一种制备广豆根素的方法
【专利摘要】本发明公开了一种制备广豆根素的方法，属于生物医药技术领域。包括广豆根的预处理、硅胶柱层析、结晶步骤，本发明通过柱层析法先将广豆根素粗品分离出来，再将粗品进行结晶，将广豆根素充分分离出来。本发明的具有方法简单，易于操作，成本低，效率高的优点。经检测，利用本发明制得的广豆根素的纯度达到97～99%，实现了广豆根素的高纯度制备，提高了广豆根的原料利用率和广豆根素使用价值。
【专利说明】
一种制备广豆根素的方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种制备广豆根素的方法，属于生物医药技术领域。
【背景技术】
[0002]广豆根又称越南槐、山豆根，为豆科槐属蔓生性矮小灌木的干燥根及茎，是山西著名道地药材。广豆根味苦、性寒，具有清热解毒、消肿利咽的功效。药理研究表明广豆根的提取物有抗肿瘤、抗心律失常、保肝等作用。其成分中的广豆根素具有较强的抗胃溃疡作用以及抑制胃液分泌的作用。
[0003]国家知识产权局于2014年11月19日公开了一件公告号为CN104147104A，名称为“山豆根黄酮组合物的制备方法及医药新用途”的发明专利，该专利公布了从豆科植物山豆根中提取制备含有多种黄酮成分的组合物，其中包括广豆根素、广豆根酮、环广豆根素等物质，在制备α-糖苷酶抑制作用及脂肪酶抑制作用的药物中的新用途。该方法的最终产物仍然是山豆根黄酮组合物，没有将广豆根素单独分离出来，广豆根素的价值没有充分体现。
【发明内容】
[0004]本发明旨在解决现有技术中广豆根素没有单独进行提纯、分离，单组分的广豆根素的价值没有充分体现，提出一种从广豆根中分离提纯制备广豆根素的方法。
[0005]为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下:
一种制备广豆根素的方法，其特征在于:包括以下步骤:
Α.广豆根的预处理
将烘干的广豆根粉碎后，加入广豆根重量I?3倍的乙酸乙酯，回流提取后，过滤，再将滤液合并，浓缩干燥后备用；
B.硅胶柱层析
将步骤A干燥后的物料用丙酮溶解后，加入80?200目的硅胶拌样，然后进行硅胶柱层析，并用的正己烷-乙醚溶液洗脱，点板收集产物，合并含广豆根素的产物后，再次上柱，重复洗脱、点板、合并步骤，最后将多次合并的物料浓缩得到广豆根素粗品；
C.结晶
将步骤B得到的广豆根素粗品用丙酮溶解后，加入与丙酮同等体积的甲醇，然后充分振荡，并于-4°C下静置后，过滤，干燥后，得到纯度为97?99%的广豆根素。
[0006]为了更好地实现本发明，进一步地，所述广豆根粉碎后的细度为10?50目。
[0007]步骤A中，所述回流提取温度为60°C，提取次数为3次，每次4?6h。
[0008]步骤B中，所述正己烷-乙醚中正己烷与乙醚的体积比为2:1。
[0009]步骤B中，所述点板使用的展开剂为正己烷和乙醚，所述正己烷和乙醚的体积比为1:1。
[0010]点板操作具体如下:收集用正己烷-乙醚溶液洗脱的洗脱液后，用点样毛细管取少量液体分别点于硅胶板上(离板底部0.5?0.8cm);将点好样品的硅胶板放入展开缸的展开剂中，密封顶盖，待展开剂至硅胶板前沿，去除硅胶板，晾干后，喷洒显色剂显色。
[0011]步骤C中，所述丙酮的使用量为所述步骤A干燥后的物料体积的2?4倍。
[0012]步骤C中，所述_4°C下静置的时间为24?36h。
[0013]本发明的有益效果:
(I)本发明通过柱层析法先将广豆根素粗品分离出来，再将粗品进行结晶，将广豆根素充分分离出来，经检测，最终产品中广豆根素的纯度达到97?99%，实现了广豆根素的高纯度制备，提高了广豆根的原料利用率和广豆根素使用价值。本发明的具有方法简单，易于操作，成本低，效率高，产品纯度高的优点。
[0014](2)本发明步骤A中，所述广豆根粉碎后的细度为10?50目，该细度范围是最佳经济指标，即能满足用乙酸乙酯提取的收率，又不至于太细，导致成本增加和影响过滤效果的问题。
[0015](3)本发明步骤C中，所述-4°C下静置的时间为24?36 h，该结晶条件下得到广豆根素纯度更高。
【具体实施方式】
