专利名称：一种从单叶格里风中制备格里风素的方法
技术领域：
本发明属于植物有效成分提取分离技术领域，涉及一种从单叶格里风中制备格里风素的方法。
背景技术：
格里风素(Griffonin)分子式为C14H19NO8，分子量为329. 31，是从豆科植物单叶格 MMGriffonia simplicifolia Bai 11. > ^Μ^^Μ,^^κΜSemiaquiIegia adoxoides (DC.) Makino等植物中分离得到的一种氰苷类化合物，具有提高红细胞钠容量，作为抗镰状细胞药物治疗镰状细胞疾病危象，并且具有抗肿瘤促进作用，在Raji细胞中，对TPA有道的 EBV-EA活化有强的抗肿瘤促进作用。目前格里风素的提取工艺研究报道甚少，尚未发现制备高含量格里风素的方法报道。
发明内容
本发明的目的在提供一种从单叶格里风中提取制备格里风素的方法，以得到高纯度的格里风素。为实现上述目的，本发明的技术方案如下
一种从单叶格里风中制备格里风素的方法，其特征在于包括以下步骤取单叶格里风根粉碎，用40-95%乙醇回流或恒温浸渍提取，反复提取2-4次，合并提取液后进行浓缩、干燥得粗提物A ；将粗提物A与经过预处理的14-30目粗聚酰胺树脂按重量比1-3:1混勻， 装入层析柱，然后用50-75%乙醇洗脱，洗脱流速为0. 2-0. 5BV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥，得到格里风素粗提物B ；将格里风素粗提物B与经过预处理的50-150目细聚酰胺树脂按重量比2-5 1混勻，装入层析柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1 6 3)混合溶液进行洗脱， 洗脱流速为0. 03-0. lBV/h,收集洗脱液，浓缩，低温干燥得格里风素粗品；将粗品加入甲醇溶解，再经制备液相进一步分离纯化得到纯度98%以上的格里风素成品。所述粗提取物A与经过预处理的粗聚酰胺树脂混勻先将粗提物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C条件下边加溶液边搅拌粗聚酰胺树脂直至混合均勻。所述格里风素粗提物B与经过预处理的细聚酰胺树脂混勻先将粗提物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C条件下边加溶液边搅拌细聚酰胺树脂直至混合均勻。所述制备液相填料为C18，柱规格为30mmX 250mm，检测波长262nm，流动相为甲醇-水或乙腈-水，所述流动相甲醇的体积百分比为25-50%，所述流动相乙腈的体积百分比为 15-30%ο本发明方法所用溶剂毒性较小，环保，经济效益好，能进行大规模生产，且工序简单，易于控制，分离效率高，产品纯度高。目前国内关于格里风素的分离纯化研究报道较少， 聚酰胺树脂柱层析与高效制备液相色谱结合用于格里风素的分离纯化也属首次，本发明方法为格里风素的进一步开发利用提供了药理原料和理论支持。
具体实施例方式下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。实施例1
取单叶格里风根粉碎，加50%乙醇在70°C条件下恒温浸渍提取4小时，过滤，反复提取 4次，合并滤液，浓缩、干燥得粗提取物A，将经过预处理的14-30目粗聚酰胺树脂装柱，粗提取物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C条件下边加溶液边搅拌粗聚酰胺树脂直至混合均勻。粗提物A与粗聚酰胺树脂重量比为1.5:1，拌样粗聚酰胺树脂上柱，然后用50%乙醇洗脱，洗脱流速为0. 2BV/h,收集洗脱液，浓缩，低温干燥，得到格里风素粗提物B，将经过预处理的50-100目细聚酰胺树脂装柱，格里风素粗提物B溶于甲醇制成溶液，在70-85°C条件下边加溶液边搅拌细聚酰胺树脂直至混合均勻。格里风素粗提物B与细聚酰胺树脂重量比为2:1，拌样细聚酰胺树脂上柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1:6:3)混合溶液洗脱，洗脱流速为0. 05BV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥得格里风素粗品；将粗品加入甲醇溶解，再经制备高效液相分离得到含量98. 5%的格里风素。所述制备高效液相填料为C18，柱规格为 30mmX250mm，检测波长262nm，流动相为甲醇-水(3070)。实施例2:
取单叶格里风根粉碎，加40%乙醇加热回流提取2小时，过滤，反复提取2次，合并滤液，浓缩、干燥得粗提取物A，将经过预处理的14-30目粗聚酰胺树脂装柱，粗提取物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C条件下边加溶液边搅拌粗聚酰胺树脂直至混合均勻。粗提物A 与粗聚酰胺树脂重量比为1:1，拌样粗聚酰胺树脂上柱，然后用65%乙醇洗脱，洗脱流速为 0. 4BV/h,收集洗脱液，浓缩，低温干燥，得到格里风素粗提物B，将经过预处理的50-100目细聚酰胺树脂装柱，格里风素粗提物B溶于甲醇制成溶液，在70-85°C条件下边加溶液边搅拌细聚酰胺树脂直至混合均勻。格里风素粗提物B与细聚酰胺树脂重量比为4:1，拌样细聚酰胺树脂上柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1 6 3)混合溶液洗脱，洗脱流速为0. lBV/h,收集洗脱液，浓缩，低温干燥得格里风素粗品；将粗品加入甲醇溶解，再经制备高效液相分离得到含量98. 3%的格里风素。所述制备高效液相填料为C18，柱规格为30mmX 250mm，检测波长26211111，流动相为乙腈-水(30:70)。实施例3:
