专利名称：铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及其制备方法，是一 种用于抗炎镇痛的毛茛科植物伏毛铁棒锤非生物碱活性部位，特别涉及 铁棒锤非生物碱活性部位药物组合物的制备方法。
背景技术：
铁棒锤为毛莨科植物伏毛铁棒锤Acontium f lavum Hand-Mazz的干 燥块根。《中华大词典》记载"铁棒锤，活血祛瘀，祛风除湿、止痛、 消肿"，《陕西中草药》曰"铁棒锤活血化瘀、祛风湿止痛、消肿败毒、 去腐生肌，止血"。铁棒锤的化学成分研究大多集中于生物碱类成分， 目前报道有8种生物碱，分别是乌头碱、3-乙酰乌头碱、华北乌头碱、 8-去乙酰氧基-8-乙氧基-3-乙酰乌头碱、脱氧乌头碱、3-乙酰乌头碱 和12-表-欧乌头碱和3-脱氧乌头碱；和3种非生物碱，为P-谷甾醇、 3-脱氧乌头碱-8-亚油酸酯和乌头碱-8-亚油酸酯。
铁棒锤药理作用研究源于上个世纪70年代，并在镇痛、抗炎、抗 风湿等领域取得了一定的进展。利用注射用水将伏毛铁棒锤总碱配成各 种浓度(pH为7.4)，对18 20克的雌性小白鼠进行腹腔注射并测其镇 痛率，效果良好。利用植物块根提得总生物碱进行药理实验,在小鼠热 板法、豚鼠皮丘法及家兔滴眼法中，证明有强大的镇痛和局部麻醉作用，
但总碱毒性较高，治疗指数较低。之后他们又对3-乙酰乌头碱和乌头碱
进行了抗炎实验，结果证实了铁棒锤生物碱的抗炎作用。
目前，将铁棒锤用于医药的化学成分也集中于生物碱类，没有对非
生物碱类成分的专利申请；铁棒锤的药理作用研究几乎全部集中于生物 碱类成分，对非生物碱类成分的药理作用还无相关报道。
发明内容
本发明铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及其制备方法，发明 目的在于针对国内外对于铁棒锤非生物碱类成分的药理作用研究现 状，以铁棒锤为原料进行提取分离，得到具有抗炎镇痛作用的铁棒锤非 生物碱活性部位，找到铁棒锤非生物碱活性部位的提取方法和抗炎镇痛 药物的制备方法。
本发明铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及其制备方法是这 样实现的本发明所述的铁棒锤非生物碱活性部位成分的制备方法包括 以下几个步骤
A、 将已干燥至恒重的铁棒锤药材粉碎成粗粉过16目筛，称定，加入5 ~ 20倍(mL/g)溶剂进行回流提取l 3h。冷却，过滤得滤液，滤渣加入 同样量的溶剂重复提取1-2次，合并滤液。减压浓缩，至相对密度为 1.5~2,得浓缩液。
B、 将浓缩液经大孔吸附树脂进行分离，分别用水、浓度为30%~50%的 乙醇和浓度为80% ~ 100%的乙醇先后进行洗脱，得到水洗部位、30% ~ 50%
乙醇部位和80%~100%乙醇部位。
C、 分别取l-2mL水洗部位、30%~50%乙醇部位和80%~100%乙醇部位， 加入碘化铋钾试液1~2滴，以是否有橙黄色絮状沉淀现象确定非生物 碱部位。
D、 减压浓缩，至相对密度为1.5~2，回收溶剂，分别得到水洗部位、 30%~50%乙醇部位流浸膏和80%~100%乙醇部位流浸膏。
其中用于提取铁棒锤非生物碱活性部位的提取溶剂可以是水、酸性 水溶液或30%~95%浓度的乙醇、30%~95%浓度的酸性乙醇。其中提取溶 剂与药材的液料比为5~20 (mL/g);其溶剂提取时间为1 ~ 3h;溶剂提 取次数为1-3次；用于大孔吸附树脂洗脱的溶剂分别为水、浓度为 30%~50%的乙醇和浓度为80°/。~100%乙醇；经生物碱沉淀反应确定铁棒 锤非生物碱活性部位是95%乙醇洗部位。所制备的铁棒锤非生物碱活性 部位，其临床主要用于抗炎和镇痛。所述的一种抗炎镇痛药物，其可以 是胶囊剂或片剂，按照胶囊剂或片剂常规制备工艺，加入适量药用辅料 制备而成；其中铁棒锤非生物碱活性部位与辅料的比例为1:10 - 1: 500; 片剂每片含铁棒锤非生物碱活性部位0. 2 ~ 2mg，胶囊剂每粒含铁棒锤非 生物碱活性部位0. 2-2rng。
本发明制备的铁棒锤非生物碱活性部位浸膏的抗炎镇痛作说明 一、抗炎实验
1.炎症模型的复制和实验研究
取小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只，分别为铁棒 锤总浸膏组56. 2mg(以生药计)/kg;铁棒锤非生物碱活性部位2. 4mg(以 生药计)/kg灌胃；阳性对照组(吲哚美辛组)20mg/kg灌胃模型对照组； 空白对照组。釆用蒸馏水分别配制铁棒锤总浸膏组、铁棒锤非生物碱活 性部位组；阳性对照组(即吲哚美辛组)是用蒸馏水将吲噪美辛配成浓 度分别为lmg/mL的溶液；模型对照组和空白对照组给予等量容积的蒸 馏水灌胃。各组均灌胃3天，灌胃容量为0.2mL/10g。灌胃后将小鼠置 于清洁级动物室内饲养。精密称取角叉菜胶，以蒸馏水配成1%浓度。于 最后1次灌胃给药1小时后，各组均于小鼠后足跖部皮下注射角叉菜胶 溶液，剂量为0. 03mL/只。在小鼠足踝处划线，用自制毛细管放大测量 装置测量小鼠致炎前后足趾容积，以各小鼠致炎前、后足趾容积的差值 作为肿胀度。肿胀度(％)=(致炎前足趾容积x致炎后足趾容积)/致 炎前足趾容积x 100%.
