本发明创造属于食品安全检测领域，尤其是涉及一种病害肉速测试剂盒及其检测方法。
背景技术：
动物性食品含有优质的蛋白质，为人们提供了丰富的营养，但其又易于腐败变质，不健康的动物及其产品还带有致病微生物、寄生虫和一些有害物质，因此，当人们吃了这些不健康的肉类会危害健康。随着社会发展和人们生活水平的提高，动物性食品的需求不断增大，消费者开始更多地关注动物性食品的质量，为确保消费者的食品安全，相关政府及执法部门也给予高度关注。
目前，对于病害肉的检测和鉴别手段包括：感官检测、细菌学检测、PH测定、过氧化物酶检测、硫酸铜蛋白沉淀检测、细菌内毒素氧化呈色法等，其中，过氧化物酶检测是基于健康动物的信息肉品中存在过氧化物酶，而不新鲜腐败变质的肉品或病畜、弱畜的肉品均不存在或者含有极少量的过氧化物酶，因而可以通过过氧化物酶作用于过氧化脲，使其释放氧，从而氧化联苯胺，产生有色物质以断定肉品质量。然而现有的过氧化酶检测法主要基于仪器检测，检测仪器一般体积较大，不利于现场检测，而且工序一般较为繁琐，检测时间相对较长，不能适应现场快速检测和应对安全事件突发的要求。因此，开发一款适于现场检测，准确性高、稳定性好、灵敏度好、可适用多种肉品的病害肉速测试剂盒及检测方法将具有良好的市场价值。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明创造旨在提出一种适用于现场检测、准确性高、稳定性好，能够在室温下长期存放、灵敏度佳、可适用于多种肉品的病害肉速测试剂盒及操作简单快捷、检测周期短、不依赖专业人员的检测方法，以解决上述问题。
为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：
一种病害肉速测试剂盒，包括试剂A、试剂B及试剂C；所述试剂A的溶质为BSA及甘油，溶剂为PH＝4.5～5的缓冲液；所述试剂B的溶质为四甲基联苯胺，溶剂为乙醇；所述试剂C的溶质为过氧化脲及肌醇六磷酸，溶剂为纯水。
进一步的，所述试剂A中BSA的质量浓度为1～1.5g/L，甘油的质量浓度为0.3～1g/L。
进一步的，所述试剂C中肌醇六磷酸的质量浓度为0.1～1g/L。
进一步的，所述试剂B中四甲基联苯胺的质量浓度为2g/L；所述试剂C中过氧化脲的质量浓度为30g/L。
进一步的，所述试剂A中缓冲液为磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。
本发明还包括一种病害肉速测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：
(1)样品提取液的制备：称取定量待测肉，向待测肉中加入蒸馏水，搅拌过滤后，滤液即为样品提取液；
(2)取用定量样品提取液作为待测液，加入蒸馏水稀释待测液，向待测液中加入所述试剂A，摇匀，再加入所述试剂B，充分振荡后，再加入试剂C，稍加振荡后，立即观察溶液的变化；
(3)判断标准：若步骤(2)中所述溶液在2min内呈蓝绿色，则样品判定为健康肉；若在2min内呈褐色，则需要重新量取待测液，向待测液中加入多于之前的蒸馏水进行稀释后再进行后续检测操作；若在2min内无颜色变化，则样品判定为病害肉。
进一步的，所述待测肉为纯瘦肉。
进一步的，所述待测肉采集自禽类、畜类或水产类。
进一步的，所述待测肉采集自猪、牛、羊、鸡、鸭或鱼。
上述病害肉速测试剂盒的用途，所述病害肉速测试剂盒在检测猪、牛、羊、鸡、鸭或鱼肉中的应用。
相对于现有技术，本发明创造所述的病害肉速测试剂盒及其检测方法具有以下优势：
(1)本发明创造所述的病害肉速测试剂盒的试剂C中加入有具有稳定作用的肌醇六磷酸，试剂A中加入有甘油及酶保护剂BSA，能够实现试剂的长期稳定存储、检测过程中稳定反应的目的，实现检测准确性、灵敏性、稳定性的大幅提高，有效延长病害肉速测试剂盒的保存期；
