乙素粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相 乙腈-水(32:68)，流速25ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长233nm，连续进样，收集含有内折香茶菜乙素的高纯度流分，浓缩干燥得产品119mg，含量为98. 6%。实施例2:
将内折香茶菜茎叶粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量5倍的75%乙醇溶液浸泡2h， 然后加热至85-90°C索氏提取8h，收集提取液取液减压回收乙醇至无醇味，加水溶解分散， 离心，上清液上AB-8大孔吸附树脂柱，依次用水冲柱至洗脱液流出无色、用10%丙酮溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用50%丙酮溶液冲柱至洗脱液流出无色，收集50%丙酮洗脱液， 减压浓缩，用乙醚反复萃取5次，萃取液浓缩干燥得内折香茶菜乙素粗品。将内折香茶菜乙素粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈-水(40:60)，流速20ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长233nm，连续进样，收集含有内折香茶菜乙素的高纯度流分，浓缩干燥得产品117mg，含量为98. 7%。实施例3:
将内折香茶菜茎叶粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量4倍的95%甲醇溶液浸泡lh， 然后加热至80-90°C索氏提取10h，收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上DlOl大孔吸附树脂柱，依次用水冲柱至洗脱液流出无色、用25%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用75%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩，用乙醚反复萃取3次，萃取液浓缩干燥得内折香茶菜乙素粗品。将内折香茶菜乙素粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相 乙腈-水(38 62)，流速50ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长233nm，连续进样，收集含有内折香茶菜乙素的高纯度流分，浓缩干燥得产品12;3mg，含量为98. 4%。实施例4:
将内折香茶菜茎叶粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量3倍的60%乙醇溶液浸泡lh， 然后加热至85-95°C索氏提取4h，收集提取液取液减压回收乙醇至无醇味，加水溶解分散， 离心，上清液上HP20大孔吸附树脂柱，依次用水冲柱至洗脱液流出无色、用30%丙酮溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用80%丙酮溶液冲柱至洗脱液流出无色，收集80%丙酮洗脱液， 减压浓缩，用乙醚反复萃取4次，萃取液浓缩干燥得内折香茶菜乙素粗品。将内折香茶菜乙素粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈-水(30:70)，流速40ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长233nm，连续进样，收集含有内折香茶菜乙素的高纯度流分，浓缩干燥得产品120mg，含量为98. 1。实施例5:
将内折香茶菜茎叶粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量6倍的70%甲醇溶液浸泡2h， 然后加热至80-95°C索氏提取5h，收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上LDA-10大孔吸附树脂柱，依次用水冲柱至洗脱液流出无色、用10%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，最后用70%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩，用乙醚反复萃取5次，萃取液浓缩干燥得内折香茶菜乙素粗品。将内折香茶菜乙素粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相 乙腈-水(35 65)，流速35ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，检测波长233nm，连续进样，收集含有内折香茶菜乙素的高纯度流分，浓缩干燥得产品116mg，含量为98. 8%。
权利要求
1.一种从内折香茶菜中提取内折香茶菜乙素的方法，其特征在于包括以下步骤将内折香茶菜叶粉碎，经60-95%乙醇或甲醇溶液浸泡l-2h，加热至80-95°C索氏提取提取 4-10h,提取液减压回收至无醇味，加水分散，上大孔吸附树脂柱，洗脱液浓缩，用乙醚萃取， 萃取液浓缩干燥得内折香茶菜乙素粗品，用反相高效液相色谱法精制得到内折香茶菜乙素对照品，纯度达98%以上。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述大孔吸附树脂型号可选AB-8、DlOU HP20、HZ841、LDA-10 等。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述大孔吸附树脂洗脱溶剂为乙醇或丙酮溶液，先用10-30%乙醇或丙酮溶液洗脱，再用50-80%乙醇或丙酮溶液洗脱，收集50-80%的乙醇或丙酮洗脱液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述反相高效液相色谱法色谱条件为流动相为乙腈-水，流速20-50ml/min，检测波长233nm。
全文摘要
本发明提供一种从内折香茶菜中提取内折香茶菜乙素的方法，包括以下步骤将内折香茶菜叶粉碎，加入适量甲醇或乙醇溶液索氏提取，提取液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂柱吸附，洗脱液浓缩，乙醚萃取，萃取液浓缩干燥得内折香茶菜乙素粗品，用制备高效液相分离得到内折香茶菜乙素。本发明工艺简单，得率高，产品质量好、纯度高。
文档编号C07D493/10GK102311446SQ20111026398
公开日2012年1月11日 申请日期2011年9月8日 优先权日2011年9月8日
发明者刘东锋, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司