2.数据处理和实验结果
实验数据进行统计学处理，并以x土s表示，组间差异比较采用t
检验进行统计。结果如下表l所示
表1不同给药组分对角叉菜胶致小鼠足肿胀反应的影响 组别 剂量(rag AnL)动物数(只)肿胀度 抑制率(％)
模型对照组 一 10 0.52 ±0.15 —
阳性对照组 1 10 0.17 ±0,01* 53.21
总浸膏组 4 10 0.27 ± 0.03* 36. 53
非生物碱活性部位组0.1 10 0.33 ±0.15* 29.0
注*P<0. 05与模型组比较
实验结果表明，模型组出现阳性结果，符合炎症模型要求。不同给 药组(见表l)，与模型组比较，铁棒锤总浸膏组、铁棒锤非生物碱活性 部位组的显著性降低(P〈0.05)，说明铁棒锤总浸膏组、铁棒锤非生物碱 活性部位组对角叉菜胶致小鼠足肿胀有抑制作用。结果表明，铁棒锤非 生物碱活性部位对角叉菜胶致小鼠足肿胀有抑制作用。
二、镇痛实验
1.镇痛模型的复制和试验研究
取小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只，分别为铁棒 锤总浸膏组56. 2mg(以生药计)/kg;铁棒锤非生物碱活性部位2. 4mg(以 生药计)/kg灌胃；阳性对照组(吲哚美辛组)20mg/kg灌胃模型对照组； 空白对照组。釆用蒸馏水分别配制铁棒锤总浸膏组、铁棒锤非生物碱活 性部位组；阳性对照组(吲哚美辛组)是将吲哚美辛用蒸馏水配成浓度 为lmg/mL的溶液；模型对照组和空白对照组给予等量容积的蒸馏水灌 胃一次。给受试药物l小时后，腹腔注射O. 6%醋酸(HAC)溶液0.2mL， 观察注射HAC后30min内小鼠出现扭体反应的次数，计算抑制率。抑制 率°/ =(对照组扭体数一用药组扭体数)/对照组扭体数x 100%。
2.数据处理及实验结果
实验数据进行统计学处理，并以x士s表示，组间差异比较釆用t
检验进行统计。结果如下表2所示
表2不同给药组分对醋酸致小鼠扭体反应的影响(x土s) 组另U 剂量(mg/mL)动物数(只)肿胀度 抑制率(％)
模型对照组 一 10 52.68 ±5.72 —
阳性对照组 1 10 1.94 ± 0.73* 90.30
总浸膏组 4 10 22. 77 ±7.13* 63.21
非生物碱活性部位组 0.1 10 4. 58 ± 3. 99**73. 74
注*P<0. 05,与模型对照组比较；**P>0. 01与阳性对照组比较
实验结果表明，模型组出现阳性结果，符合疼痛模型要求。不同给 药组分(见表2)与模型组比较，铁棒锤非生物碱活性部位组、铁棒锤 总浸膏组的显著性升高(P〈0.05)，说明5铁棒锤非生物碱活性部位组、
铁棒锤总浸膏组对醋酸致小鼠扭体反应有抑制作用。与阳性对照组比 较，铁棒锤非生物碱活性部位组无显著性差异(P〉0.05)，说明铁棒锤非
生物碱活性部位组与阳性对照组药物吲哚美辛镇痛效果相当。结果表 明，铁棒锤非生物碱活性部位对醋酸致小鼠扭体有吲哚美辛相当的抑制 作用，铁棒锤非生物碱活性部位具有良好的抗炎和镇痛作用。
本发明铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及其制备方法的有 益效果以铁棒锤为原料进行提取分离，得到了具有抗炎镇痛作用的铁 棒锤非生物碱活性部位的提取方法和铁棒锤非生物碱活性部位抗炎镇 痛药物的制备方法。
具体实施例方式实施例1