(2)本发明创造所述的病害肉速测试剂盒适用于多种肉品的现场速测，操作简单快捷、不依赖于专业人员及专业器械、检测周期短、检测成本低，能够满足现场快速检测和应对安全事件突发的要求，在业内具有很好的商业应用价值。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明创造所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面结合实施例来详细说明本发明创造。
实施例1
一种病害肉速测试剂盒，包括试剂A、试剂B及试剂C；其中，试剂A、试剂B及试剂C的成分如下：
试剂A：溶质为质量浓度为1.25g/L的BSA及0.5g/L的甘油，溶剂为PH＝4.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；
溶剂B：溶质为质量浓度为2g/L的四甲基联苯胺，溶剂为乙醇；
溶剂C：溶质为质量浓度为30g/L的过氧化脲及0.3g/L的肌醇六磷酸，溶剂为纯水。
实施例2
一种病害肉速测试剂盒，包括试剂A、试剂B及试剂C；其中，试剂A、试剂B及试剂C的成分如下：
试剂A：溶质为质量浓度为1.25g/L的BSA及0.5g/L的甘油，溶剂为PH＝4.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；
溶剂B：溶质为质量浓度为2g/L的四甲基联苯胺，溶剂为乙醇；
溶剂C：溶质为质量浓度为30g/L的过氧化脲及0.1g/L的肌醇六磷酸，溶剂为纯水。
实施例3
一种病害肉速测试剂盒，包括试剂A、试剂B及试剂C；其中，试剂A、试剂B及试剂C的成分如下：
试剂A：溶质为质量浓度为1.25g/L的BSA及0.5g/L的甘油，溶剂为PH＝4.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；
溶剂B：溶质为质量浓度为2g/L的四甲基联苯胺，溶剂为乙醇；
溶剂C：溶质为质量浓度为30g/L的过氧化脲及1g/L的肌醇六磷酸，溶剂为纯水。
实施例4
一种病害肉速测试剂盒，包括试剂A、试剂B及试剂C；其中，试剂A、试剂B及试剂C的成分如下：
试剂A：溶质为质量浓度为1g/L的BSA及1g/L的甘油，溶剂为PH＝4.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；
溶剂B：溶质为质量浓度为2g/L的四甲基联苯胺，溶剂为乙醇；
溶剂C：溶质为质量浓度为30g/L的过氧化脲及0.3g/L的肌醇六磷酸，溶剂为纯水。
实施例5
一种病害肉速测试剂盒，包括试剂A、试剂B及试剂C；其中，试剂A、试剂B及试剂C的成分如下：
试剂A：溶质为质量浓度为1.5g/L的BSA及0.5g/L的甘油，溶剂为PH＝4.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；
溶剂B：溶质为质量浓度为2g/L的四甲基联苯胺，溶剂为乙醇；
溶剂C：溶质为质量浓度为30g/L的过氧化脲及0.3g/L的肌醇六磷酸，溶剂为纯水。
上述实施例1到5所述病害肉速测试剂盒进行病害肉检测时的检测方法相同(下述性能测试部分涉及到的本发明所述病害肉速测试剂盒进行检测时的方法，均采用此部分所述方法进行检测)，包括如下步骤：
(1)称取1g剪碎的纯瘦肉，放入50ml样品瓶中，加入预煮冷却过的蒸馏水10ml，搅拌1min后过滤，滤液即为样品提取液；
(2)取0.5ml样品提取液为待测液，放入10ml样品管中，用蒸馏水稀释至2ml刻度线，再加入196μL的试剂A，摇匀后，加入150μL的试剂B，充分振荡后，加入100μL的试剂C，稍加振荡后，立即观察溶液在2min内的颜色变化；
(3)判断标准：若步骤(2)中所述溶液在2min内呈蓝绿色，则样品判定为健康肉；若在2min内呈褐色，则需稀释后重新检测；若在2min内无颜色变化，则样品判定为病害肉。
对比例1
本对比例中的试剂盒，包括试剂A、试剂B及试剂C；其中，试剂A、试剂B及试剂C的成分如下：