[0016]下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
[0017]实施例1
一种制备广豆根素的方法，包括以下步骤:
A.广豆根的预处理
将烘干的广豆根粉碎后，加入广豆根重量I倍的乙酸乙酯，回流提取后，过滤，再将滤液合并，浓缩干燥后备用；
B.硅胶柱层析
将步骤A干燥后的物料用丙酮溶解后，加入80目的硅胶拌样，然后进行硅胶柱层析，并用的正己烷-乙醚溶液洗脱，点板收集产物，合并含广豆根素的产物后，再次上柱，重复洗脱、点板、合并步骤，最后将多次合并的物料浓缩得到广豆根素粗品；
C.结晶
将步骤B得到的广豆根素粗品用丙酮溶解后，加入与丙酮同等体积的甲醇，然后充分振荡，并于-4°C下静置后，过滤，干燥后，得到广豆根素纯品。经检测，本实施例得到的广豆根素的纯度为97%。
[0018]实施例2
一种制备广豆根素的方法，包括以下步骤:
A.广豆根的预处理
将烘干的广豆根粉碎后，加入广豆根重量3倍的乙酸乙酯，回流提取后，过滤，再将滤液合并，浓缩干燥后备用；
B.硅胶柱层析
将步骤A干燥后的物料用丙酮溶解后，加入200目的硅胶拌样，然后进行硅胶柱层析，并用的正己烷-乙醚溶液洗脱，点板收集产物，合并含广豆根素的产物后，再次上柱，重复洗脱、点板、合并步骤，最后将多次合并的物料浓缩得到广豆根素粗品；
C.结晶将步骤B得到的广豆根素粗品用丙酮溶解后，加入与丙酮同等体积的甲醇，然后充分振荡，并于-4°C下静置后，过滤，干燥后，得到广豆根素纯品。经检测，本实施例得到的广豆根素的纯度为98%。
[0019]实施例3
一种制备广豆根素的方法，包括以下步骤:
A.广豆根的预处理
将烘干的广豆根粉碎后，加入广豆根重量2倍的乙酸乙酯，回流提取后，过滤，再将滤液合并，浓缩干燥后备用；
B.硅胶柱层析
将步骤A干燥后的物料用丙酮溶解后，加入100目的硅胶拌样，然后进行硅胶柱层析，并用的正己烷-乙醚溶液洗脱，点板收集产物，合并含广豆根素的产物后，再次上柱，重复洗脱、点板、合并步骤，最后将多次合并的物料浓缩得到广豆根素粗品；
C.结晶
将步骤B得到的广豆根素粗品用丙酮溶解后，加入与丙酮同等体积的甲醇，然后充分振荡，并于-4°C下静置后，过滤，干燥后，得到广豆根素纯品。经检测，本实施例得到的广豆根素的纯度为99%。
[0020]本实施例步骤A中，所述广豆根粉碎后的细度为10目。
[0021 ]步骤A中，所述回流提取温度为60°C，提取次数为3次，每次4h。
[0022]实施例4
一种制备广豆根素的方法，包括以下步骤:
A.广豆根的预处理
将烘干的广豆根粉碎后，加入广豆根重量I倍的乙酸乙酯，回流提取后，过滤，再将滤液合并，浓缩干燥后备用；
B.硅胶柱层析
将步骤A干燥后的物料用丙酮溶解后，加入200目的硅胶拌样，然后进行硅胶柱层析，并用的正己烷-乙醚溶液洗脱，点板收集产物，合并含广豆根素的产物后，再次上柱，重复洗脱、点板、合并步骤，最后将多次合并的物料浓缩得到广豆根素粗品；
C.结晶
将步骤B得到的广豆根素粗品用丙酮溶解后，加入与丙酮同等体积的甲醇，然后充分振荡，并于-4°C下静置后，过滤，干燥后，得到广豆根素纯品。经检测，本实施例得到的广豆根素的纯度为98.2%。
[0023]本实施例步骤A中，所述广豆根粉碎后的细度为50目。
[0024]步骤A中，所述回流提取温度为60°C，提取次数为3次，每次6h。
[0025]步骤B中，所述正己烷-乙醚中正己烷与乙醚的体积比为2:1。
[0026]步骤B中，所述点板使用的展开剂为体积比为1:1的正己烷和乙醚。
[0027]实施例5
一种制备广豆根素的方法，包括以下步骤:
A.广豆根的预处理
将烘干的广豆根粉碎后，加入广豆根重量3倍的乙酸乙酯，回流提取后，过滤，再将滤液合并，浓缩干燥后备用；
B.硅胶柱层析
将步骤A干燥后的物料用丙酮溶解后，加入100目的硅胶拌样，然后进行硅胶柱层析，并用的正己烷-乙醚溶液洗脱，点板收集产物，合并含广豆根素的产物后，再次上柱，重复洗脱、点板、合并步骤，最后将多次合并的物料浓缩得到广豆根素粗品；
C.结晶