取单叶格里风根粉碎，加95%乙醇在70°C条件下恒温浸渍提取3小时，过滤，反复提取2次，合并滤液，浓缩、干燥得粗提取物A，将经过预处理的14-30目粗聚酰胺树脂装柱， 粗提取物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C条件下边加溶液边搅拌粗聚酰胺树脂直至混合均勻。粗提物A与粗聚酰胺树脂重量比为3:1，拌样粗聚酰胺树脂上柱，然后用75%乙醇洗脱，洗脱流速为0. 5BV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥，得到格里风素粗提物B，将经过预处理的50-100目细聚酰胺树脂装柱，格里风素粗提物B溶于甲醇制成溶液，在70-85°C条件下边加溶液边搅拌细聚酰胺树脂直至混合均勻。格里风素粗提物B与细聚酰胺树脂重量比为5:1，拌样细聚酰胺树脂上柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1:6:3)混合溶液洗脱，洗脱流速为0. 08BV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥得格里风素粗品；将粗品加入甲醇溶解，再经制备高效液相分离得到含量98. 8%的格里风素。所述制备高效液相填料为C18，柱规格为 30mmX250mm，检测波长262nm，流动相为甲醇-水(5050)。实施例4:取单叶格里风根粉碎，加75%乙醇加热回流提取2小时，过滤，反复提取3次，合并滤液，浓缩、干燥得粗提取物A，将经过预处理的14-30目粗聚酰胺树脂装柱，粗提取物A溶于甲醇制成溶液，在70-85°C条件下边加溶液边搅拌粗聚酰胺树脂直至混合均勻。粗提物A 与粗聚酰胺树脂重量比为2:1，拌样粗聚酰胺树脂上柱，然后用60%乙醇洗脱，洗脱流速为 0. 25BV/h,收集洗脱液，浓缩，低温干燥，得到格里风素粗提物B，将经过预处理的50-100目细聚酰胺树脂装柱，格里风素粗提物B溶于甲醇制成溶液，在70-85°C条件下边加溶液边搅拌细聚酰胺树脂直至混合均勻。格里风素粗提物B与细聚酰胺树脂重量比为3 1，拌样细聚酰胺树脂上柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1:6:3)混合溶液洗脱，洗脱流速为0. 03BV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥得格里风素粗品；将粗品加入甲醇溶解，再经制备高效液相分离得到含量99. 2%的格里风素。所述制备高效液相填料为C18，柱规格为30mmX 250mm，检测波长26211111，流动相为乙腈-水(15:85)。
权利要求
1.一种从单叶格里风中制备格里风素的方法，其特征在于包括以下步骤取单叶格里风根粉碎，用40-95%乙醇回流或恒温浸渍提取，反复提取2-4次，合并提取液后进行浓缩、 干燥得粗提物A ；将粗提物A与经过预处理的14-30目粗聚酰胺树脂按重量比1-3:1混勻， 装入层析柱，然后用50-75%乙醇洗脱，洗脱流速为0. 2-0. 5BV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥，得到格里风素粗提物B ；将格里风素粗提物B与经过预处理的50-150目细聚酰胺树脂按重量比2-5 1混勻，装入层析柱，然后用正丁醇-乙醇-水(1 6 3)混合溶液进行洗脱， 洗脱流速为0. 03-0. lBV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥得格里风素粗品；将粗品加入甲醇溶解，再经制备液相进一步分离纯化得到纯度98%以上的格里风素成品。
2.如权利要求1所述的一种从单叶格里风中制备格里风素的方法，其特征在于所述粗提取物A与经过预处理的粗聚酰胺树脂混勻先将粗提物A溶于甲醇制成溶液，在 70-85 °C条件下边加溶液边搅拌粗聚酰胺树脂直至混合均勻。
3.如权利要求1所述的一种从单叶格里风中制备格里风素的方法，其特征在于所述格里风素粗提物B与经过预处理的细聚酰胺树脂混勻先将粗提物A溶于甲醇制成溶液，在 70-85°C条件下边加溶液边搅拌细聚酰胺树脂直至混合均勻。
4.如权利要求1所述的一种从单叶格里风中制备格里风素的方法，其特征在于所述制备液相填料为C18，柱规格为30mmX250mm，检测波长262nm，流动相为甲醇-水或乙腈-水，所述流动相甲醇的体积百分比为25-50%，所述流动相乙腈的体积百分比为15-30%。
全文摘要
一种从单叶格里风中制备格里风素的方法，单叶格里风根经粉碎，用40-95%乙醇提取，再经粗聚酰胺树脂和细聚酰胺树脂分离，得格里风素洗脱液，过氧化铝柱，下注液经浓缩，最后经制备液相精制，得格里风素纯品。本发明可大量制备格里风素纯品，收率高、产品纯度好，易于推广使用。
文档编号C07H15/203GK102286038SQ20111026398
公开日2011年12月21日 申请日期2011年9月8日 优先权日2011年9月8日
发明者刘东锋, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司