试剂A：溶质为质量浓度为1.25g/L的BSA及0.5g/L的甘油，溶剂为PH＝4.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；
溶剂B：溶质为质量浓度为2g/L的四甲基联苯胺，溶剂为乙醇；
溶剂C：溶质为质量浓度为30g/L的过氧化脲，溶剂为纯水。
对比例2
本对比例中的试剂盒，包括试剂A、试剂B及试剂C；其中，试剂A、试剂B及试剂C的成分如下：
试剂A：PH＝4.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；
溶剂B：溶质为质量浓度为2g/L的四甲基联苯胺，溶剂为乙醇；
溶剂C：溶质为质量浓度为30g/L的过氧化脲，溶剂为纯水。
对比例3
本对比例中的试剂盒，包括试剂A、试剂B及试剂C；其中，试剂A、试剂B及试剂C的成分如下：
试剂A：溶质为质量浓度为0.5g/L的BSA及1.5g/L的甘油，溶剂为PH＝4.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；
溶剂B：溶质为质量浓度为2g/L的四甲基联苯胺，溶剂为乙醇；
溶剂C：溶质为质量浓度为30g/L的过氧化脲，溶剂为纯水。
对比例4
本对比例中的试剂盒，包括试剂A、试剂B及试剂C；其中，试剂A、试剂B及试剂C的成分如下：
试剂A：溶质为质量浓度为2g/L的BSA及0.1g/L的甘油，溶剂为PH＝4.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；
溶剂B：溶质为质量浓度为2g/L的四甲基联苯胺，溶剂为乙醇；
溶剂C：溶质为质量浓度为30g/L的过氧化脲，溶剂为纯水。
上述对比例1到4中所述试剂盒进行病害肉检测时的检测方法同实施例1到5的检测方法，在此不做赘述。
性能测试
1、准确性测试
对实施例1～5所述的病害肉速测试剂盒及对比例1～4所述试剂盒的检测准确性进行测试：市面收集新鲜健康瘦猪肉20例，死瘦猪肉10例。冷藏变质瘦猪肉10例，每例分为5份，进行测试，每份肉的提取液均采用病害肉仪器检测法进行准确性(一致性)评价，最后计算每个实施例及对比例检测200份样品的准确性，结果如表1所示。
表1
由表1可知，实施例1～5所述的病害肉速测试剂盒检测准确性远高于对比例1～4所述试剂盒。
2、稳定性检测
由于氧化物酶检测法普遍存在试剂存放不稳定，从而影响各批次检测效果的问题，对分别生产的同一批次的实施例1～5所述的病害肉速测试剂盒及对比例1～4所述试剂盒在货架存储一年，在存储一年中每间隔2个月进行一次检测，共检测6次，每次检测100例样品，以病害肉仪器检测法评价准确性，结果如表2所示。
表2
由表2可知，实施例1～5所述的病害肉速测试剂盒在存放一年后仍然具有良好的检测准确性，稳定性高，能够长期稳定存储。
3、灵敏度测试
以实施例1所述病害肉速测试剂盒为例进行灵敏度的测试：用辣根过氧化物酶(HRP)模拟不同过氧化物酶(POD)活性的肉类，设计不同浓度的HRP作为灵敏度测试标准，分别配置质量浓度为13μg/L、6.5μg/L、4.3μg/L、3.2μg/L、1.6μg/L、0.8μg/L、0.4μg/L、0μg/L的HRP溶液，采用实施例1所述病害肉速测试剂盒对上述不同浓度的HRP溶液进行检测，检测结果显示在质量浓度为0.4μg/L时即可观察到蓝绿色，即本发明所述病害肉速测试剂盒的检测灵敏度可达0.4μg/L HRP，即酶活大于0.08。
4、适用肉类测试
以实施例1所述病害肉速测试剂盒为例进行适用肉类测试：在市面上分别收集新鲜的鱼(去皮)、鸡、鸭、牛、羊、猪，选择瘦肉部分进行测试，结果如表3所示。
表3
由表3可知，本发明所述病害肉速测试剂盒适用于鱼、鸡、鸭、牛、羊、猪类肉品的检测，检测结果，除鸡肉外，其余样品均为健康肉，与采用仪器检测的检测结果一致，可见，本发明所述病害肉速测试剂盒对病害肉的检测可信度高，适用于多种肉类。
以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。