将步骤B得到的广豆根素粗品用丙酮溶解后，加入与丙酮同等体积的甲醇，然后充分振荡，并于-4°C下静置后，过滤，干燥后，得到广豆根素纯品。经检测，本实施例得到的广豆根素的纯度为98.5%。
[0028]本实施例步骤A中，所述广豆根粉碎后的细度为40目。
[0029]步骤A中，所述回流提取温度为60°C，提取次数为3次，每次5h。
[0030]步骤B中，所述正己烷-乙醚中正己烷与乙醚的体积比为2:1。
[0031 ]步骤B中，所述点板使用的展开剂为体积比为1:1的正己烷和乙醚。
[0032]步骤C中，所述丙酮的使用量为所述步骤A干燥后的物料体积的2倍。
[0033]实施例6
本实施例与实施例5的区别在于:步骤C中，所述丙酮的使用量为所述步骤A干燥后的物料体积的4倍;所述-4°C下静置的时间为24h。经检测，本实施例得到的广豆根素的纯度为98.6%ο
[0034]实施例7
一种制备广豆根素的方法，包括以下步骤:
A.广豆根的预处理
将烘干的广豆根粉碎后，加入广豆根重量3倍的乙酸乙酯，回流提取后，过滤，再将滤液合并，浓缩干燥后备用；
B.硅胶柱层析
将步骤A干燥后的物料用丙酮溶解后，加入80目的硅胶拌样，然后进行硅胶柱层析，并用的正己烷-乙醚溶液洗脱，点板收集产物，合并含广豆根素的产物后，再次上柱，重复洗脱、点板、合并步骤，最后将多次合并的物料浓缩得到广豆根素粗品；
C.结晶
将步骤B得到的广豆根素粗品用丙酮溶解后，加入与丙酮同等体积的甲醇，然后充分振荡，并于-4°C下静置后，过滤，干燥后，得到广豆根素纯品。经检测，本实施例得到的广豆根素的纯度为98.7%。
[0035]本实施例步骤A中，所述广豆根粉碎后的细度为20目。
[0036]步骤A中，所述回流提取温度为60°C，提取次数为3次，每次4.5h。
[0037]步骤B中，所述正己烷-乙醚中正己烷与乙醚的体积比为2:1。
[0038]步骤B中，所述点板使用的展开剂为体积比为1:1的正己烷和乙醚，使用的硅胶板为F254硅胶板。
[0039]步骤C中，所述丙酮的使用量为所述步骤A干燥后的物料体积的3倍。
[0040]步骤C中，所述_4°C下静置的时间为30h。
[0041 ] 实施例8本实施例与实施例9的区别在于:
步骤C中，所述-4°C下静置的时间为36h，经检测，本实施例得到的广豆根素的纯度为
99%。
【主权项】
1.一种制备广豆根素的方法，其特征在于:包括以下步骤: A.广豆根的预处理 将烘干的广豆根粉碎后，加入广豆根重量I?3倍的乙酸乙酯，回流提取后，过滤，再将滤液合并，浓缩干燥后备用； B.硅胶柱层析 将步骤A干燥后的物料用丙酮溶解后，加入80?200目的硅胶拌样，然后进行硅胶柱层析，并用的正己烷-乙醚溶液洗脱，点板收集产物，合并含广豆根素的产物后，再次上柱，重复洗脱、点板、合并步骤，最后将多次合并的物料浓缩得到广豆根素粗品； C.结晶 将步骤B得到的广豆根素粗品用丙酮溶解后，加入与丙酮同等体积的甲醇，然后充分振荡，并于-4°C下静置后，过滤，干燥后，得到纯度为97?99%的广豆根素。2.如权利要求1所述的一种制备广豆根素的方法，其特征在于:步骤A中，所述广豆根粉碎后的细度为10?50目。3.如权利要求1所述的一种制备广豆根素的方法，其特征在于:步骤A中，所述回流提取温度为60°C，提取次数为3次，每次4?6h。4.如权利要求1所述的一种制备广豆根素的方法，其特征在于:步骤B中，所述正己烷-乙醚中正己烷与乙醚的体积比为2:1。5.如权利要求1所述的一种制备广豆根素的方法，其特征在于:步骤B中，所述点板使用的展开剂为正己烷和乙醚，所述正己烷和乙醚的体积比为1:1。6.如权利要求1所述的一种制备广豆根素的方法，其特征在于:步骤C中，所述丙酮的使用量为所述步骤A干燥后的物料体积的2?4倍。7.如权利要求1所述的一种制备广豆根素的方法，其特征在于:步骤C中，所述-4°C下静置的时间为24?36h。
【文档编号】C07D311/60GK106083794SQ201610432029
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月17日
【发明人】刘健, 林洋, 章太永
【申请人】成都圣凯生物科技有限公司