取已干燥至恒重的铁棒锤药材粉碎，过16目筛，称取100g，加入 500mL70。/。乙醇回流提取1.5h，冷却，滤过，滤渣再加入500mL70。/。乙醇 回流提取1.5h，如此反复提取3次，合并3次提取滤液。减压浓缩，至 相对密度为1.5~2的流浸膏。按照与大孔吸附树脂相同重量称取此流 浸膏，经大孔吸附树脂进行'分离，先用水进行洗脱直至洗脱液无色得水 洗部位，后用浓度为50%的乙醇洗脱直至洗脱液无色得50%乙醇洗部位， 最后用浓度为95%的乙醇进行洗脱直至洗脱液无色得95%乙醇洗部位。 分别取l 2mL水洗部位、50%乙醇洗部位和95%乙醇洗部位，分别加入 磷化铋钾试液1~2滴，其中水洗部位、50%乙醇洗部位的生物碱沉淀反 应出现橙黄色絮状沉淀，95%乙醇洗部位没有出现橙黄色絮状沉淀，说 明铁棒锤非生物碱部位是95%乙醇洗部位。再分别将水洗部位、50%乙醇 洗部位和95%乙醇洗部位减压浓缩至相对密度为1. 5的浸膏。按照片剂 制备工艺，取铁棒锤非生物碱活性部位浸膏，喷雾干燥过80目筛。称 取2kg，淀粉55kg及微晶纤维素35 kg，充分混匀，加入10。/。PVP乙醇 液适量，制软材，将软材用16~20目筛，制粒，40 8(TC干燥，加入 羧甲基淀粉钠6kg和硬脂酸镁2kg，混匀，20目筛整粒，测颗粒含量， 确定片重，压片，包衣。每片含铁棒锤非生物碱21^。
实施例2
同实验例1,其中提取溶剂为2000 mL水，回流提取3h,提取2次， 合并2次提取滤液，减压浓缩得流浸膏。按照与大孔吸附树脂相同重量
称取此流浸膏，经大孔吸附树脂进行分离，先用水进行洗脱直至洗脱液
无色得水洗部位，后用浓度为30%的乙醇洗脱直至洗脱液无色得30%乙 醇洗部位，最后用浓度为80%的乙醇进行洗脱直至洗脱液无色得80%乙 醇洗部位。分别取l 2mL水洗部位、30%乙醇洗部位和80%乙醇洗部位， 分别加入碘化铋钾试液1~2滴，其中水洗部位、30%乙醇洗部位的生物 碱沉淀反应出现橙黄色絮状沉淀，80%乙醇洗部位没有出现橙黄色絮状 沉淀，说明铁棒锤非生物碱活性部位是80。/。乙醇洗部位。再分别将水洗 部位、30%乙醇洗部位和80%乙醇洗部位减压浓缩至相对密度为1. 5的浸
膏。按照片剂制备工艺，取铁棒锤非生物碱活性部位浸膏，喷雾干燥过 80目筛。称取0.2kg，淀粉55kg及微晶纤维素35kg,充分混匀，加入 10y。PVP乙醇液适量，制软材，将软材用16~20目筛，制粒，40~80°C 干燥，加入羧甲基淀粉钠6kg和硬脂酸镁2kg，混匀，20目筛整粒，测 颗粒含量，确定片重，压片，包衣。每片含铁棒锤非生物碱0.2mg。
实施例3
同实验例1，其中提取溶剂为500 mLpH值为2~6的醋酸水溶液， 回流提取lh，提取1次。减压浓缩得流浸膏。按照与大孔吸附树脂相同 重量称取此流浸膏，经大孔吸附树脂进行分离，先用水进行洗脱直至洗 脱液无色得水洗部位，后用浓度为40%的乙醇洗脱直至洗脱液无色得40% 乙醇洗部位，最后用浓度为100%的乙醇进行洗脱直至洗脱液无色得100% 乙醇洗部位。分别取l 2mL水洗部位、40%乙醇洗部位和100%乙醇洗部 位，分别加入碘化铋钾试液1 2滴，其中水洗部位、40%乙醇洗部位的
生物碱沉淀反应出现橙黄色絮状沉淀，100%乙醇洗部位没有出现橙黄色 絮状沉淀，说明铁棒锤非生物碱活性部位是100%乙醇洗部位。再分别将 水洗部位、40y。乙醇洗部位和100%乙醇洗部位减压浓缩至相对密度为1. 5
的浸膏。按照胶囊剂制备工艺，取铁棒锤非生物碱活性部位浸膏，喷雾
干燥过80目筛。称取0.2kg，预胶化淀粉适量，充分混匀，填充于空心 胶囊中。每粒含铁棒锤非生物碱0.2mg。
实施例4
同实验例1，其中提取溶剂为500 mLpH值为2~6的盐酸水溶液， 回流提取lh，提取1次。按照胶囊剂制备工艺，取铁棒锤非生物碱活性 部位浸膏，喷雾干燥过80目筛。称取2kg,预胶化淀粉适量，充分混匀， 填充于空心胶囊中。每粒含铁棒锤非生物碱2mg。
实施例5
同实验例1，其中提取溶剂为600 mLpH值为2-6的醋酸70%乙醇 溶液，回流提取2h，提取3次。
实施例6
同实验例1，其中提取溶剂为600 mLpH值为2~6的盐酸30%乙醇 溶液，回流提取l. 5h，提取3次。
实施例7
同实验例1,其中提取溶剂为600 mLpH值为2~6的盐酸95%乙醇 溶液，回流提取l. 5h,提取3次。
实施例8
同实验例1，其中提取溶剂为600 mLpH值为2~6的醋酸30%乙醇 溶液，回流提取l. 5h，提取3次。
