夏天无总生物碱精制物、制备方法、药物组合物及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及夏天无总生物碱精制物、制备方法、药物组合物及应用。
【背景技术】
[0002]夏天无是S粟科紫堇属植物伏生紫堇Corydalis decumbens (Thunb.) Pers.的干燥块茎或全草，是我国常用中草药，具活血、通络、行气、止痛等功效。主治高血压、脑血管引起的中风偏瘫，并对风湿性关节炎、坐骨神经痛、小儿麻痹后遗症等有较好的作用。其主要有效成分为异喹啉类总生物碱。文献资料显示从夏天无中已分离得到30多个异喹啉类生物碱，主要含原阿片碱(protopine)、延胡索乙素(tetrahydropalmatine)、毕扣扣灵(bicuculline)、巴马汀(palmatine)、药根碱等生物碱。
[0003]目前，夏天无总碱常用的提取和精制方法有水提醇沉、渗漉、醇提、酸碱法。随着现代制剂技术的应用，大孔吸附树脂、超声、超滤膜分离、超临界C02萃取等方法也逐渐应用于夏天无总碱的提取和精制。马宏达等研究了超临界C02萃取法提取夏天无中总生物碱的工艺条件。以萃取压力、萃取温度和萃取时间为考察因素，以夏天无总生物碱、原阿片碱、延胡索乙素含量的综合评分及干膏率为评价指标，采用正交试验优选最佳工艺条件。结果:最佳工艺条件为萃取压力30MPa，萃取温度55°C，萃取时间2.5h。提取物中总生物碱含量约为67%，原阿片碱含量约为17%，延胡索乙素含量约为10%。(马宏达，安晔，郭涛等。超临界0)2萃取法提取夏天无总生物碱工艺研究[J].中国药房，2010,21(47) =4456-4458)朱才庆等采用截留相对分子质量为6X103?1.0X104的超滤膜制备的夏天无注射液澄清、色泽好，显示出更强的药效作用。朱才庆，余华，范其坤，等.超滤膜纯化夏天无总碱的研究.中草药，2005，36 (9): 1319-1325.
[0004]CN 101058576发明公开了一种夏天无总生物碱提取物及其制备方法，其制备方法是以夏天无为原料，利用超临界C02流体萃取条件进行提取，收集萃取物，干燥得夏天无总碱提取物。应用本法提取的夏天无总生物碱平均含量采用UV法测定为90%，其中总生物碱主要包括原阿片碱、延胡索乙素、毕扣扣灵、盐酸巴马汀、紫堇尔明、夏无宁碱及其他生物碱，六个主碱的含量占提取物的75%?90%。
[0005]CN 101623332中本发明公开了一种夏天无总生物碱酸盐冻干物的制备方法，以夏天无超临界C02总生物碱提取物为原材料，加酸水溶液使其溶解，得夏天无总生物碱的酸水溶液；滤过或离心后滤过，将澄清溶液冷冻干燥，即得夏天无总生物碱酸盐冻干物。
[0006]上述两个专利均提供了一种制备夏天无总生物碱的方法，但是都有不足之处。CN101058576仅提供了夏天无超临界提取夏天无总生物的方法，制备所得提取物含有油脂类成分，难于干燥，阻碍了其后续的开发应用，且对萃取时间和C(V流速进行了限制，难以应用到工业化生产。
[0007]CN 101623332 B专利在CN 101058576 B基础上以夏天无超临界提取的夏天无总生物碱粗提物为原料通过酸溶液处理后冷冻干燥制备总生物碱酸盐冻干物的方法，制备所得的冻干物总生物碱的含量在80%以上。该专利对夏天无总生物碱的富集、纯化没有做更进一步的研究，制得的夏天无提取物纯度不够高，限制了夏天无总生物碱的应用范围。
[0008]夏天无总生物碱制剂临床主要用于治疗老年痴呆，脑梗死，中小学生假性近视等，有很大的市场前景，但是目前的夏天无总生物碱的提取分离技术多采用酸提过树脂柱法，工艺繁杂，耗时长，得到的总生物碱的纯度不高的缺点。因此，寻找工艺简单、提取率高、提取到的夏天无总生物碱的纯度好、适合于大规模工业化生产的提取方法是目前急需解决的技术难题。
【发明内容】
[0009]本发明要解决的技术问题是为了克服现有夏天无总生物碱提取方法步骤繁琐、提取率低、提取得到的提取物纯度低，杂质含量高，不适合药用、不适合于工业化生产等缺陷，而提供了一种夏天无总生物碱精制物、制备方法、药物组合物及应用。本发明建立了更科学高效的高纯度的夏天无总生物碱提取方法，该方法高效、简便易行，制备的夏天无总生物碱的HPLC纯度大于98%，能更安全有效的发挥夏天无总生物碱的药理药效。
[0010]本发明提供了一种夏天无总生物碱精制物，其中，总生物碱精制物中各组分的重量百分比分别为:原阿片碱:15%?40% ;延胡索乙素:10%?40% ;毕扣扣灵:0?10%(不包括0);盐酸巴马汀:0.01%?2%;紫堇尔明:2%?10% ;夏无宁碱:15%?30% ;其他生物碱及提取物:1 %?5 %。
[0011]本发明中，所述的夏天无总生物碱精制物，采用HPLC法测定，总生物碱含量为60 %?100 %，其中，六个主碱总含量占夏天无总生物碱精制物的95 %以上。
[0012]本发明还提供了所述的夏天无总生物碱精制物的制备方法，其包括以下步骤:
[0013]步骤1:以夏天无(罂粟科植物伏生紫堇)的块茎、粉碎、碱化，得到碱化后的夏天无；所述的碱化中，所述的碱与所述的夏天无的质量比值为0.001?1，优选0.001?0.1。
[0014]步骤2:将步骤1得到的碱化后的夏天无，在超临界C02萃取和膜分离相耦合的萃取仪中进行萃取和分离，干燥，得到夏天无总生物碱精制物。
[0015]步骤1中，所述的粉碎，优选粉碎至夏天无(罂粟科植物伏生紫堇)的粒径为10目?60目(即1.74mm?0.273mm)。所述的碱化,优选采用无机碱进行碱化,所述的无机碱优选氨水溶液、氢氧化钙、碳酸钠和碳酸氢钠中的一种或多种，进一步优选氨水溶液，所述的氨水溶液的质量浓度优选1%?10%，所述的质量浓度是指氨气的质量占氨水溶液总质量的百分比。所述的氨水溶液可以采用氨水试剂与水混合得到，所述的氨水试剂与水的体积比优选5%?10%，所述的体积比是指氨水试剂的体积与水体积的百分比。所述的氨水试剂可以为本领域中常规市售氨水试剂，所述的氨水试剂的浓度优选2%?30%。所述的无机碱优选以其水溶液的形式使用，所述的无机碱的水溶液的浓度优选1%?10%，所述的浓度是指无机碱的质量占无机碱的水溶液的总质量的百分比。
[0016]步骤2中，所述的超临界C02萃取和分离的时间优选0.5?5h ;所述的超临界C02萃取和分离时采用的夹带剂优选甲醇和/或乙醇，进一步优选乙醇，所述的乙醇优选质量百分比为95%的乙醇水溶液，所述的质量百分比是指乙醇的质量占乙醇水溶液总质量的百分比。所述的“超临界C02萃取和膜分离相耦合的萃取仪”中的膜优选超滤膜、纳滤膜、反渗透膜或中空纤维膜，进一步优选纳滤膜；所述的纳滤膜的孔径优选1纳米?3纳米。所述的超滤膜的孔径优选纳米10纳米?40纳米。所述的反渗透膜的孔径优选1纳米?5纳米。所述的中空纤维膜的孔径优选1纳米?40纳米。
[0017]步骤2中，所述的超临界C02萃取和膜分离相耦合的萃取仪根据《中药提取分离新技术》一书(2010年4月，化学工业出版社出版，P353页)中记载的原理图进行组装，所述的超临界0)2萃取和膜分离相耦合的萃取仪包括以下部件:萃取装置、分离装置、高压泵、膜装置、冷却器和气体储罐。
[0018]本发明中，所述的夏天无总生物碱精制物的制备方法优选还包括步骤3，进一步优选还包括步骤3和步骤4，再进一步优选还包括步骤3、步骤4和步骤5。
[0019]步骤3:将步骤2得到的夏天无总生物碱精制物调节pH至2?5，采用超声波萃取，然后采用超滤或微滤膜过滤，得到纯化后的夏天无总生物碱精制物的溶液。
[0020]步骤4:将步骤3得到的夏天无总生物碱精制物的溶液调节pH为8?12，过滤，固相用水洗至中性，得到进一步纯化后的夏天无总生物碱精制物；