实施例9
同实验例1，其中提取溶剂为600 mLpH值为2~6的醋酸95%乙醇 溶液，回流提取l. 5h,提取3次。
权利要求
1. 铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及其制备方法，其特征在于它是按以下方法进行制备的A、将铁棒锤药材粉碎成粗粉，加入5～20倍(mL/g)溶剂回流提取1～3h。过滤得滤液，滤渣加入同样量的溶剂重复提取1～3次，合并滤液。减压浓缩，至相对密度为1.5～2，得浓缩液。B、将浓缩液经大孔吸附树脂进行分离，分别用水、浓度为30％～50％的乙醇和浓度为80％～100％的乙醇先后进行洗脱，得到水洗部位、30％～50％乙醇部位和80％～100％乙醇部位。C、分别取1～2mL水洗部位、30％～50％乙醇部位和80％～100％乙醇部位，加入碘化铋钾试液1～2滴，以是否有橙黄色絮状沉淀现象确定非生物碱部位。D、减压浓缩，至相对密度为1.5～2，回收溶剂，分别得到水洗部位、30％～50％乙醇部位流浸膏和80％～100％乙醇部位流浸膏。
2. 根据权利要求1所述的铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及 其制备方法，其特征在于提取溶剂可以是水、酸性水溶液或30%~ 95%浓度的乙醇、30%~95%浓度的酸性乙醇。其中提取溶剂与药材的 液料比为5~20 (mL/g)。
3. 根据权利要求2所述的铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及 其制备方法，其特征在于所用酸性水溶液和酸性乙醇中的酸可以是盐酸或醋酸。
4. 根据权利要求1所述的铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及其制备方法，其特征在于其溶剂提取时间为l~3h;溶剂提取次数 为1 ~ 3次。
5. 根据权利要求1所述的铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及 其制备方法，其特征在于 一种抗炎镇痛的药物组合物是铁棒锤非生 物碱活性部位和任意药剂学上可接受的赋形剂制成的。
6. 根据权利要求5所述的铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及 其制备方法，其特征在于药物组合物可以是胶囊剂或片剂。
7.根据权利要求6所述的铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及 其制备方法，其特征在于药物组合物的制备方法按照胶囊剂和片剂 常规制备工艺，加入适量药用辅料制备而成。
8. 根据权利要求7所述的铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及 其制备方法，其特征在于:'铁棒锤非生物碱活性部位和辅料的比例为 1: 10~ 1: 500;片剂每片含铁棒锤非生物碱活性部位0. 2 ~ 2mg，胶 囊剂每粒含铁棒锤非生物碱活性部位0. 2 ~ 2mg。
全文摘要
铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及其制备方法，本发明公开了一种用于抗炎镇痛的铁棒锤非生物碱活性部位的药物组合物及其制备方法；其中铁棒锤非生物碱活性部位是以铁棒锤为原料提取得到的，铁棒锤非生物碱活性部位具有良好的抗炎镇痛作用，将铁棒锤非生物碱活性部位与药剂学上可接受的赋形剂制备成药物组合物，该组合物可以是胶囊剂或片剂等。
文档编号A61K125/00GK101390961SQ20081017437
公开日2009年3月25日 申请日期2008年10月31日 优先权日2008年10月31日
发明者付雪艳, 周文韬, 张义伟, 张立明, 戴贵东, 琳 董, 马学琴 申请人:宁夏医科大学